1、S C 1 0 2 7-1 9 9 8前言 尼罗罗非鱼原产非洲，7 0 年代后期引进我国。为了鉴定尼罗罗非鱼，保护和保存尼罗罗非鱼优良的性状及种质，防止苗种生产过程中混杂和退化，并开展有效的种质监测，特制定本标准。本标准主要是“八五”科技攻关成果，并吸取了前人的有关资料 本标准的附录 A、附录 B是标准的附录。本标准的附录 C是提示的附录。本标准由农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位:上海水产大学、中国水产科学研究院长江水产研究所。本标准主要起草人:李思发、赵金良、蔡完其、周碧云、吕国庆、范兆廷、徐忠法。2 5 8中华人民共和国水产行业标准
2、尼罗罗非鱼s c 1 0 2 7 一 1 9 9 8N i l e t i l a p i a1 范 围本标准给出了尼罗罗非鱼(O r e o c h r o m i s n i l o t i c u s)的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性以及 检测方法。本标准适用于尼罗罗非鱼的种质鉴定。2 名称与分类2.1 学名 尼罗罗非鱼(O r e o c h r o m i s2.2 分类位置 属妒形目(P e r c i f o r m e s),n i l o t i c u s)丽鱼科(C i c h l i d a e),罗非鱼属(O r e o c h r o m i s)e3 主
3、要形态构造特征3.1 外部形态特征3.1.1 外形 体高，侧扁。头部平直或稍隆起。体被栉鳞。侧线断折，呈不连续的两行。尾鳍末端为钝圆形，不分叉。成鱼身体两侧有与体轴垂直的黑带9 条。背鳍、臀鳍及尾鳍上均有黑白相间的斑点，在背、臀鳍上呈斜向排列，尾鳍上的斑点呈线条状垂直排列，成鱼在 1 7 条以上。性成熟雄鱼的尾鳍、臀鳍及背鳍边缘呈。背鳍边缘黑色。幼鱼阶段背鳍有一个大而显著的斑点，以后逐渐消失。尼罗罗非鱼的外部形态见图 t o 图 1 尼罗罗非鱼外形2 可数性状2.1 背鳍鳍式:D X NX V u 1 0-1 4.色下1.红33中华人民共和国农业部 1 9 9 8-0 3-2 3 批准1 9
4、9 8 一 0 9-0 1实施S C 1 0 2 7 一 1 9 9 831.2.2 臂鳍鳍式:A9 8-1 1.3.1.2.3 上侧线鳞数:1 3-2 6 03.1.2.4 下侧线鳞数:1 3-2 0.3.1.2.5 第一鳃弓外侧鳃耙数:2 7-3 1 03.1.2.6 下咽齿:左右下咽骨愈合上有浓密的蓖齿。3 门.3 可量性状 对于体长1 0.0-1 7.8 c m，体重2 6.8 -2 1 8.3 g 的个体，实测性状比例值见表1,表 1 实测性状比例值全长/体长体长/体高体长/头长头长/吻长头长/眼径头长/眼间距体长/尾柄长尾柄长/尾柄高l.2 3 5 士0.0 3 82.4 0 7
5、士0.1 5 93.2 0 2 士0.2 0 9 3.0 7 7 士0.7 1 0 4.2 6 3 士0.4 3 8 2.1 8 2 士0.3 4 81 0.0 2 0 士1.3 4 90.6 7 9 士0.0 7 93.2 内部构造特征3.2.1 缥 无缥管，有缥腔，二室，前室较后室大。3.2.2 脊椎骨 脊椎骨总数为3 1 3 33.2.3 腹膜 浅黑 色。4 生长与铁殖4，生长 不同年龄组尼罗罗非鱼在池养条件下体长、体重的实测值见表2。与表2 对应的不同年龄组的鱼体长、体重生长关系式见附录C(提示的附录)。表 2 池养条件下尼罗罗非鱼体长、体重实测值年龄，龄0 1 实测体长，c m1 2
6、.5 士0.61 7.2 士1.6实测体重，97 4.3 士 1 1.81 9 2.1 士 5 7.11)年龄根据实际观察养殖记录而确定，4.2 繁殖4.2.1 性成熟年龄:在适温条件下，雌、雄鱼初次性成熟约为4月龄。4.2.2 性腺一年成熟多次，分批产卵，由雌鱼口孵。4.2.3 怀卵量:初次性成熟的个体平均怀卵量见表 3。表 3 初次性成熟的个体平均怀卵量年龄，月4体重，91 4 1.8 士 5 4.9绝对怀卵量，粒1 3 3 5.7 士 4 5 6.4相对怀对量，粒/91 0.5 土5.15 遗传学特性5.1 细胞遗传学特性5 门.飞 染色体数2 6 0S C 1 0 2 7 一 1 9
7、9 8 体细胞染色体 2 倍数，2 n=4 4.5.1.2 核型 亚中部着丝粒染色体(s m组)3 对;亚端部着丝粒染色体(s t 组)1 2 对;端部染色体(t 组)7 对，没有中部着丝粒染色体(m组)，染色体臂数(N F)5 0(见图 2),)1 l n 8。，几 几 1 t j 1此日、U、矛、，八】、n众六八 泛 n 飞 什 6肠.乞肠 1 5 n 、巨 九(、0八hft 乙住 图 2 尼罗罗非鱼染色体组型5.2 生化遗传学特性5.2.1 肌肉中乳酸脱氢酶(L D H)同工酶肌肉中乳酸脱氢酶(L D H)同工酶酶谱见图 3,打1八In 图 3 尼罗罗非鱼肌肉L D H同工酶电泳酶谱乳酸
8、脱氢酶(L D H)同工酶酶带扫描图见图4,LDHLD Hz图 4 尼罗罗非鱼肌肉 L D H 同工酶酶带扫描图群体变异范围尼罗罗非鱼(我国 1 9 7 8 年引进的群体)的多态座位比例为 1 1.8%，平均杂合度为。.0 4 0.6 检测方法6.1 繁殖力的测定 在繁殖季节，将产卵前性腺发育成熟的尼罗罗非鱼亲鱼进行活体解剖，用电子天平称取体重，空壳重和性腺重(精确到。-0 1 g)，同时称取 1.0 g卵样品2份，在解剖镜下分别计数，计算每克卵的平均卵S C 1 0 2 7 一 1 9 9 8粒数，卵巢中所含的全部卵粒数即为绝对怀卵量，单位体重(9)所含的卵粒数为相对怀卵量。62 染色体的检
9、测6.2 门标本制备 采用体内注射植物血凝聚素(P H A)，取肾细胞悬液滴片，空气干燥制片，吉姆萨(G i e ms a)染色。吉姆萨染色液的配制见附录A(标准的附录)。62.2 测定染色体数 在显微镜油镜下观察，计数 1 0 0 个以上清晰、分散良好的中期分裂相的染色体数目，测定染色体数。6.2.3 组型分析 选择部分最佳中期分裂相，进行显微摄影，按放大照片剪贴配组，进行染色体组型分析。染色体的形态类别，按下列规定划分，即臂比 1.0-1.7为中部着丝粒染色体(m组);1.7 -3.0为亚中部着丝粒染色体(s m组);3.0-7.。为亚端部着丝粒染色体(s t 组);7.0-c c 为端部
10、着丝粒染色体(t 组)。6.3 R酸脱氢酶(L D H)同工酶酶谱6.3.1 样品的采集与保存 先剪断腹侧主动脉放血，活体解剖，取背部白肌，放人编号的小塑料袋中，液氮中保存。运回实验室后，置于一2 5 C 冰箱中保存。6.3.2 样品制备 样品加 3 0 辅酶 I 液匀浆，低温离心，至上清液澄清。整个制备过程均在低温下操作。6.13 电泳分离 用水平平板电泳仪及 4.0%聚丙烯酞胺凝胶电泳分离。加样前，预电泳:5 0 m A,3 0 mi n。加样后，前电泳 2 5 m A,1 0 m i n;正式电泳:2 7 5 V,1 0 0 m i n。电泳结束后，放人预先配好并在3 7 恒温箱中保温的
11、同工酶染色液中染色。同工酶染色液的配制见附录 B(标准的附录)。6.3.4 扫描测定 用激光扫描仪对电泳图谱进行扫描。2 62S C 1 0 2 7 一 1 9 9 8 附录A (标准的附录)吉姆萨(G i e m s a)染色液配制A l G i e m s a 染色母液的配制称取。.5 g G i e ms a 粉，量取甘油 3 3 m L，在研钵中先用少量甘油与G i e ms a 粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加人，在 5 6 C条件下保温 2h后，再加 3 3 ml甲醇，保存于棕色瓶内。磷酸缓冲液(0.2 m o l/L,p H7.2)的配制磷酸缓冲液由A液和 B液按 比例混合而
12、成。A液(0.2 m o l/L,N a,H P O,)配制;取3 6.6 1 g含一个结晶水的磷酸氢二钠(N a,H P O,Jl ，tC工AA容于1 0 0 0 m L蒸馏水中，或取7 1.6 4 g 含两个结晶水的磷酸氢二钠 N a,H P O,H B O)定容于1蒸馏水中，即成H z O)定0 0 0 mLA 2.2 B液(0.2 m o l/L,N a H 2 P O,)配制:取2 7.6 g 含一个结晶水的磷酸二氢钠(N a H,P O,H,O)定容于 1 0 0 0 m L蒸馏水中，或取 3 1.2 1 g含两个结晶水的磷酸二氢钠(N a Hi P O,2 H,O)定容于1 0
13、0 0 m L蒸馏水中，即成A 2.3 取 A液 7 2 0 mL，加上B液 2 8.0 mL,混合即成所需的磷酸缓冲液。A 3 G i e m s a 工作染色液的配制 取 1 0 0 mL磷酸缓冲液，加人 3 mL G i e ms a染色母液即成。附录B (标准的附录)同工艘染色液的配制B 1 三经甲墓氮基甲烷一 盐酸(T r i s-H C L)染色级冲液门.5 m o l/L)的配制 取三经甲基氨基甲烷 1 8 1.7 1 g溶于9 0 0 m L蒸馏水中，用盐酸调节至p H9.5，再用蒸馏水稀释至1 0 0 0 mL,B 2 抓化硝基四氮哇蓝(N B T)液(m g/m L)的配制
14、 取2 5 0 m g抓化硝基四氮哇蓝溶于2 5 0 m L燕馏水中。B 3 乳酸钠溶液(1 m o l/L)的配制 取2 0 3.7 6 m L乳酸，加人7 0 0 m L蒸馏水混合，用5 0%氢氧化钠溶液调节至p H 7.0，再用蒸馏水稀释至1 0 0 0 m LB 4 同工酶染色液的配制 所需同工酶染色液按表B l 配制。S C 1 0 2 7 一 1 9 9 8表 B 1 同工酶染色液配方Tri s-HC 1;I 色a冲a辅酶 m g 3 0lN B Tm l.吩哆甲醋硫酸盐燕馏水10一.3n乳酸钠溶液 -Lm L95 附录C (提示的附录)体长、体贡生长关系式C 1 鱼种阶段按式(C 1)计算:w 二 0.0 3 1 4 X L s.v “(C l)式中:W鱼体体重，9;L-一 一鱼体鱼长，c me食用商品龟阶段按式(C 2)计算:c2W 二 0.0 4 7 5 X Ll s ”“”二 二(C 2)C 3亲鱼阶段按式(C 3)、式(C O计算:雌鱼:雄鱼:W 二 0.:5 XL8X L9 6 15)W 二0.16 4 月(C3(C4)2 6 4
