1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶残留量的检测方法液相色谱 质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狊 狌 犾 犳 狅 狀 犪 犿 犻 犱 犲 狊狆 狅 狋 犲 狀 狋 犻 犪 狋 狅 狉狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书
2、前言本标准的附录、附录、附录和附录 均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、重庆出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李贤良、丁涛、张晓燕、王国民、张雷、章宇、张婧、曹淑瑞。犛 犖犜 进出口动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶残留量的检测方法液相色谱 质谱 质谱法范围本标准规定了动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶（简称：）、三甲氧苄氨嘧啶（简称：）、二甲氧甲基苄氨嘧啶（简称：）三种磺胺类增效剂残留量的制样和液相色谱 质谱质谱检测方法。本标准适用于肌肉（猪肉、鸡肉）、内脏（猪肝、牛肾、鸡肝）、牛脂肪、鸡
3、蛋、鱼肉、牛奶及蜂产品（蜂蜜和王浆）中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶三种磺胺增效剂残留量的测定和确证。方法提要试样中的磺胺增效剂用三乙胺 乙腈混合提取液或三氯乙酸 乙腈溶液提取，提取液经反相阳离子混合固相萃取柱净化、浓缩和脱脂后，用液相色谱 串联质谱仪测定和确证，外标法峰面积定量。试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。三氯乙酸。浓氨水（）。三乙胺。乙腈：色谱纯。甲醇：色谱纯。正己烷：色谱纯。甲酸：色谱纯。甲酸铵：优级纯。无水硫酸钠：灼烧，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。乙腈饱和的正己烷：正己烷中加入乙腈饱和。甲酸溶液：取 甲酸，用水稀释至 。氨
4、水 甲醇溶液：取 浓氨水，用甲醇稀释至 。乙腈 水溶液：取 水，用乙腈稀释至 。三氯乙酸溶液：称取 三氯乙酸，用水稀释至 。三乙胺 乙腈混合提取液：取适量三乙胺和乙腈，按（体积比）混合备用。三氯乙酸乙腈混合提取液：移取适量 三氯乙酸溶液（）和乙腈按（体积比）混合备用。二甲氧苄氨嘧啶（，号：，分子式：）标准品：纯度大于或等于 。三甲氧苄氨嘧啶（，号：，分子式：）标准品：纯度大于或等于 。犛 犖犜 二甲氧甲基苄氨嘧啶（，号：，分子式：）标准品：纯度大于或等于 。空白样品提取液：用不含三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶残留的样品，按照、制备空白样品提取液。标准储备液：准确称取适量三甲
5、氧苄氨嘧啶、二甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶标准品，分别用乙腈配制成浓度为 的标准储备液。此溶液在避光保存。标准工作溶液：除蜂王浆、蜂蜜和牛奶样品标准溶液用流动相起始比例溶液配制以外，其余样品根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作溶液。置于 避光保存。阳离子固相萃取柱：，或相当者；使用前用 水和 甲醇活化。微孔滤膜，有机系。仪器和设备 高效液相色谱 串联质谱仪：配电喷雾离子源（）。组织捣碎机。天平：感量为 和 。均质器：。离心机：。氮吹仪。具塞塑料离心管：。试样制备与保存 试样制备 牛奶取代表性样品 ，混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的容器内，密闭并标明标记。肌肉、
6、内脏和鱼等试样取代表性样品 ，将其切碎后，依次用捣碎机将样品加工成浆状，混匀，分装入洁净的盛样袋内，密封并标明标记。蛋取有代表性样品约 ，搅拌均匀后装入洁净容器内，密封并做好标识。蜂产品取有代表性样品量 ，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对王浆样品将其搅拌均匀。制备好的试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。试样的保存王浆、肌肉、内脏和鱼等试样于 冷冻保存；奶和蛋试样于 保存；蜂蜜试样于常温下避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取 肌肉、内脏和鱼等试样准确称取均匀试样（精确到 ）于干净 塑料离心管中，加入无水硫酸钠（），混匀后加入 三
7、乙胺 乙腈混合提取液（），用均质器 均质 ，离心 ，将有机相转移至 容量瓶中，残渣再用 提取液（）均质提取。离心合并有机相，用提取液（）定容至 ，混匀后待净化。犛 犖犜 牛奶、蜂蜜、王浆等试样准确称取均匀试样（精确至 ）于干净 塑料离心管中，牛奶和蜂蜜加入 三氯乙酸乙腈混合提取液（），蜂王浆加入 三氯乙酸提取液（），涡旋振荡 ，超声 ，离心 ，过滤纸后待净化。净化 肌肉、内脏和鱼等试样移取待净化溶液（），于 下浓缩至干。加入 乙腈 水溶液（）溶解残渣，加入 正己烷旋涡混匀 后，离心 ，将下层过 滤膜后，供液相色谱 串联质谱仪测定。牛奶、蜂蜜和王浆试样将待净化溶液（）移入固相萃取柱（），水和 甲
8、醇淋洗，氨水 甲醇（）洗脱，于 下浓缩至干。加入 乙腈 水溶液（）溶解残渣，过 滤膜后，供液相色谱 串联质谱仪测定。测定 液相色谱 串联质谱条件）色谱柱：柱，（内径），或相当者；）柱温：；）流动相：甲醇 甲酸，梯度洗脱程序参见附录 中表 ；）流速：；）进样量：；）离子源：电喷雾离子源；）扫描方式：正离子；）检测方式：多反应监测（）；）串联质谱参考条件均优化至最佳灵敏度：参见附录。定性、定量按照 液相色谱 串联质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的磺胺增效剂残留量。样品中待测物残留量应在标准曲线范围之内，如果残留量超出标准曲线范围，应用空白样品提取液进行适当稀释。在上述色谱条
9、件下，二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶的质量色谱峰保留时间约为 、。标准品的多反应监测色谱图参见附录。在相同实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的色谱峰保留时间偏差在 以内，并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表液相色谱 串联质谱定性时相对离子丰度最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验空白样品，按上述测定步骤进行。结果计算和表述用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按式（）计算样品中磺胺增效剂残留量。犡犻（犮犻犮犻，）犞犿（）犛 犖犜 式中：犡犻 试样中磺
10、胺增效剂的残留量，单位为微克每千克（）；犮犻 由标准曲线得到的样液中磺胺增效剂的浓度，单位为纳克每毫升（）；犮犻，由标准曲线而得的空白实验中的磺胺增效剂的浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（）。测定低限本方法检测低限均为，回收率参见附录。犛 犖犜 附录犃（资料性附录）流动相梯度洗脱程序表 犃 流动相梯度洗脱程序时间 甲醇 甲酸 犛 犖犜 附录犅（资料性附录）串联质谱参考条件）串联质谱参考条件：）毛细管电压：；）离子源温度：；）脱溶剂气温度：；）锥孔气流量（氮气）：；）脱溶剂气流量（氮气）：；）碰撞气流量（氩气）：；）碰撞室压
11、力（氩气）：（）；）定性离子对、定量离子对、锥孔电压、碰撞能量、驻留时间见表。表 犅 待测物定性离子对、定量离子对、锥孔电压、碰撞能量、驻留时间化合物母离子（）子离子（）锥孔电压碰撞能量 驻留时间二甲氧苄氨嘧啶 三甲氧苄氨嘧啶 二甲氧甲基苄氨嘧啶 离子为定量离子。）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。犛 犖犜 附录犆（资料性附录）二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶的多反应监测（犕犚犕）离子色谱图）图 犆 二甲氧苄氨嘧啶标准溶液的多反应监测离子色谱图）图 犆 三
12、甲氧苄氨嘧啶标准溶液的多反应监测离子色谱图犛 犖犜 ）图 犆（续）图犆 二甲氧甲基苄氨嘧啶标准溶液的多反应监测离子色谱图犛 犖犜 书书书附录犇（资料性附录）不同基质回收率表犇 不同基质回收率基质化合物添加水平（）回收率添加水平（）回收率添加水平（）回收率添加水平（）回收率猪肉 猪肝 牛肾 牛脂肪 鸡肉 鸡肝 犛 犖犜 书书书表犇（续）基质化合物添加水平（）回收率添加水平（）回收率添加水平（）回收率添加水平（）回收率鸡蛋 鱼肉 牛奶 蜂蜜 王浆 犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃、犃 狀 狀 犲 狓犅，犃 狀 狀 犲 狓犆犪 狀 犱犃 狀 狀 犲 狓犇狅 犳 狋 犺 犻
13、 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱犻 狊狌 狀 犱 犲 狉狋 犺 犲犼 狌 狉 犻 狊 犱 犻 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犺 犲犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳
14、狋 犲 犱犫 狔犑 犻 犪 狀 犵 狊 狌犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌，犪 狀 犱犮 犺 狅 狀 犵 狇 犻 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌 犕 犪 犻 狀犱 狉 犪 犳 狋 犲 狉 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲：犔 犻犡 犻 犪 狀 犾 犻 犪 狀 犵，犇 犻 狀 犵犜 犪 狅，犣 犺 犪 狀 犵犡 犻 犪 狅 狔 犪 狀，
15、犠 犪 狀 犵犌 狌 狅 犿 犻 狀 犵，犣 犺 犪 狀 犵犔 犲 犻，犣 犺 犪 狀 犵犢 狌，犣 犺 犪 狀 犵犑 犻 狀，犆 犪 狅犛 犺 狌 狉 狌 犻 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狊 狌 犾 犳 狅 狀 犪 犿 犻 犱 犲 狊狆 狅 狋 犲 狀 狋 犻 犪 狋 狅 狉 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪
16、 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犲 狊 狋狊 犪 犿 狆 犾 犲，犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犮 狅 狀 犳 犻 狉 犿 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狊 狌 犾 犳 狅 狀 犪 犿 犻 犱 犲 狊狆 狅 狋 犲 狀 狋 犻 犪 狋 狅 狉 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犫 狔犔 犆犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔狋 犪 狀 犱 犲 犿 犿 犪 狊 狊狊 狆 犲 犮 狋 狉 狅 犿 犲 狋 狉 狔（犔 犆 犕 犛犕 犛）犻 狀犪 狀 犻 犿 犪 犾狅 狉 犻 犵 狀犳 狅 狅 犱 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲狋 狅狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犮 狅 狀 犳 犻 狉 犿 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狊 狌 犾 犳 狅 狀 犪 犿 犻 犱 犲 狊狆 狅 狋 犲 狀 狋 犻 犪 狋 狅 狉狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋（狆 狅 狉 犽犪 狀 犱犮 犺 犻 犮 犽
