1、中华 人 民共 和 国国 家标 准肉与肉制品 维生素B l 含量测定G B/T 9 6 9 5.2 7 一 9 1Me a t a n d m e a t p r o d u c t s-Me t h o d f o rd e t e r mi n a t i o n o f v i t a mi n 8 1 c o n t e n t1 主肠内容与适用范围本标准规定了肉 与肉制品中 维生素B，含量的 测定方法。本标准适用于肉与肉制品中维生素B:含量的测定。2 引用标准G B 9 6 9 5.1 9 肉 与肉 制品 取样 方法3 原理 试样用酸水解使维生素B,(硫胺素)游离，维生素B:经酶解、
2、纯化后在碱性高铁氰化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的硫色素。在激发波长3 6 5 n m，发射波长4 3 5 n m处测定其荧光强度，荧光强度与硫色素含量成正比，以此计算维生素B，的含量。4 试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水.4.1 乙酸钠(G B 6 9 4):2 m o l/L 溶液。4.2 盐酸(G B 6 2 2):0.1 m o t/L 溶液。4.3 澳甲酚绿p H指示剂:变色范围:p H值为4.0(绿),-5.8(蓝)d 0.1 g 指示剂与。0 5 m o l/L 氢氧化钠溶液2.8 M I,在玛瑙乳钵中 研磨溶解，以水稀至2 0 0 m L o4.4 澳酚蓝p
3、 H指示剂:变色范围:p H值为3.0(黄)-4.6(蓝)。1 g 指示剂与。.0 5 m o l/L 氢氧化钠溶液3 m l,在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至2 5 0 m L o4.5 高峰淀粉酶:1 0%溶液4.6 氯化钾(G B 6 4 6):2 5%溶液.4.1 酸性氯化钾湘夜:每升氯化钾溶液中加入8.5 m L 浓盐酸。4.8 氢氧化钠(G B 6 2 9):1 5 Yo 溶液。4.9 铁氰化钾(G B 6 4 4):1%溶液。4.1 0 氧化剂:1 0 0 铁氮化钾溶液1 m L,用1 5 0/n 氢氧化钠溶液稀释至1 0 0 L。临用前配制。4.1 1 异丁醇。4.1 2 9 5
4、%乙醉(G B 6 7 9)c 2 0%溶液。4.1 3 酸性乙醇,2 0%乙 醇溶液用。1 m o t/L 盐酸溶液调节p H为3.4-4.34.1 4 人造沸石:市售品要经活化处理 活化方法:将粒度4 0.6 0 目的人造沸石置于烧杯中，加约5 倍量的热水搅拌，静鬓后倾出上清液弃去。重复此操作 直至上清液透明。国家技术监督局1 9 9 1 一 0 3 一 2 6 批准接着加入5 倍量的3%乙酸溶液搅拌浸泡1 0 m i n,静置后倾去上清 1 9 9 1 一 1 2 一 0 1 实施G B/T 9 6 9 5.2 7 一 9 1液，重复此操作3 次。然后加入约5 倍量热的酸性抓化钾溶液，在
5、沸水浴中加热2 5 m i n，弃去L 清液，加3%乙酸溶液洗涤两次后，用水反复洗至无抓离子为止(用硝酸银溶液检查)。将处理过的人造沸石浸没于水中保存，也可于 8 0 干燥备用。维生素B,回收率要大于8 5%e4.1 5 维生素B，标准溶液4.1 5.1 标准贮备液1 0 0 u g/m L,称取5 0.0 m g 维生素B，标准品于5 0 0 m L 棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀释至刻度，置冰箱保存。4.1 5.2 标准工作液 1 0;i g/m L;取标准贮备液 1 0.O m L，用酸性乙醉定容至1 0 0 m L 棣色容量瓶中。5 仪器和设备5.1 实验室常规设备;5.2 纹肉机:孔径不
6、超过4 m m;5.3 培养箱:可控制温度4 5 -5 0 0C;5.4 棕色具塞试管;2 5-4 0 m L;5.5 荧光分光光度计;5.6 人造沸石玻瑞层析柱:构造如图1,层析柱可控制流速为1 m L/m i n,准备方法:将脱脂棉置于毛细管顶端防止沸石流出和控制溶液流速。把悬浮于水中的人造沸石倾入层析柱中，其高度约1 0 c m(约用1.5 g 人造沸石)仔细洗下贮液槽壁上的人造沸石顺拉。在吸附过程中液面要始终高于沸石表面，防止柱内有气泡。单位:m m2 0一贮液槽吸附管毛细管图 1 玻璃层析柱5.了 高压釜。:.;试样 按G B 9 6 9 5.1 9 取样取有代表性的试样2 0 0
7、g，于绞肉机中至少绞两次使其混匀，贮于密闭容器中备用。尽快分析试样。了 分析步骤了 门水解G B/T 9 6 9 5.2 7 一 9 1 称取4 -6 g 试样(精确至0.0 0 1 g)(约含维生素B,1 0 2 5 p g)于1 5 0 m L 具塞锥形瓶中，加入0.1m o l 盐酸溶液5 0 m L，搅匀，于沸水浴中水解3 0 m i n，或者用高压釜1 2 1 一1 2 3 水解3 0 m i n。取出冷却至室温了.2 酶解 用乙酸钠溶液调节试样水解液，使p H为4.0-4.5，用滇甲 酚绿指示剂在点滴板上检查。加人高峰淀粉酶溶液5 M L,混匀，在4 5 -5 0 1 r 培养箱中
8、 保温3 h。取出冷却后用0.1 m o l 压盐酸调整p H为3.5 左右，用澳酚蓝指示剂在点滴板上检查。将溶液全部转移到1 0 0 m L 容量瓶中，用水稀释至刻度。摇匀，用滤纸过滤，取滤液备用。了.3 净化 取酶解滤液2 5.0 m L,注人人造沸石层析柱，层析柱流速控制在 1 m L/m i n 左右，弃去流出液。用3份5 m L 近沸热水洗涤层析柱，弃去流出液.用2 5 m L 6 0 -8 0 热的酸性氯化钾溶液分5 次洗脱维生素B，收集于2 5 m L 容量瓶中，冷却后用酸性抓化钾溶液定容。混匀备用。7.4 氧化 取2 支4 0 m L 具塞棕色试管，加入1.5 g 抓化钾或抓化
9、钠。再加人净化后的样液5.0 m L，一支试管中 加入氧化剂3 m L，立即旋摇试管，混匀，加入异丁醉1 0 M L 萃取，塞上塞子振摇9 0 S.静置分层。另一支试管作为空白对照，加入1 5 0 o 氢氧化钠溶液3 m L，旋摇混匀，加入异丁醉1 0 m L 萃取，静置分层，异丁醉层用无水硫酸钠脱水。7.5 荧光测定 准备好荧光分光光度计，调节激发波长为3 6 5 nn，发射波长为4 3 5 nn，狭缝为5 m m，取异丁醇萃取液，置于比 色皿中，测定氧化样品管中的荧光强度为1，空白样品管中的荧光强度为1 0.7.6 维生素B,标准的测定 取维生素B、标准工作液2.。m L.于1 5 0 m
10、 L 具塞锥形瓶中，同 样按7.1-7.5 条操作步骤进行水解、酶解、净化、氧化、测定。氧化标准管中 荧光强度为Q，空白 标准管中荧光强度为Q o。S 分析结果的计算计算公式:X 一 姜 二 李x 2 0 U 一Yo介召式中:X试样维生素B，的含量,m g/k g;j-一 氧化样品管中的异丁醉液的荧光强度;t o-一 空白 样品管中的异丁醉溶液的荧光强度;Q-一 氧化标准管中的异丁醉溶液的荧光强度;Q o 空白标准管中的异丁醉溶液的荧光强度;，-一 试样质量，9。当符合允许差规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果。9 允许差 由同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过其算术平均值的2 0%.c e/T 9 6 9 5.2 7 一 9 1附加说明:本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口.本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。本标准主要起草人王津生、张燕婉。
