1、 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4682001 动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱-质谱法 2001-09-03 发布 2001-10-01 实施 中华人民共和国农业部 发 布NY/T 4682001 前前 言言 本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位：农业部畜禽产品质量监督检验测试中心、北京师范大学分析测试中心。本标准主要起草人：杨清峰、邓志威、谢孟峡、陈刚、薛毅、单吉浩。INY/T 4682001 动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱-质谱法 1 范围范围 本标准规定了以包相色谱-质谱（GC-MS）法测定动物组织中盐酸克伦特罗残留的方法。本标准适用于动物肝脏组
2、织中盐酸克伦特罗的测定。方法是最低检出限为 2g/kg。2 原理原理 样品用-盐酸葡萄糖醛甙酶或芳基硫酸酯酶，在pH5.2 的缓冲溶液中消化。萃取的组织样液通过离心和过滤分离。萃取液用C18和SCX小柱，固相萃取净化，分离的药物残留经过双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱仪测定。3 试剂和材料试剂和材料 3.1 乙酸铵缓冲液（20 mmol/L，pH5.2）：溶解 1.45 g 乙酶铵于 500700 mL 水中，用乙酸调整 pH值为 5.2 并稀释到 1 L。3.2 盐酸葡萄糖醛甙酶或芳基硫酸酯酶溶液 30 U/mL 或相当者。3.3 30 mmol/L
3、盐酸：稀释 30 mL 1 mol/L 盐酸到 1 L 蒸馏水中。3.4 甲醇：分析纯。3.5 氨化甲醇（amonium methanol）：4%。用甲醇稀释 4 mL 氨溶液（密度 0.88 g/mL）至 100 mL。3.6 双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTRA）。3.7 甲苯：分析纯。3.8 C18小柱：supelclean LC-18 Sep Pak小柱 500 mg，3 mL。3.9 SCX 小柱：supelclean，LC-SCX Sep Pak 小柱 500 mg，3 mL。3.10 盐酸克仑特罗标准溶液 3.10.1 储备液：精确称取适量的盐酸克仑物罗（含量不少于 98.5%），
4、用甲醇配成浓度约 1 mg/mL 的标准储备液，储于冰箱中。有效期 3 个月。3.10.2 工作液：将储备液用甲醇稀释为 0.052.0 g/mL，存放在冰箱中备用。4 仪器及设备仪器及设备 4.1 离心瓶：50 mL，具塞。4.2 Sep-Pak 真空接头。4.3 具聚四氟乙烯拧盖的试管。4.4 匀浆机。4.5 机械真空泵。4.6 旋涡混合器。4.7 恒温箱：精度为3。4.8 GC-MS 联用仪：装有弱极性或非极性毛细管柱的气相色谱仪和具电子轰击离子源及检测器。5 分析步骤分析步骤 1NY/T 4682001 5.1 提取提取 准确称取已绞碎的肝脏样品（101.0）g，于 50 mL 具塞的
5、离心管中。加入 20 mmol/L 的乙酸铵缓冲溶液 20 mL，均质 5 min。加入 50L-盐酸葡萄糖醛甙酶溶液，摇匀、超声 15 min，于 37酶解 18 h。于 3 000 r/min 离心 5 min，过滤上清液，收集滤液。5.2 净化净化 装好真空泵和接管，将C18和SCX固相萃取柱按从上到下的顺序安装。依次用 5 mL甲醇、5 mL水和 5 mL 30 mmol/L盐酸活化。取 5 mL滤液至C18柱中，依次用 5 mL水、5 mL甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，保持抽气 5 min使柱中的液体逐渐枯竭，取下C18柱，用 5 mL 4%氨化甲醇淋洗SCX柱并收集流出液于
6、具塞玻璃试管中。5.3 测定测定 5.3.1 衍生化衍生化 用氮气吹干上述流出液，用 100L 甲苯溶液残渣，加入 100L BSTFA，加盖并于旋涡混合器上震荡，在 80的烘箱中加热 1 h。蒸干多余的溶剂，用 0.50 mL 甲苯溶解，取适量的盐酸克仑特罗标准工作液，同时衍生化。用 GC-MS 联用仪选择离心监测方式检测。5.3.2 GC-MS 测定参数设定测定参数设定 色谱柱：HP-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷，30 m0.25 mm（内径），0.25m（膜厚）；进样口温度：220；进样方式：不分流；进样体积：1L；柱温程度：70（保持 0.6 min），以 25/min 升温至 200
7、（保持 6 min），以 25/min 升温至280（保持 5 min）；载气：氦气；流速：0.9 mL/min（恒流）。GC/MS 传输线温度：280；溶剂延迟：8 min；分析器温度：200；四极杆温度：106。选择离子监测：（M/Z）86，243，262，277。5.4 定性定量方法定性定量方法 5.4.1 定性定性 样品峰与标样的保留时间之差不多于 2 s，匹酸度值应不大于 800，当匹配度值小于 800 时，应通过人工比较选择离子的丰度，以基峰百分数表示。5.4.2 定量方法定量方法 选择离子监测（SIM）法计算峰面积，根据样品液中盐酸克仑物罗含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品液中盐酸克仑物罗响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品液等体积参插进行测定。6 分析结果的表述分析结果的表述 每千克试样中盐酸克伦特罗的质量按式（1）计算：X=mAVCAss（1）2 NY/T 4682001 式中：X试样中克仑特罗列留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A样液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面积；As标准工作液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面积；Cs标准工作液中盐酸克仑特罗的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V样液量终定容体积，单位为毫克（mL）；m最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。3
