1、I C S 6 7.1 2 0X 0 4备案号:1 4 1 6 9-2 0 0 4中华 人 民共和 国 国 内贸易 行 业标 准S B/T 1 0 3 8 8-2 0 0 4畜禽肉中磺胺二甲A M Hit 磺胺甲A;,哇的测定De t e r mi na t i on o f s u l f ame t ha zi ne and s ul f a m e t ho xa z ol ei n me a t o f l i v e s t o c k a n d p o u l t r y2 0 0 4-0 8-0 4 发布2 0 0 4-0 9-0 1实施中华人民共和国商务部发 布S B/T 1
2、 0 3 8 8-2 0 0 4月 U吕 本标准由中华人民共和国商务部提出。本标准由商务部屠宰技术鉴定中心负责起草，中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、河北省疾病预防控制中心参加起草 本标准主要起草人:杨祖英、金社胜、刘震、宋书锋、韩会新、张新玲、刘文娟、王贵际。本标准委托商务部屠宰技术鉴定中心负责解释。S B/T 1 0 3 8 8-2 0 0 4畜禽 肉中磺胺二甲啥咤、磺胺 甲P E 4的测定范 围本标准规定了用高效液相色谱法测定畜禽肉中磺胺二甲呛吮.磺胺甲w哇的残留量。本标准适用于畜禽肉中磺胺二甲嗜陡.磺胺甲嗯哇的测定。2原 理 样品中磺胺二甲喃吮、磺胺甲唔噢经乙睛+三氯甲烷(l o
3、v-1 V)提取后，又经过液一 液分配转人水层进行净化后，用紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。3试荆和材料 以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。3.1 乙睛(优级纯，作流动相用)。3.2 甲醇(优级纯)。3.3正 己烷。3.4 三氯甲烷。3.5 乙睛+三氯甲烷(l o v 十1 V).3.6乙睛+三氯甲烷(2 V+1 V)o3.7 硫酸钠。3.8 硫酸钠溶液:2%水溶液(质量浓度)。3.9 0.0 1 mo l/L磷酸盐缓冲液:3.5 8 g 磷酸氢二钠+1.5 6 g 磷酸二氢钠，用水溶解并定容至1 0 0 0 mL摇匀后，通过。.4 5 l c m微孔滤膜过滤
4、。3.1 0 冰乙酸。3.1 1 标准品:纯度)9 9%.3.1 1.1 磺胺二甲喃吮3.1 1.2 磺胺甲唔哇。3.1 2 标准溶液3.1 2.1 标准储备液:准确称取磺胺二甲唾陡、磺胺甲蟋哇各 1 0.0 mg，分别用乙睛溶解，各移人1 0 0 mL 容量瓶中，并用乙睛稀释定容，摇匀。此溶液浓度各为 1 0 0 p g/mL,贮于冰箱 中，有效期 3个 月。3.1 2.2 混合标准中间液:分别吸取标准储备液各 5.0 m L于5 0 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。即得含磺胺二甲嗜陡、磺胺甲嗯哇分别为 1 0.0 k g/mI的标准中间液。贮于冰箱中，有效期 1个月。3.1 2.3
5、 混合标准工作液:分别吸取混合标准中间液0,0.0 5,0.1 0,0.2 5,0.5 0 和 1.0 m工，分别放人各自的1 0 mL容量瓶中，各用流动相稀释至刻度，摇匀，即得混合标准工作液，含磺胺二甲嗜咤、磺胺甲唔哇分别为。，0.0 5,0.1 0,0.2 5,0.5 0,1.0 0 l e g/mL的标准系列溶液。S B/T 1 0 3 8 8-2 0 0 44 仪器 和设 备4.1 高效液相色谱仪:附紫外检测器。4.2 旋转蒸发仪。4.3涡流混匀器4.4 超声波发生器。4.5 旋转蒸发仪。4.6 微孔 滤膜过滤器5 测定步骤5.1 试样处理 取2 0 0 g 试样绞碎，称取5.0 g精
6、确至。.0 0 g)绞 碎后的 试样，置于塑料试管中，加人约1 g 硫酸 钠，乙睛+三氯甲烷(1 0 V+1 V)2 0 mL,超声提取 1 5 mi n,2 5 0 0 r/m i n离心 3 mi n，过滤取滤液于蒸发瓶中，残渣再加乙睛+三氯甲烷(1 0 V+1 V)2 0 ml，超声提取 1 5 m i n,2 5 0 0 r/min离心 3 min，过滤合并滤液于蒸发瓶中，于4 0 水浴旋转蒸发仪上蒸发至干(如果量大，可分两次蒸)。残渣加人 2.0 mL2%硫酸钠水溶液和 3.0 mL正己烷，在涡流混匀器上剧烈混合。转入离心管中，4 0 0 0 r/m i n离心3 m i n,用吸管
7、吸去 层正己烷，并弃去。再用 3.0 mL正己烷洗水相一次，同法弃去正己烷。向水相中加人3 0 ml 一 乙睛+三氯甲烷混合溶剂(2 V+1 V)，于涡流混匀器上剧烈混匀，用吸管吸去上层液并弃去。下层有机相转人蒸发瓶中，于4 0 水浴中旋转蒸发至干。准确加人 1.0 m L流动相溶解残渣，于涡流混匀器上混匀 3 mi n 通过。.4 5 po rn的微孔滤膜过滤。滤液作 HP L C分析5.2测定5.2.1 液相色谱参考条件 a)色谱柱 Hy p e r s i l OD S 2 2 5 0 mmX4.6 mm(内径)，粒径5 p m;b)流动相:甲醇+0.0 1 ml/1磷酸盐缓冲液+冰乙酸
8、=2 5+7 5+1.1;c)检测波长:2 7 0 n m;d)流速:1.0 ml./mi n.5.2.2 标准曲线 依照上述色谱条件，分别进标准工作液各个点。每个标准液进 2 0 t L,测定其峰面积，然后以标准液浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数5.2.3 样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液 2 0以，进行 HP L C分析。6结果5.1 计算 将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按式(n分别计算供试样品中磺胺二甲啼 l!;t.磺胺甲n噢的含量c 只V又1 0 0 0阴 X 1 0 0 0(1)式 中:X-样品中磺胺二甲啼咙(或磺胺甲唔哇)的含量，单位为毫克每千克(mg/k g);被测液中磺胺二甲嚓 Rg-(或磺胺甲a?2k 4)的含量，单位为微克每毫升(I g/ml _);S B/T 1 0 3 8 8-2 0 0 4V 被测液体积，单位为毫升(M I,);m一 一样品质量，单位为克(g),6.2 检出限 本方法检出限为 0.0 1 p g/mL，当取样量为 5 g时，方法的最低检出量为 2 p g/k g7允许差同一分析者同时或相继两次测定结果之差不得超过均值的 巧%。
