1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口食品中稻瘟灵残留量检测方法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犻 狊 狅 狆 狉 狅 狋 犺 犻 狅 犾 犪 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前言本标准的附录 和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入
2、境检验检疫局。本标准主要起草人：杨长志、康庆贺、吴岩、李刚、刘永、王传松、吴岚、程阳。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口食品中稻瘟灵残留量检测方法范围本标准规定了进出口食品中稻瘟灵残留量的气相色谱和气相色谱 质谱检测方法。本标准适用于大米、玉米、柑橘、苹果、菠菜、大葱、松籽仁、葵花籽仁、茶叶、鱼、牛肝、鸡肾、蜂蜜及牛奶中稻瘟灵残留量的检测和确证。方法提要试样中残留的稻瘟灵用正己烷或正己烷 丙酮、乙腈提取，提取液浓缩后，经石墨炭黑固相萃取柱、中性氧化铝固相萃取柱、氟罗里硅土固相萃取柱、固相萃取柱净化，用气相色谱仪检测、气相色谱 质谱仪检测
3、和确证，外标法定量。试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水。丙酮：色谱纯。正己烷：色谱纯。乙腈：色谱纯。甲醇：色谱纯。磷酸氢二钠。磷酸二氢钠。氯化钠。无水硫酸钠：经 灼烧，置于干燥器内备用。正己烷 丙酮溶液（，体积比）。正己烷 丙酮溶液（，体积比）。正己烷 丙酮溶液（，体积比）。甲醇溶液：取 甲醇，加入 水，混匀。甲醇溶液：取 甲醇，加入 水，混匀。饱和氯化钠溶液：称取 氯化钠，用水溶解并稀释至 。硫酸钠溶液（）：称取 无水硫酸钠，用水溶解并稀释至 。磷酸盐缓冲液（，）：称取磷酸氢二钠 和磷酸二氢钠 ，分别用水溶解并稀释至 。量取磷酸氢二钠水溶液 和磷酸二氢钠水溶液 混合于
4、烧瓶中。稻瘟灵标准品（，）：纯度大于等于。稻瘟灵标准溶液：准确称取适量稻瘟灵的标准品，用丙酮配成浓度为 的标准储备液，标准储备液可在 条件下储存个月；根据需要再用正己烷稀释成适当浓度的标准工作液，标准工作液可在条件下储存个月。石墨炭黑固相萃取柱：，。使用前依次用 丙酮、正己烷活化。中性氧化铝固相萃取柱：，。使用前依次用 丙酮、正己烷活化。备用。氟罗里硅土固相萃取柱：，。使用前依次用 丙酮、正己烷活化。备用。固相萃取柱：，。使用前依次用 甲醇、水活化。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售仪器和设备 气相色谱仪：配 检测器。气相色谱 质谱联用仪：配负化学电离源。电子天平：感量 ，。固相萃取
5、装置。微波炉：。粉碎机。组织捣碎机。离心机：。旋涡混合器。旋转蒸发器。氮吹仪。均质器：。具塞玻璃离心管：、。无水硫酸钠柱：（内径）玻璃柱，内装 高无水硫酸钠。试样制备与保存 试样制备 柑橘、苹果、菠菜取有代表性样品约 （不可用水洗涤），将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。大葱取有代表性样品约 （不可用水洗），将其可食部分切成约 的段，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。玉米、大米、茶叶、松籽仁、葵花籽仁取有代表性样品约 ，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。牛肝、鸡肾、鱼取有代表性样品约 ，将其可食部分切碎后，用组织捣
6、碎机将充分捣碎均匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。蜂蜜取有代表性样品约 。对于无结晶的样品将其搅拌均匀；对于有结晶析出的样品，在密闭情况下，将样品置于不超过 的水浴中温热，待样品全部融化后搅拌均匀，迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。试样保存玉米、大米、茶叶、松籽仁、葵花籽仁、蜂蜜和牛奶等试样于以下保存；柑橘、苹果、菠菜、大葱、牛肝、鸡肾和鱼等试样于 以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取 玉米、大米、松籽仁、葵花籽仁称取试样约（精确到 ）于 离心管中，加入无水硫酸钠（）和 乙腈（），用均质器以
7、均质 ，离心 。将上清液转移至 浓缩瓶犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售中。再用 乙腈重复提取一次，合并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入 正己烷（）溶解残渣待净化。柑橘、苹果、菠菜、牛肝、鸡肾、鱼称取试样约（精确到 ）于 离心管中，加入 无水硫酸钠和 正己烷 丙酮（）溶液，用均质器以 均质 ，离心 。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于 浓缩瓶中。再用 正己烷 丙酮（）溶液重复提取一次，合并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入 正己烷溶解残渣待净化。茶叶称取试样约（精确到 ）于 离心管中，加入 饱和氯化钠溶液（），在旋涡混合器上充分混合
8、，放置 ，加入 乙腈，用均质器以 均质 ，离心 。将上清液转移至 浓缩瓶中。再用 乙腈重复提取一次，合并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩约。将浓缩提取液转移至 分液漏斗中，加入 硫酸钠溶液（）和 正己烷，振摇 ，静置分层，将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于 浓缩瓶中。再用 正己烷重复提取一次，合并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入 正己烷溶解残渣待净化。蜂蜜称取试样约（精确到 ）于 离心管中，加入 水和 丙酮（），在旋涡混合器上充分混合 。然后加入氯化钠（）和 正己烷，在旋涡混合器上充分混合 ，离心 。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于 浓缩瓶中。再用 正己烷重复提取一次，合
9、并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入 甲醇溶液（）溶解残渣待净化。牛奶称取试样约（精确到 ）于 离心管中，加入氯化钠和 正己烷 丙酮（）溶液，在旋涡混合器上充分混合 ，离心 。将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于 浓缩瓶中。再用 正己烷重复提取一次，合并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入 正己烷溶解残渣待净化。大葱称取试样约（精确到 ）于 离心管中，置于微波炉（中火）中处理，加入氯化钠和 乙腈，用均质器以 均质 ，离心 ，将上清液转移至预先加入 磷酸盐缓冲溶液（）的 分液漏斗中。再用 乙腈重复提取一次，合并提取液于同一 分液漏斗中，加入 正己烷，振
10、摇 ，静置分层，将上清液通过无水硫酸钠柱脱水于 浓缩瓶中。再用 正己烷重复提取一次，合并提取液于同一 浓缩瓶中，旋转浓缩至近干，再用氮气流吹干。加入 正己烷溶解残渣待净化。净化 玉米、大米、松籽仁、葵花籽仁、牛肝、鸡肾、鱼将上述样液全部转移到中性氧化铝固相萃取柱（）中，控制流速在 ，弃去流出液。再自上而下将中性氧化铝固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱（）串接，加入 正己烷丙酮（）溶液洗脱，控制流速在 ，收集洗脱液。洗脱液经 氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容，供气相色谱和气相色谱 质谱仪测定。柑橘、苹果、菠菜、大葱将上述样液全部转移到石墨炭黑固相萃取柱（）中，控制流速在 ，弃去流出液。再自上而下将
11、石墨炭黑固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱串接，加入 正己烷 丙酮犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售（）溶液洗脱，控制流速在 ，收集洗脱液。洗脱液经 氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容，供气相色谱和气相色谱 质谱仪测定。茶叶将上述样液全部转移到石墨炭黑固相萃取柱中，控制流速在 ，弃去流出液。再自上而下将石墨炭黑固相萃取柱与氟罗里硅土固相萃取柱串接，加入 正己烷 丙酮（）溶液洗脱控制流速在 ，收集洗脱液。洗脱液经 氮吹仪吹干。用 甲醇溶液（）溶解残渣转移到 固相萃取柱（）中，控制流速在 ，弃去流出液。加入 甲醇溶液（）溶液洗脱，控制流速在 ，收集洗脱液。洗脱液经 氮吹仪吹至约 后，准确加入
12、 正己烷和 硫酸钠水溶液，在旋涡混合器上充分混合 ，在 下离心 。取上清液供气相色谱和气相色谱 质谱仪测定。蜂蜜将上述样液全部转移到 固相萃取柱上，控制流速在 ，弃去流出液。加入 甲醇溶液（）溶液洗脱，控制流速在 ，收集洗脱液。洗脱液经 氮吹仪吹至约 后，准确加入 正己烷和 硫酸钠水溶液，在旋涡混合器上充分混合 ，离心 。取上清液供气相色谱和气相色谱 质谱仪测定。牛奶将上述样液全部转移到氟罗里硅土固相萃取柱上，控制流速在 ，弃去流出液。加入 正己烷 丙酮（）溶液洗脱，控制流速在 ，收集洗脱液。洗脱液经 氮吹仪吹干后，用正己烷溶解并定容，供气相色谱和气相色谱 质谱仪测定。测定 气相色谱条件）色谱
13、柱：石英毛细管柱，（内径）或相当者；）色谱柱温度：初始温度 保 持 ，以 升 至 ，保 持 ，再以 升至 ，保持 ；）进样口温度：；）检测器（）温度：；）载气：氮气，纯度大于 ，恒流模式，；）进样量：；）进样方式：无分流进样，后开阀。气相色谱 质谱条件）色谱柱：石英毛细管柱，（内径）或相当者；）色谱柱温度：初始温度 保 持 ，以 升 至 ，保 持 ，再以 升至 ，保持 ；）进样口温度：；）色谱质谱接口温度：；）载气：氦气，纯度大于 ，恒流模式，；）进样量：；）进样方式：无分流进样，后开阀；）电离方式：负化学电离；）电离能量：；）离子源温度：；）四极杆温度：；）反应气：甲烷，纯度大于 ；犛 犖犜
14、 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售）测定方式：选择离子监测方式；）选择监测离子（）：定量 ，定性 、；）溶剂延迟：。气相色谱检测根据样液中被测物的含量情况，选定浓度与样液相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中稻瘟灵响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，稻瘟灵的保留时间约为 。标准品的色谱图参见附录 中图 。气相色谱 质谱检测和确证根据样液中被测物的含量情况，选定浓度与样液相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中稻瘟灵响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述气相色谱 质谱条件下，样品中待测物质保留时间与标准
15、工作溶液中对应的保留时间的偏差在，且样品中被测物质的相对离子丰度与浓度相当标准工作溶液的相对离子丰度进行比较，相对丰度允许相对偏差不超过表规定的范围，则可确定样品中存在对应的被测物。在上述气相色谱 质谱条件下，稻瘟灵的保留时间约为 。稻瘟灵标准品的气相色谱 质谱选择离子流图和全扫描质谱图参见附录中图 和图。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。结果计算和表达用 ，色谱数据处理机或按式（）计算试样中稻瘟灵残留含量，计算结果需扣除空白值。犡犃犮犞犃犿（）式中：犡 试样中稻瘟灵残留量，单位为微克每千克（）；犃 样液中稻瘟灵的峰面积
16、；犮 标准工作液中稻瘟灵的浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作液中稻瘟灵的峰面积；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（）。测定低限和回收率 测定低限本方法气相色谱和气相色谱 质谱的测定低限均为。回收率 气相色谱法测定回收率样品的添加浓度及回收率的数据见表。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售表样品的添加浓度及回收率的数据样品玉米大米松籽仁葵花籽仁柑橘苹果菠菜添加浓度（）回收率 样品大葱牛肝鸡肾鱼牛奶茶叶蜂蜜添加浓度（）回收率 气相色谱 质谱法测定回收率样品的添加浓度及回收率的数据见表。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售表样品的添加浓度及回收率的数据样品玉米大米松籽仁葵花籽仁柑橘苹果菠菜添加浓度（）回收率 样品大葱牛肝鸡肾鱼牛奶茶叶蜂蜜添加浓度（）回收率 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（资料性附录）稻瘟灵标准品气相色谱图图犃 稻瘟灵标准品气相色谱图犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犅（资料性附录）稻瘟灵标准品选择离子流色谱图图犅 稻瘟灵标准品选择离子流色谱图图犅 稻瘟灵标准品全扫描质谱图犛
