1、GB/T17778-2005预混合饲料中d-生物素的测定1范围本标准规定了用分光光度仪和高效液相色谱仪测定预混合饲料中生物素含量的两种方法。本标准规定的方法1和方法2适用于小生物素含量大于1.0mg/kg的复合预混合饲料、维生素预混合饲料的测定。提取液的浓度范围为2.0g/mL20.0g/mL。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格
2、和试验方法(neg1S03696:1987)GB/T14699.1饲料采样3方法1一分光光度法3.1原理用乙醇水溶液将试样中d-生物素提取出来，在硫酸乙醇溶液中生物素和4-二甲氨基肉桂醛生成橙色化合物，在一定范围内颜色深浅与小生物素含量成正比。3.2试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。水符合GB/T6682三级水的规定。3.2.1无水乙醇。3.2.2乙醇溶液：将90体积的乙醇与10体积的水混匀。3.2.3硫酸-乙醇溶液：将2体积的硫酸与98体积的无水乙醇混匀。3.2.44-二甲氨基肉桂醛无水乙醇溶液：2g/L。3.2.5d-生物素标准落液3.2.5.1标准储备液：准确称取
3、0.1000g小-生物素标准品溶解于乙醇溶液(3.2.2)中，定量转人100mL容量瓶中，用乙醇水溶液稀释至刻度，混匀。此液1.00mL含d-生物素1.00mg。3.2.5.2标准工作液：准确移取生物素标准储备溶液(3.2.5.1)1.00mL,于50mL,容量瓶中，加乙醇溶液稀释至刻度，混匀。此液1.00mL含-生物素20.0g。3.3仪器与设备3.3.1分光光度计（有一阶导数功能）。3.3.2实脸室用超声波提取器。3.3.3分析天平：感量0.0001g。3.4试样的制备按GB/T14699.1规定方法采样，选取饲料样品至少500g,四分法缩减至100g,磨碎，通过0.42mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，保存备用。3.5分析步骤3.5.1试样溶液的提取称取维生素预混料约2g(精确至0.0001g)、复合预混料约5g10g(精确至0.0001g),置于磨口平底烧瓶中，加入5.00mL水置超声波提取器(3.3.2)中超声20min后，再加入20mL无水乙醇1
