1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 3 4 7 一 9 5出口饲料中棕曲霉毒素A的检验方法Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o ni n f o d d e r s f o r e x po f o c h r a t o x i n Aort1 9 9 5 一 0 5 一 2 9 发布1 9 9 5 一 1 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口饲料中棕曲霉毒素A的检验方法s N 0 3 47一95M e t h o d f o r t h e d e t e
2、r mi n a t i o n o f o c h r a t o x i n A i n f o d d e r s f o r e x p o r t主题内容与适用范围本标准规定了出口饲料中棕曲霉毒素A检验的抽样、制样和高效液相色谱测定方法。本标准适 用于出口豆粕 粉、玉米粕粉、菜籽粕粉等饲料中 棕曲 霉毒素A的检验。2 抽样和制样2.1 检验批 以不超过2 5 0 t(口岸 5 0 0 t)为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。2.2 抽样数堪 按一批总袋数的平方根 式(1)抽取。a=召 厄 万 .(1)式中:N一一全批袋数;a 一 一抽样 袋
3、数。注:a值取整数.小数部分向前进位为整数.2-3 抽样工具2.3.1 金属单 管抽样器:全长6 5 -7 5 c m,槽口长5 0 -5 5 c m,白 宽 1-1.8 c m，头尖形，最大外径约2.S c m，或其他等效抽样器2.3.2 取样铲2.3.3 分样器、混样布、分样台和分样板等。2.3.4 样品筒(袋、:可密封。24 抽样方法24.，袋内抽样:按 2.2 规定的抽样袋数(扣除倒包抽样袋数)，在堆垛四周上、中、下各部位以曲线形走向，随机抽取。将扦槽向下，从每袋一角依斜对角方向插入袋内，然后将扦槽旋转朝上，抽出扦样器，立即倒入盛样容器内。每袋抽取样品数量应基本一致。2.4.2 倒包抽
4、样:从堆垛的各部位随机抽取 2.2 条规定的应抽样件数的1 0%(不少于 3 包)，将袋口缝线全部拆开，平笠十分样布或其他洁净的铺垫物上，双手紧握袋底两角提起约 5 0 c m高，倒拖 1.5。长，全部倒出后，检查货物的外观、气味、有无发霉、变质等，并查看货内和货间品质是否均匀。确认情况正常后，用取样铲随机在各部位抽取样品，每包取样数量应一致。2.4.3 大样缩分:集中袋内和倒包所取的样品，倒于分样布_ 匕混匀，使用分样板按四分法缩分样品不少于4 k g，倒入盛样容器内，加封后，标明标记并及时送实验室。25 试样制备中华人民共和国国家进出口商品检验局 1 9 9 5-0 5-2 9 批准1 9
5、 9 5-1 1 一 0 1 实施 IS N 0 3 4 7 一9 5 将样品缩分到 1 k g，全部磨碎 通过 2 0目筛，混匀，均分成两份，装入洁净容器内，密封，标明标记。6试样保存将试样于 5 下避光保存。3 测定方法3.1 方法提要 样品中的棕曲霉毒素A经提取、净化、浓缩后，以乙睛-1.5%乙酸为流动相，采用高效液相色谱仪荧光检测器进行测定，外标法定量3-2 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。3.2.1 乙睛。3.2.2 三氯甲烷3.2.3 石油醚(沸程 3 0.6 0 C).3.2.4 盐酸。3.2.5 硫酸:优级纯。3.2.6乙酸。3.2.7 碳酸氢钠溶液:5
6、0 g/1-称 5 0 g碳酸氢钠溶于 1 0 0 0 mL水中。3.2.8 氯化钾溶液:4 0 g/L o称4 0 g氯化钾溶于 1 0 0 0 ml，水中。12.9 A化钾一 硫酸溶液:在6 0 0 m L化钾溶液(3.2.8)中加入 4 0 0 mL浓硫酸。3.2.1 0 提取剂:乙睛一 氯化钾硫酸溶液(3.2.9)(9 0+1 0),3.2.1 1 棕曲霉毒素A标准品:纯度)9 5 Yo3.2.1 2 棕曲霉毒素A标准贮备液:称取棕曲 霉毒素A标准品(精确至0.0 0 0 1 g)配成5.1 0 K g/m L的乙睛溶液，作为贮备液。再用紫外分光光度法标定浓度(最大吸收峰波长3 3 3
7、 n m，分子量4 0 3,摩尔消光系数为5 5 5 0),3.2.1 3 棕曲 霉毒素A标准工作液:用乙 睛将上述贮备液精确稀释成最终浓度为。.1 u g/m l的标 准工作液 上 述标准溶液均需置于棕色瓶中，低温冰箱(一1 8,C)内保存3.3 仪器和设备3.3.，高效液相色谱仪并配备荧光检测器和 自动进样设备。3.3.2 粉碎器。3.3，3 振荡器。3.3.4 旋转蒸发器。3.3.5 溶剂过滤器，附适用有机滤膜。3.3.6 一次性滤膜0.4 5 g m,3.3-7 全玻璃系统重蒸馏装气3.3.8 微量注射器:1 p L,1 0 I-5 0 p L,1 0 0 p L o3.4 测定步骤3
8、.4 门提取一 称取约1 0.0 g(精确至0.1 g)试样，置于2 5 0 m L具塞锥形瓶中，加1 0 0.0 m L提取剂(3.2.1 0)，湿润瓶塞、盖紧、振荡3 0 mi n后，以快速定性滤纸过滤于 1 0 0 mL容量瓶中，用提取剂洗涤滤渣数次.滤液最终定容至 1 0 0 mL。取定容后的滤液 5 0.0 m L于一分液漏斗内，用石油醚萃取两次(每次用量2 0 m l)。弃去石油醚层。在乙睛一 水层中加2 0 mL水，用三氯甲烷三次萃取毒素(用量依次为2 5,1 5,1 5 m l)，弃去水层。将三氯甲烷溶液用 5%碳酸氢钠溶液萃取三次(每次用量 2 0 mL)，收集水层合并液.并
9、用6 m o l/Is N 03 47 一 9 5盐酸调节水溶液p H约 1.5 后，再用三氯甲烷三次反萃取毒素(用量依次为 2 5,1 5,1 5 m L)。合并三次三氯甲烷层，并于低温冰箱内(-1 8 0C)冷冻，滤去冰(水)。然后全量移入旋转蒸发器内于3 0.5 0 C下蒸干，残渣用乙睛-1.5%乙酸(5 5+4 5)溶解，并定容至 1.0 0 mL。经。.4 5 p m滤膜滤至样品瓶内，供液相色谱仪测定。3.4.2 测定34.2.1 色谱条件 a.色谱柱:2 0 0 mm X 2.1 mm(内径),5 y m;b.固定相:H y p e r s i l OD;流动相:乙睛-1.5%乙酸
10、(5 5+4 5),经溶剂过滤器抽滤，超声波脱气;c.流速:0.2 mL/m i n;d.荧光检测器激发波长:3 3 3 n m，发射波长:4 6 0 m n.3.4-2.2 色谱测定 待上述工 作条件稳定 后，分别将标准工作液依次以2 t L,4 川,6 川 一、8 p L,1 0 I L自 动进 样(相当于棕曲霉毒素A 0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 n g)得到峰面积与进样量的 标准工作曲线(在。.2-1.0 n g 线性范围内)。分别将标准工作液和样液等体积参插进样测定，以外标法定量。上述条件下，棕曲霉毒素A的保留时间约为6.4 0 m i n a35 空白试验 不加试样，但用
11、不含棕曲霉毒素 A的豆粕粉、玉米粉或菜籽粕粉按上述测定步骤进行。3.6 结果的计算和表述 用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中棕曲霉毒素 A的含量:A,mx 1 00 0(2)式中:x试样中棕曲霉毒素A的含量，f g/k g;A样液中棕曲霉毒素 A的峰面积，MM ;A,标准工作液中棕曲霉毒素 A的峰面积，mm z;标准工作液中 棕曲 霉毒素A的浓度，p g/m L;V样液最终定容体积，mL;，最终样液所相当的样品质量，9。测定低限、回收率4.1 测定低限 本方法测定低限为2 0(i g/k g e4.2回收率 回收率实验数据:棕曲 霉毒素A添加浓度在2 0 -5 0 g 刃k g 范围内，回
12、收率为9 0.4%一9 8.9%a附加说明:本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。本标准由中华人民共和国山东进出口商品检验局和深圳进出口商品检验局负责起草本标准主要起草人李寅宾、潘坤永、张艺兵、蔡志群。P r o f e s s i o n a l S t a n d a r d o f t h e P e o p l e s R e p u b l i c o fC h i n a f o r I mp o r t a n d E x p o r t C o mm o d i t y I n s p e c t i o nMe t h o d f o r t h e d e t e
13、 r mi n a t i o n o f o c h r a t o x i n AS N 03 47一 95i n f o d d e r s f o r e x p o r t1 S c o p e a n d f i e l d o f a p p l i c a t i o nT h i s s t a n d a r d s p e c if i e s t h e me t h o d o f s a mp l i n g,s a mp le p r e p a r a t i o n a n d d e t e r m i n a t i o n b y h i g hp e
14、r f o r m a n c e l iq u id c h r o ma t o g r a p h y o f o c h r a t o x in A i n f o d d e r s f o r e x p o r t.T h i s s t a n d a r d i s a p p l i c a b l e t o t h e d e t e r mi n a t i o n o f o c h r a t o x i n A i n s o y b e a n m e a l p o w d e r,m a i z eme a l p o w d e r a n d r a
15、 p e s e e d m e a l p o wd e r f o r e x p o r t.2 S a mp l i n g a n d s a mp l e p r e p a r a t i o n2.1 I n s p e c t i o n l o t Ea c h i n s p e c t i o n l o t s h o u l d n o t e x c e e d 2 5 0 t o n s(5 0 0 t o n s a t h a r b o u r).T h e c h a r a c t e r is t i c s o f t h e c a r g o
16、w i t h i n t h e s a me i n s p e c t io n l o t,s u c hs p e c i f i c a t i o n a n d g r a d e,s h o u l d b e t h e s a me.2.2 Qu a n t it y o f s a mp l e t a k e n T h e s q u a r e r o o t o f t h e t o t a l n u m b e r o f b a g s i n a l o t s h a l l b e t a k e n a ss a mp l e d;、a s p a c k in g,ma r k,o r i g i nt h e n u mb e r o f b a g s t o b ea=丫入(1)wh e r e N-t o t a l n u mb e r o f b a g sa一n u mb e r o f b a g s t o b ei n a l o t;s a mp l e d N o t e:I f v a l u e a i s
