1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 4 6 一 1 9 9 7出口肉及肉制 液品中新霉素残留量检验方法相色谱法M e t h o dr e s i d ue s i nf o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f n e o my c i nme a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t-L i q u i d c h r o ma t o g r a p h y1 9 9 7 一 0 8 一 1 5 发布1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进 出口
2、商品检验局发 布s N 0 6 4 6 一 1 9 9 7前言 本标准是根据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则第1 单元:标准的起草与表 述规则 第1 部分:标准编写的基本规定 及S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准 编写的基本规定 的 要求而编写的。其中测定方法是 参考国内外有关文献，经研究、改进和验证后而制定的。本标准同时制定了抽样和制样方法。测定低限 是根据国 际上对肉 及肉 制品中新霉素残留量的 最高限量和测定方法的灵敏度而 制定的。本标准的附录 A是提示的附录。本标准由中 华人民 共和国国 家进出口 商品 检验
3、局提出并归口。本标准由中华人民共和国宁波进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人:李佐卿、康继韬、吕建成、刘晓剑。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制 液品中新霉素残留量检验方法相色谱法s N 0 646 一 199 7 Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t io n o f n e o my c inr e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t -L i q u i d c h r o ma t o
4、g r a p h y范围本标准规定了出口肉及肉制品中新霉素残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于出口猪肉中新霉素残留量的检验。抽样和制样2.1 检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1 2 5 1 2 6 1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1 -5 0 0 1 5 5 0 1 1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 2 5 0 0 2 02.3 抽样方法 按2.2 规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始样品
5、总量不得少于2 k g，放人清洁容器内，加封后，标明 标记，及时送交实验室。如每件中无小包装或 有小包 装但每袋重量超过2 k g 者，则可用锋利刀(经灭菌)在抽出的 包件中，每件割取不少于1 0 0 g,混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2 k g。加 封后，标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 将 所取样品全部放入高速捣碎机中捣碎均匀，混匀后用四分法缩分出不少于1 k g，均分成两份，作为 试样，装人清洁容器内，加封后标明 标记。2.5 试样保存 将试样于一1 8 以下冷冻保存。注在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.中华人民
6、共和国国家进出口商品检验局 1 9 9 7-0 8-1 5 批准1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施 1S N 064 6一 19 97测定方法3.1 方法提要 用磷酸盐缓冲液一 乙 睛提取试样中 的新霉素，提取液经加 热、冷却和过滤以 除去蛋白 质和脂肪。在阳离 子交换柱上与邻苯二甲 醛进行衍生化，用四硼酸钾缓冲液一 甲 醇洗脱，洗脱液用带有荧光检测器的 高效液相色谱仪测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 除特殊规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1 乙睛。3.2.2 甲醇:紫外光谱纯。3.2.3 三乙胺.3.2.4 磷酸(8 5%)a3.2.5 氯化钠。3.2.6 磷酸
7、盐缓冲液:将3 3.4 6 g 磷酸氢二钾和1.0 4 6 g 磷酸 二氢钾溶解在水中，并定容至1 L o3.2.7 混合提取液:磷酸盐缓冲液一 乙睛(1+1),3.2.8 硼酸钾缓冲液:将2.5 g 硼酸溶于8 0 m L水中，用5 0(二/V)氢氧化钾溶液调p H至1 0.5，用水定容至1 0 0 m L,3.2.9 邻苯二甲醛试剂:将1 0 0 m g 邻苯二甲醛溶于1 m L甲 醇中，加入2 0 0 f L 2-琉基乙醇和1 0 m L硼酸钾缓冲液，用棕色瓶(有盖)贮存于冰箱中，一周内有效。3.2.1 0 碱性缓冲液:将7 6 g 四 硼酸钾溶于4 0 0 m L 水中，用5 0%(二
8、/V)氢氧化 钾溶液调p H至1 1.0,用水定容至5 0 0 m L,3.2.1 1 洗脱剂:碱性缓冲液一 甲醇(1+4)3.2.1 2 阳离子交换树脂:D 1 5 2,3.2.1 3 硫酸新霉素标准品:生化试剂，已 知纯度，7 0 0 I U/m g 以上(硫酸新霉素1 m g=1 0 0 0 I U),3.2 门4 硫酸新霉素标准溶液:称取适量的硫酸新霉素标准品(精确至。.1 mg)，用水配成浓度为。1 0 0 m g/m L 的标准储备溶液，根据需要再用水配成适当浓度的标准工作溶液。3.2.1 5 新霉素衍生物标准 溶液:将适量的标准工作溶液注入到阳 离子交换柱(3.3.6)中，按3.
9、4.2 步骤进行衍生化反应，制成新霉素衍生物标准溶液。3.3 仪器和设备3.3.1 液相色谱仪:配有荧光检测器。3.3.2 高速捣碎机。3.3.3 振荡器。3.3.4 离心机。3.3.5 过滤漏斗:滤孔为8 0 1 2 0 k m,4 0-8 0 p m,3.3.6 阳离子交换柱:1 2 0 m m X 5 m m(内径)玻璃柱。用碱性缓冲液(3.2.1 0)将阳离子交换树脂制成悬浮液，平衡 2 h,装入玻璃柱中，高度约为6 c m，用5 mL洗脱剂淋洗，流速为。.8 m L/mi n，然后用水洗至流出液呈中性，备用。3.4 测定步骤3.4.1 提取 称取试样约1 0 g(准确至。.1 g)于
10、一1 0 0 m L锥形瓶中，加人6 0 m L混合提取液(3.2.7)和2 g 氯化钠，振荡 3 0 mi n,经滤孔为 8 0 1 2 0 k m的过滤漏斗抽滤，残渣用 3 X1 0m L混合提取液洗涤。合并掳液和洗液于一 2 5 0 mL烧杯中。在沸水中加热3 0 m i n，取下，于 3 0 0 0 r/mi n 离心 2 0 min,置 4 冰箱中冷却2 0 m i n,然后经滤孔为4 0 -8 0 Ic m的过滤漏斗抽滤，收集滤液。S N 0 6 4 6 一1 9 9 73.4.2 衍生化 将 滤液注人阳 离子交换柱(3.3.6)中，用1 0 m L水洗柱，弃去 流出 液。将1 m
11、 l,邻苯二甲醛试剂注人柱中，反应5 m i n。然后加2 m L 洗脱剂洗脱柱上衍生物。弃 去前面1 m L洗脱液，收集后面 1 m L洗脱液，立即放置在一1 8 冰箱中，1 5 mi n后进行液相色谱测定。3.4.3 测定3.4.3.1 色谱条件 a)色谱柱:O D S H y p e r s il,3 p m,6 0 m m X 4.6 m m(内 径)，或相当者;b)柱温,3 5 0C;c)流动 相:7 7.5%甲醉水溶液中含。.0 9 m o l/L三乙胺和。.4 5 m o l/L 磷酸;d)流速:1.0 m L/m i n;e)激发波 长:3 4 5 n m;发射波长:4 4 5
12、 n m;f)进样量:1 0 p L,3.4-3.2 色谱测定 根据样液中新霉素含量情况，选定峰面积相近的新霉素衍生物标准溶液。标准液和样液中新霉素衍生物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，新霉素衍生物的保留时间约为 6 m i n。标准品衍生物液相色谱图见附录 A中图AI,3.4.4 空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。3.4.5 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(1)进行计算:A cV X 0.8 5 5人;二 二 八,.”2(1)式中:X 试样中新霉素 含量，m g/k g;A样液中新霉素衍生物的峰面积，mm ;A,-新霉素
13、衍生物标准溶液中新霉素衍生物峰面积，mm z;新霉素衍生物标准溶液中相当的硫酸新霉素浓度，p g/mL;V最终样液的体积，mL;m最终样液相当的试样量，9;0.8 5 5 一由 硫酸新霉 素换算成新霉素的换算系数。注:计算结果需扣除空白值。4 测定低限和回收率 测定低限本方法的测定低限为。.0 5 m g/k g,回收率猪肉中 新霉素添加浓度及其回 收率实验数据:在0.0 5 m g/k g 时，回收率 为9 0.4 0 0;在0.1 0 m g/k g 时，回收 率为9 1.6 0 0;在 0.5 0 m g/k g时，回收率为9 6.3%0s x 0 6 4 6 一1 9 9 7 附录A(
14、提示的附录)标准品色谱图图 A1 新霉素标准品衍生物的液相色谱图S N 06 46 一 1 997For e wo r d Th i s s t a n d a r d wa s d r a f t e d i n a c c o r d a n c e wi t h t h e r e q u i r e me n t s o f GB/T 1.1-1 9 9 3 D i r e c t i v e s f o rt h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t i o n-Un i t 1:D r a f t i n g a n d p r e s e n
15、 t a t i o n o f s t a n d a r d s-P a r t I:G e n e r a l r u l e s f o rd r a f t i n g s t a n d a r d s a n d S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 G e n e r a l r u l e s f o r d r a f t in g t h e s t a n d a r d m e t h o d s f o r t h e d e-t e r m i n a t io n o f p e s t i c i d e,v e t e r i n a r y d r
16、u g r e s id u e s a n d b io t o x i n s i n c o m mo d i t ie s f o r e x p o r t.”T h em e t h o d o f d e t e r mi n a t i o n o f t h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d b y r e f e r r i n g t o r e l e v a n t d o me s t i c a n d f o r e i g n l i t-e r a t u r e s t h r o u g h r e s e a r c h I mo d i f ic a t i o n a n d v e r i f i c a t i o n.I n a d d i t i o n I m e t h o d s o f s a m p l i n g a n d s a m p l ep r e p a r a t io n a r e a l s o s p e c i f ie d i n t h i s s
