1、r v/T 4 4 8-2 0 0 1前言本方法能快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸醋类农药残毒本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由农业部农药检定所负责起草。本标准主要起草人:高晓辉、朱光艳、陶传江、秦冬梅、龚勇、刘光学、何艺兵。本标准由农业部农药检定所负责解释2 2 3中华人民共和国农业行业标准蔬菜上有机磷和氨基甲酸醋类 农药残毒快速检测方法N Y/T 4 4 8 一2 0 0 1R a p i d b i o a s s a y o f o r g a n o p h o s p h a t e a n d c a r b a ma t ep e s t i c i d e r e s
2、i d u e s i n v e g e t a b l e s范围 本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸醋类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。本标准适用于叶菜类(除韭菜)、果菜类、豆菜类、瓜菜类、根菜类(除胡萝 卜、菱白等)中甲胺磷、氧化乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、杀扑磷、敌敌畏、克百威、涕灭威、灭多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲蔡威、丙硫克百威、速灭威、残杀威、异丙威等的农药残毒快速检测2 原理 有机磷和氨基甲酸醋类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酞胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酞胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。
3、加人反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酷类农药的残毒情况。即:乙酞胆碱醋酶+有机磷或氨基甲酸醋类农药一酶活性被抑制 r 活性被抑制一样本中含有机磷或氨基甲酸醋类农药乙酞胆碱醋酶+样本提取液 L-活性正常一样本中不含有机磷或氨墓甲酸酷类农药如以乙酞硫代胆碱(A s C h)为底物，在乙酞胆碱酷酶(A C h E)的作用下乙酞硫代胆碱(A s C h)水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸(D T N B)产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计4 1 0 n m处有最大吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度(用抑制率表示
4、)。3 试剂p H 8 磷酸缓冲液。丁酞胆碱醋酶:根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，A A值控制在0.4-0.8 之间底物:碘化硫代丁酞胆碱(s-b u t y r y l t h i o c h o l i n e i o d i d e，即B T C D，用缓冲液溶解。显色剂:二硫代二硝基苯甲酸 5,5-d i t h i o b i s(n i t r o b e n z o i c a c i d，即D T N B)，用缓冲液溶解引3.233到4 仪器4.了 波长为4 工。n m士3 n n)专用速测仪，或可见光分光光度计。中华人民共和国农业部2 0 0 1 一 0 6-0 1 批准2
5、 0 0 1 门0 一 0 1实施N Y/T 4 4 8 一2 0 0 1电子天平(准确度。1 9)微型样品混合器台式培养箱可调移液枪:(1 0 1 0 0 1,L,1-5 m l)不锈钢取样器(内径 2 c m),配套玻璃仪器及其他配件等。们434445概4.75 检测5 门取样 用不锈钢管取样器取来 自不同植株叶片(至少 8 1 0片叶子)的样本;果菜从表皮至果肉 1-1.5 c m 处取样。5.2 检测过程 取2 g 切碎的样本(非叶菜类取4 g),放人提取瓶内，加人2 0 m L缓冲液，震荡1 -2 m i n，倒出提取液，静止3 -5 m i n;于小试管内分别加人5 0 I L酶,
6、3 m L样本提取液，5 0 p L显色剂，于3 7-3 8 C 下放置3 0 m i n后再分别加人5 0 M L底物，倒人比色杯中，用仪器进行测定。5.3式中检测结果计算检测结果按式(1)计算:抑 制 率(、)尹气产=x l o o .。二(1):A A对照组 3 m i n 后与 3 mi n前吸光值之差;A A,样本 3 mi n后与3 m i n前吸光值之差。抑制率)7 0%时，蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酷类农药残毒。此时样本要有2 次以上重复检测，几次重复检测的重现性应在 8 0%以上6 最低检出浓度 本方法的最低检出浓度见表 1,表 1农药中文名英文通用名毒性最低检出浓度(溶
7、液)m g/L最低检出浓度 蔬菜)m g/k g甲胺磷高毒1-23 5氧化乐果o me t h o a t e高毒0.7 22 5对硫磷p a r a t h i o n高毒0.7 1.52-4甲拌磷p h o x me高毒0.9-0 1 71-2久效磷mo n o c r o t o-p h o s高毒0.3-0.71 2倍硫磷f e n t h i o n高毒2-2.56 7杀扑磷me t h i d a t h i o n高毒2.2.56-7敌敌畏d i c h l o r o v o s中毒0.10.3克百威c a r b o f u r a n高毒0.3-0.71-2涕灭威a l d
8、 i c a r b高毒0.3 0.71-2灭多威m e t h o m y l高毒0.3y0.71-2抗蚜威p i r i mi c a r b高毒0.5-11.5 3N Y/T 4 4 8 一 2 0 0 1表 1(完)农药中文名英文通用名毒性最低检出浓度(溶液)m g/l最低检出浓度 蔬菜)m g/k g丁硫克威c a r b o s u l f a n中毒0.7-12-3甲蔡威c a r b a r y l中毒0.3 0.71-2丙硫克百威b e n f u r a c a r b中毒0.3-0.71 一 2速灭威M TM C中毒0.5-0.81.5-2.5残杀威p r o P o x u r中毒0.3-0.81.5 一 2.5异丙威i s o p r o c a r b中毒0.5 0.81.5-2.5丁酞胆碱醋酶对甲基对硫磷、乐果、毒死4*.-0磷等农药不太灵敏，检出浓度均在1 0 m g/k g以上。2 26
