1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含量检测方法液相色谱 质谱 质谱法与高效液相色谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 犪 狋 狌 犾 犻 狀 犻 狀犳 狉 狌 犻 狋 犪 狀 犱狏 犲 犵 犲 狋 犪 犫 犾 犲狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犪 狀 犱犎 犘 犔 犆犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准的附录、附录和附录为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口
2、。本标准由中华人民共和国河南出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：杨冀州、祝伟霞、袁萍、刘亚风、郭俊峰、魏蔚。犛 犖犜 进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含量检测方法液相色谱 质谱 质谱法与高效液相色谱法范围本标准规定了水果和蔬菜制品中展青霉素的高效液相色谱检测方法和液相色谱 质谱质谱检测和确证方法。本标准适用于苹果清汁、苹果浊汁、番茄酱、山楂片中展青霉素的高效液相色谱检测方法和液相色谱 质谱质谱检测和确证方法。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议
3、的各方面研究使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法试样的制备与保存 苹果清汁从所取样品中取出有代表性样品约 ，摇匀后装入洁净容器，密封并标明标记，将试样置于条件下避光保存。苹果浊汁、番茄酱从所取样品中取出有代表性样品约 ，用玻璃棒搅拌均匀，装入洁净容器作为试样，密封标明标记，将试样置于条件下避光保存。山楂片从所取样品中取出有代表性样品约 ，用粉碎机粉碎，混和均匀，装入洁净容器作为试样，密封并标明标记。将试样置于条件下避光保存。在制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。第一法液相色谱 质谱质谱法方法提要苹果清汁用乙腈
4、稀释后直接固相萃取净化；苹果浊汁、番茄酱、山楂片样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取，吹干浓缩后固相萃取净化，液相色谱 质谱质谱测定，外标法定量。试剂和材料除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。乙腈：高效液相色谱级。冰乙酸：高效液相色谱级。乙酸乙酯。犛 犖犜 果胶酶溶液（）：活度为 。水溶液：量取 水，用冰乙酸调节 ，加水定容至 。乙酸溶液：量取 冰乙酸与 水混合。展青霉素标准品（）：，编号 ，纯度大于等于 。标准储备溶液：准确称取展青霉素标准品 （），用乙酸乙酯溶解并定容至 ，浓度相当于 ，储备液贮存于 以下，稳定个月。标准中间溶液：准确量取 标准贮备溶液（），用氮气吹干后溶
5、于 水（）中，定容至 ，浓度相当于 ，储备液贮存于，稳定个月。标准工作溶液：根据需要用空白基质溶液将标准中间溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液，标准工作溶液应在使用前配制。?净化柱或相当者）。微孔滤膜，水系。）是由?公司提供的展青霉素多功能净化柱的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。仪器和设备 液相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源（）。分析天平：感量 ，。涡旋混匀器。离心机：。氮气吹干仪。计：测量精度 。粉碎机。测定步骤 样品提取 清汁准确称取试样（精确到 ）于一具塞试管中，加入 乙腈，涡旋混匀 ，
6、于 离心 ，转移全部上清液于试管中待净化。浊汁、番茄酱、山楂片准确称取均匀试样（精确到 ）于一具塞试管中，加入 水与 果胶酶溶液（）混匀，室温下避光放置过夜，酶解后的溶液加入 乙酸乙酯，涡旋提取 ，于 离心 ，转移上层乙酸乙酯提取液，再用 乙酸乙酯重复提取一次。合并两次乙酸乙酯提取液，混匀后量取 乙酸乙酯于 水浴中氮吹浓缩至干，用 乙酸（）溶液溶解残渣，加入 乙腈混匀，转移溶液于试管中待净化。净化将?净化柱（）放于试管正上方，用手缓慢向下推柱体到试管底部，使样液以 的速度通过柱体（具体操作可参见附录）。准确量取 净化液于 水浴中氮吹浓缩至干，用 水溶液（）溶解残渣，经 滤膜过滤，供液相色谱 质
7、谱质谱测定。测定 液相色谱条件 色谱柱：?，（内径）或相当者。犛 犖犜 w w w.b z f x w.c o m 流动相：乙腈水（，体积比）。流速：。柱温：。进样量：。质谱条件 离子化模式：电喷雾电离负离子模式（）。质谱扫描方式：多反应监测（）。其他质谱参考条件参见附录。液相色谱 质谱质谱测定 定量测定根据样液中展青霉素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中展青霉素响应值均应在仪器的检测线性范围内，对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。在上述仪器条件下，展青霉素参考保留时间约为 。标准溶液的液相色谱 质谱质谱多反应监测（）色谱图参见附录中图。定性测定按照上述仪器条件测
8、定样品和标准工作溶液，如果样品的质量色谱峰相对保留时间与标准溶液在 范围内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述用数据处理软件中的外标法，或按照式（）计算样品中展青霉素残留量。犡犃犮犞犃犿（）式中：犡 试样中展青霉素的残留量，单位为纳克每克（）；犃 样液中展青霉素的色谱峰面积；犮 标准工作液中展青霉素的浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作液中
9、展青霉素的色谱峰面积；犿 最终样液所代表的试样量，单位为克（）。注：计算结果须扣除空白值。测定低限、回收率 测定低限本方法测定低限为。回收率回收率见表。犛 犖犜 w w w.b z f x w.c o m表液相色谱 质谱质谱方法回收率添加水平（）回收率苹果清汁苹果浊汁番茄酱山楂片 第二法高效液相色谱法 方法提要苹果清汁用乙腈稀释后直接固相萃取净化；苹果浊汁、番茄酱、山楂片样品先用果胶酶水解，再以乙酸乙酯提取试样中展青霉素，吹干浓缩后固相萃取净化，用配有紫外或二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。试剂和材料除特殊注明外，所用试剂和材料均同 ，。甲醇：高效液相色谱级。标准工作溶液：根据
10、需要用 水溶液将标准中间溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液，标准工作溶液应在使用前配制。仪器和设备除特殊注明外，所用设备均同 。高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。测定步骤 样品提取同。净化同。测定 液相色谱条件 色谱柱：，（内径）或相当者。流动相：甲醇水（，体积比）。流速：。柱温：。进样量：。检测波长：。液相色谱测定根据样液中展青霉素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中展青霉素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下，展青霉素参考保留时间约为 。标准溶液的色谱图参见附录中图。犛 犖犜 w w w.b z
11、f x w.c o m 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述同第章。测定低限、回收率 测定低限本方法测定低限为。回收率回收率见表。表液相色谱方法回收率添加水平（）回收率苹果清汁苹果浊汁番茄酱山楂片 犛 犖犜 w w w.b z f x w.c o m附录犃（资料性附录）固相萃取净化示意图图 犃 固相萃取净化过程犛 犖犜 附录犅（资料性附录）参考质谱条件）参考质谱条件）雾化气 （）：（）（氮气）；）气帘气（）：（）（氮气）；）喷雾电压（）：；）去簇电压（）：；）碰撞室出口电压（）：；）去溶剂温度（）：；）去溶剂气流 ：（）（氮气）；）碰撞气（）：（）（氮气）；）其他质谱参数
12、见表。表 犅 展青霉素的主要参考质谱参数化合物母离子（）子离子（）驻留时间 碰撞能量 展青霉素 注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。离子为定量离子。）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。犛 犖犜 附录犆（资料性附录）多重反应监测（犕犚犕）色谱图和液相色谱图）图 犆 展青霉素标准溶液（犵犽 犵）的重构离子色谱图图 犆 展青霉素标准溶液（犵犽 犵）的液相色谱图犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃，犃 狀 狀 犲 狓犅犪
13、 狀 犱犃 狀 狀 犲 狓犆狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲
14、狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犎 犲 狀 犪 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲犿 犪 犻 狀犱 狉 犪 犳 狋 犲 狉 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犢 犪 狀 犵犑 犻 狕 犺 狅 狌，犣 犺 狌犠 犲 犻 狓 犻 犪，犢 狌 犪 狀犘 犻 狀 犵，犔 犻 狌犢 犪 犳 犲 狀 犵，犌 狌 狅犑 狌
15、狀 犳 犲 狀 犵，犠犲 犻犠犲 犻 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 犪 狋 狌 犾 犻 狀 犻 狀 犳 狉 狌 犻 狋 犪 狀 犱狏 犲 犵 犲 狋 犪 犫 犾 犲狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊
16、犳 狅 狉犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犪 狀 犱犎 犘 犔 犆犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊狅 犳狊 犪 犿 狆 犾 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 犪 狋 狌 犾 犻 狀犻 狀犳 狉 狌 犻 狋犪 狀 犱狏 犲 犵 犲 狋 犪 犫 犾 犲狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊犫 狔犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔 犿 犪 狊 狊狊 狆 犲 犮 狋 狉 狅 犿 犲 狋 狉 狔犪 狀 犱犺 犻 犵 犺狆 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犪 狀 犮 犲犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲 狋 狅狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀
