1、SN/T 3729.7-2013dUTP:脱氧尿苷三磷酸(deoxyuridine triphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cety ltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷tris(hydroxymethyl)aminomethaneEDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Taq:水生栖热菌(Thermus aquaticus)OD:光度密度(optical density)5方法提要提取DNA,以DNA为模版，分别采用葡萄的特异性检测引物进行PCR扩增，观察PCR的扩增现象，进行食品及饮
2、料中葡萄成分的检测鉴定，其中以葡萄果肉DNA为阳性对照，以非葡萄来源的DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照。6试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物和探针：见表1。表1引物探针序列引物/探针引物/探针序列(53)扩增片段长度靶基因内参照5端引物CTTGATTTTACCAAAGATGATGA植物核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/159 bp内参照3端引物TTCTTCGCATGTACCCGCAG加氧酶基因葡萄5端引物GCACCGTTTTCAAGACCGAT93bp葡萄类甜蛋白基因葡萄5端引物CAT
3、CAGGGCACCTAGTCTTG6.2 CTAB冲液：20 g/L CTAB,1.4 mol/L NaCl,0.1 mol/L Tris-HCl,0.02 mol/L Na2EDTA,pH8.0。6.3 CTAB液：5g/L CTAB,40mol/LNaCl6.4三氯甲烷（氯仿）。6.5异丙醇。6.670%乙醇（体积分数）。6.7 NaCl溶液(1.2 mol/L)。6.8琼脂糖：电泳纯。6.9溴化乙锭。6.10分子量标准品(100bp2000bp)(bp:base pair,碱基)。6.11电冲液：Tris 54 g,硼酸27.5 g,0.5 mol/L TE冲液(pH8.0)20 mL,加蒸馏水至1 000 mL;使用时10倍稀释。6.12溴化乙锭贮存液：用水配制成10mg/mL。6.13加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，质量浓度为40%的蔗糖水溶液。6.14 10XPCR缓冲液：氯化钾 100 mmol/L,硫酸铵 160 mmol/L,硫酸镁 20 mmol/L,Tris-HCl(pH8.8)200 mmol/L,Triton X-100 1%,BSA 1 mg/mL。2
