1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 4 8 一 1 9 9 7出口坚果及坚果制品中地乐酚残留量检验方法Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d i n o s e b r e s i d u e si n n u t s a n d n u t p r o d u c t s f o r e x p o r t1 9 9 7 一 0 8 门 5 发布1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S N 0 6 4 8 一 1 9 9 7前言 本标准是根据G B/T 1.1
2、-1 9 9 3 标准化工作导则 第1 单元:标 准的起草与 表述规则 第1 部分:标准编写的基本规定 及S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定 的 要求进行编写的。其中 测定 方法 是参考了国内 外有关文献，经研究、改进和验证后制定的。本标准同时制定了抽样和制样方法。测定低限是根据国际上对坚果及坚果制品中 地乐酚最高残留限 量的规定 和测定方法的 灵敏度而制定的。本标准附录A为提示的附录。本标 准由中华人民共和国国家进出口 商品 检验局提出 并归口。本标 准由中华人民共和国辽宁进出口 商品 检验局负责起草。本标准主要起草人
3、:李淑岩、王春英、孙艳、修玉玲、张文惠。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口坚果及坚果制品中地乐酚 残留量检验方法Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d i n o s e b r e s i d u e s i n n u t s a n d n u t p r o d u c t s f o r e x p o r tS N 0 6 4 8 一1 9 9 71 范围 本标准规定了出口 坚果及坚果制品中 地乐酚残留量检 验的抽样、制样和气相色谱测定 方法。本标准适用于出口 栗子中 地乐酚残留
4、量的检验。2 抽样和制样2.1 检验批 以不超过 5 0 t(约 7 1 0 袋)为一检验批。同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 按式(1)计算抽样袋数:a=了 丙 (1)式中:N全批袋数;a 抽样袋数。注:a 值取整数，小数部分向前进位为整数。2.3 抽样工具2.3.1 取样铲或取样勺。2.3.2 分样板。2.3.3 盛样器:筒或袋，可密封。2.3.4 分样布或适用铺垫物。2.4 抽样方法2.4.1 倒包抽样:从堆垛的 各部位随机抽取2.2 所规定的 应抽样袋数的1 0%(每批一 般不少于3 袋)，将袋口 缝线全部 拆开，平置于 分样布或其他洁
5、净的 铺垫物上，双手紧握袋底两角，提起约成4 5 0 倾角，倒拖约1 m，使袋内 货物全部倒出。查看袋内和袋间品质是否均匀。确认情况正常 后，用取样铲随机在各部位抽取样品，并立即将样品倒入盛样器中。每袋抽取样品的 量应基本一致，并不得少于5 0 0 g,2.4.2 袋内 抽样:按2.2 规定的应抽样袋数(扣除 倒包抽样袋数)，在堆垛四周的上、中、下各层以曲线形走向随机抽取。将应抽各袋拆开 袋口 缝线3-5 针，用取样勺从开口 处抽取样品。立即 缝好袋口，并将所取样品倒入盛样器内，每袋抽取样品的量应和2.4.1 基本一致，并不得少于5 0 0 9.合并倒包和袋内 抽样所取全部样品，倒于分样布上，
6、用分样板按四分法缩分出不少于4 k g。倒入 盛样器中，加 封后标明标记，及时 送实验室。2.5 试样制备一-中华人民共和国国家进出口商 品检验局1 9 9 7-0 8-1 5 批准1 9 9 8-0 1-0 1 实施 zS N 0 6 4 8 一1 9 9 72.5.1 制样工具2.5.1.1 样品切碎机或粉碎机。2.5.1.2 筛子:2.0 m m圆孔筛。2.5.1.3 分样板。2.5.1.4 盛样瓶:具塞广口瓶。2.5.2 制样方法 抽取样品的可食部分，用四分法缩分出约2。9。用样品切碎机或粉碎机，将缩分出的样品全部粉 碎或切削成尺寸不大于1 m m、能通过2.0 m m圆孔筛的碎粒。充
7、 分混匀，均分成 两份作为 试样，分装于洁净的盛样器内，密闭，并标明标记。26 试样保存 试样于一5 以下避光保存。注:在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定方法3.1 方法提要 试样中 残留 的地乐酚经用丙酮提取后，提取液经饱和氯化钠水溶液一 正己 烷进行液一 液分 配，正己 烷提取液再经弗罗里硅土柱净化。用丙酮一 正己烷洗脱，洗脱液再以重氮甲烷试剂甲基化，生成的地乐酚甲基化衍生物(2 一 异丁基一 4,6 一 二硝基苯甲 醚)，用配有电 子俘获 检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.
8、1 丙酮:重蒸馏。3.2.2 正己烷:重蒸馏。3.2.3 丙酮一 正己烷(3+1 7),3.2.4 丙酮一 正己烷(1+1),3.2.5 无水硫酸钠:于 6 5 0 灼烧 4 h，储于密闭容器中备用。3.2.6 弗罗里硅土:6 0 1 0 0目，于 6 5 0 灼烧 6 h，储于密闭容器中。使用前于1 3 0 C 烘 1 h,注每批弗罗里硅土使用前应做淋洗曲线。3.2.7 氯化钠溶液:饱和水溶液。3.2.8 甲醉一 水溶液(c s+z)o3.2.9 地乐酚标准品:纯度)9 9 0 o,3.2.1 0 地乐酚标准溶液:准确称取适量的地乐酚标准品，用少量苯溶解，然后用正己烷稀释成浓度为0.1 0
9、0 m g/m L的标准储备溶液。根据需要再以正己 烷配成适当浓度的标准工作溶液。3.2.1 1 重氮甲烷试剂:将装有 1 0 mL氢氧化钾水溶液(6 g/1 0 m L),3 5 mL乙醇和 1 0 m L乙醚的混合液 的1 2 5 m L蒸 馏瓶内放入磁棒，并固定在磁力搅拌器加热板上的水浴中。连接滴液 漏斗和冷凝器并串连 两个1 2 5 m L的 烧瓶，烧瓶中 各置有1 0 m L乙 醚。冷凝收集管插入乙醚液中。将这两 个烧瓶置于 冰浴中。滴液漏斗内 盛有2 1.5 g 的N 一 甲 基-N 一 亚硝基-P 一 甲苯磺酚胺溶于1 4 0 m L乙醚的溶液(重氮 试剂)。加热水浴至7 0 0
10、C，进行蒸馏，蒸馏瓶内溶液边用磁力搅拌，边滴加重氮试剂，滴完 全部溶液的时间 控制在2 0 m i n 以上。当蒸馏液近于无色时，停止蒸馏，将两个烧瓶中的液体合并，并在7 0 水浴上重蒸馏。馏出 液即为重氮甲烷试剂。密封，于一1 8 保存。保存期一个月。3.3 仪器和设备3.3.1 均质器:3 0 0 0 r/m i n.3.3.2 恒温水浴。3.3.3 全玻璃系统重蒸馏装置。S N 0 648 一 19 973.3.4 旋转蒸 发器 或氮 气流浓缩装置:配有2 5 0 m L 心形瓶。3.3.5 分液漏斗:1 2 5 m L,3.3.6 弗罗里硅土净 化柱:玻璃柱，3 0 c mX 1 0
11、m m(内径)，装入弗罗里硅土5 g，上端装人少量(约2 g)无水硫酸钠，干 法装 柱，使用前用2 0 m L 正已 烷淋洗。3.3.7 试管:带旋盖(耐压并气密性的),1 0 c mX 1 3 m m(内 径)。3.3.8 气相色 谱仪:配有电 子俘获检测 器.3.3.9 微量注射器:1 0 p L,3.4 测定步骤3.4.1 提取 称取 试样约1 0 g(精确至0.1 g)于 均质瓶中，加 人5 0 m L 丙酮，于3 0 0 0 r/m i n 均质3 m i n。过滤提取液于1 0 0 m L 容量瓶中，并用5 0 m L丙酮分三次洗涤均质瓶及滤渣，洗液并人上述容量瓶中，定容。取5 0
12、 m L 提取液于心 形瓶中，在4 0 水浴中浓缩至1-2 m L,3.4.2 净化 将上述浓缩液移入预先装有 5 0 mL饱和氯化钠水溶液和 2 5 m L正己烷的分液漏斗中，激烈振荡1 m i n,静置分层。将水层移入另一个分液漏斗中。水层中再加人 2 5 mL正己烷，按上述方法重复提取一次，合 并正己 烷层。用5 0 m L饱和氯化钠水溶液洗涤正己 烷层一次，弃去水层。再加入适量无水硫酸钠，不断振摇，静置 1 h，用滤纸滤入心形瓶中。用2 0 mL正己烷分两次洗涤分液漏斗，以此洗涤液洗涤滤纸上的残留物。合并两次洗涤液于心形瓶中，在 4 0 水浴中浓缩至 1-2 mL,将上述浓缩液全部移入
13、弗罗里硅土净化柱中。用少量正己烷分三次洗涤心形瓶，洗液并入上述净化柱中，弃去流出液。注入1 0 0 m L 丙酮一 正己 烷(3+1 7)进行淋洗，弃去流出液。再注入2 5 m L丙酮一 正已烷(1+1)进行洗脱，收集洗脱液于2 5 m L容量瓶中，用正己烷定容至2 5 m L。洗脱流速为 11.5 m L/mi n,3.4.3 甲基化3.4.3.1 样液甲基化 用移液管移取洗脱液(3.4.2)5 mL于试管内，在 4 0 水浴中，通氮气流吹干。取出试管，加入。2 m L 甲 醇一 水(8+2)，微温使残渣溶解，冷却至室温。加0.5 m L 重氮甲 烷试剂，拧上旋盖，将试管置于7 0 0C恒温
14、水浴中反应5 1 0 mi n，反应时水浴液面应和反应液面相齐。取出试管，冷却至室温。拧去旋盖，将试管固 定在7 0 恒温水浴中，仅使试管圆形底部接触水面，加热2-3 m i n，直至乙醚蒸除。加入5 m L 蒸馏水和1.0 0 m L 正己 烷，加盖，用力振荡混合1 m i n，静置。上层正己 烷样液供气相色谱测定。3.4.3.2 标准工作液的甲基化 取标准工作液 1.0 m L于试管内，按 3.4.3.1 进行甲基化，最后制成 1 mL甲基化的标准工作液。3.4.4 测定3.4.4.1 色谱条件 a)色谱柱:玻璃柱，2 mX2 m m(内径)，填充物为3 写(m/m)O V-1 涂于C h
15、 r o m o s o r b W H P,8 0 -1 0 0目;b)载气:氮气，纯度)9 9.9 9 0 o,6 0 mL/mi n;c)柱温:1 7 0 0C;d)进样口温度:2 1 0 0C;e)检测器温度:2 5 0 0C;f)进样量:1 W L o3.4-4.2 色谱测定 根据样 液中 地乐酚含量 情况，选定峰高相近的甲 基化的 标准工作液。甲 基化的标准工作液和样液中地乐酚甲基 化衍生物的响 应值均应在仪器检测线性范围内。对甲 基化的标准工作液和样液等体积参插S N 0 6 4 8 一1 9 9 7进样测 定。在上述色谱条件下，地乐酚甲 基化衍生物色谱峰的保留 时间约为2.2
16、m i n。地乐酚标准品甲基化 衍生物的 色谱图 见附录A中图A l,3.4.5 空白试验 除 不加试样外，均按上述操作步骤进行.3.4.6 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中 地乐酚的 残留 含量:二。二。.(2)V-1 1-hh-式中:X 试样中 地乐酚残留 含量，m g/k g;h 样液中 地乐 酚甲 基化衍生 物的色 谱峰高,m m;h,甲 基化的标准工作溶液中 地乐酚甲 基化 衍生物的色谱峰高，m m;甲 基化的标准工作溶液中 地乐酚的浓度，K g/m L;V 样液最终定容的体积，m L;。最终样液所代表的 试样量，9。注:计算结果需扣除空白值。4 测定低限、回收率4.1 测定低限 本方法的测定低限为。.0 2 m g/k g,4.2 回收率 栗子中地乐酚的添加浓度及其回收率实验数据:0.0 2 m g/k g时，回收率为 8 7.2 4 0 o;0.0 5 m g/k g 时，回收 率为8 8.8 5 0 0;0.2 0 m g/k g 时，回 收率为9 1.6 1%.s x 0 6 4 8 一 1 9 9 7 附录A(提示的附录)标准品色谱图图A1 地
