1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 狅 狉 狋 犻 犮 狅 狊 狋 犲 狉 狅 犻 犱 狊犪 狀 犱狆 狉 狅 犵 犲 狊 狋 犲 狉 狅 狀 犲 狊 犻 狀犮 狅 狊 犿 犲 狋 犻 犮 狊 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准的附录、附录、附录和附录 均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国河南出入境检验检疫局负责起草。本标
2、准主要起草人：杨冀州、袁萍、刘亚风、祝伟霞、郭俊峰、魏蔚。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法范围本标准规定了化妆品中曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、甲泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、氟米松、曲安奈德、氟氢松、醋酸氢化可的松、醋酸氟氢可的松、醋酸泼尼松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、哈西奈德、羟基醋酸去氧皮质酮、丙酸倍氯米松等 种糖皮质激素类药物和炔诺酮、孕酮、甲烯雌醇醋酸酯、甲炔诺酮、地屈孕酮、醋酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮、米非司酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、己酸羟孕酮等 种孕激素类药物含量检测的液相色谱 质谱质谱（）和液相色谱法（）检测方
3、法。本标准适用于膏状、乳状、水状化妆品中 种糖皮质激素和 种孕激素含量检测的液相色谱方法和液相色谱 质谱质谱确证方法。本标准的液相色谱 质谱质谱法为仲裁法。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和实验方法试样的制备与保存混匀所取样品，均分成两份作为试样，分别装入洁净容器，密封并做好标识。方法一液相色谱质谱质谱法方法提要化妆品中糖皮质激素、孕激素
4、采用乙腈超声提取，吹干浓缩后经固相萃取柱净化，液相色谱 质谱质谱检测和确证，外标法定量。试剂和材料除特殊注明外，水为 规定的一级水。甲醇：高效液相色谱级。乙腈：高效液相色谱级。乙酸胺：高效液相色谱级。甲醇 水（，体积比）溶液：量取 甲醇与 水混合。乙酸胺溶液：称取 乙酸胺（），用水溶解并定容至 。乙腈 乙酸胺溶液（，体积比）：量取 乙腈与 乙酸胺溶液（）混合。标准品：标准品名称及 号参见附录 中表 ，纯度大于等于。犛 犖犜 标准储备溶液：分别称取糖皮质激素、孕激素类标准品各 （），用甲醇溶解并定容至 ，浓度相当于 ，该标准储备液贮存于 以下，可稳定个月。标准中间溶液：准确移取 标准贮备溶液（）
5、，用甲醇定容至 ，浓度相当于 ，该溶液贮存于，可稳定个月。标准工作溶液：根据需要用本标准规定操作方法制得空白样品提取液，将标准中间溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液，该工作溶液应使用前配制。固相萃取柱：（，）或相当者。使用前依次用 甲醇、水预处理，保持柱体湿润。微孔滤膜：有机相。仪器和设备 液相色谱 质谱质谱仪：配电喷雾离子源（）。分析天平：感量 ，。超声波提取仪：。冰箱：。旋涡混匀器。温控离心机：，。固相萃取装置。氮气浓缩仪。聚丙烯离心管：，。测定步骤 样品提取 膏状、乳状样品准确称取均匀试样（精确到 ）于 聚丙烯离心管中，加入 乙腈，混匀后 超声提取 ，每隔 取出晃动一次，超声后涡旋混匀
6、 ，离心 ，将上清液转移至 聚丙烯离心管中，置于 冰箱中冷冻 ，取出后立即于 离心 ，上清液于 水浴中氮吹浓缩至干，用 甲醇 水（）溶解残渣，待净化。水状样品准确称取均匀试样（精确到 ）于 聚丙烯离心管中，加入 乙腈，混匀后 超声提取 ，每隔 取出晃动一次，超声后涡旋混匀 ，离心 ，将上清液转移至 聚丙烯离心管中，水浴中氮吹浓缩至干，用 甲醇 水（）溶解残渣，待净化。净化将样液转移至已活化过的固相萃取柱中（），控制样液流速约 ，待样液全部流出后，依次用 水、甲醇水（）淋洗，弃去全部流出液，以下减压抽干 ，使柱体保持干涸，用 甲醇洗脱，洗脱液于 水浴中氮吹浓缩至干，用 乙腈 乙酸胺混合溶液（）溶
7、解残渣，经 滤膜过滤，供液相色谱质谱质谱测定。测定 液相色谱条件 色谱柱：，（内径），或相当者；柱温：；进样量：；流动相：乙腈 乙酸胺溶液，梯度洗脱程序见表。犛 犖犜 w w w.b z f x w.c o m表液相色谱 质谱质谱法梯度洗脱程序时间 流速（）乙腈 乙酸胺 质谱条件 离子化模式：电喷雾正离子模式（）；质谱扫描方式：多反应监测（）；其他质谱参考条件参见附录。液相色谱 质谱质谱测定 定量测定根据样液中糖皮质激素、孕激素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中糖皮质激素、孕激素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下
8、，糖皮质激素、孕激素参考保留时间参见附录 中表 。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录中图。定性测定按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，如果样品与标准工作液中待测物质色谱峰相对保留时间在 范围内；糖皮质激素、孕激素的质谱两个定性离子必须同时出现，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许误差不超过表规定的范围。表相对离子丰度最大容许误差相对丰度（基峰）相对离子丰度最大容许误差 大于 至小于等于 大于 至小于等于 小于等于 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算用数据处理软件中的外标法，或按照式（）计算试样品中糖皮质激素、孕激素类药物含量。犡犃犮犞犃
9、犿（）犛 犖犜 w w w.b z f x w.c o m式中：犡 试样中糖皮质激素、孕激素类药物的含量，单位为微克每千克（）；犃 样液中糖皮质激素、孕激素类药物的色谱峰面积；犮 标准工作液中糖皮质激素、孕激素类药物的浓度，单位为纳微克每升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作液中糖皮质激素、孕激素类药物的色谱峰面积；犿 最终样液所代表的试样量，单位为克（）。测定低限和回收率 测定低限本标准中 种糖皮质激素与 种孕激素的测定低限均为 。回收率本标准的添加浓度范围与回收率数据参见附录 中表 。方法二液相色谱法 方法提要化妆品中糖皮质激素、孕激素用乙腈超声提取，吹干浓缩后经固相萃
10、取柱净化，用配有二极管阵列检测器或双波长紫外检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。试剂和材料除特殊注明外，所用试剂和材料均同 ，。乙腈 水（，体积比）：量取 乙腈与 水混合。标准工作溶液：根据需要用乙腈 水（）将标准中间溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液，该溶液使用前配制。仪器和设备除特殊注明外，所用试剂和材料均同 。液相色谱仪：配二极管阵列检测器或双波长紫外检测器。测定步骤 样品提取同。净化样品残渣用 乙腈 水（）溶解，经 滤膜过滤后，供液相色谱测定。其他同。测定 液相色谱条件 色谱柱：，（内径），或相当者。柱温：。进样量：。检测波长：和 。流动相：乙腈水，梯度洗脱程序见表。犛 犖犜 w w
11、 w.b z f x w.c o m表液相色谱法梯度洗脱程序时间 流速（）乙腈水 液相色谱测定根据样液中糖皮质激素、孕激素浓度大小，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中糖皮质激素、孕激素响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定，在上述色谱条件下，糖皮质激素、孕激素参考保留时间参见附录 中表 。标准溶液的色谱图参见附录中图。空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述同第章。测定低限、回收率 测定低限本方法测定低限为 。回收率回收率实验数据参见附录 中表 。犛 犖犜 w w w.b z f x w.c o m附录犃（资料性附录）检测化合
12、物和保留时间表 犃 检测化合物及参考保留时间类型化合物英文名称 号 法参考保留时间 法参考保留时间 糖皮质激素曲安西龙 泼尼松龙 氢化可的松 甲泼尼松龙 倍他米松 地塞米松 氟米松 曲安奈德 氟氢松 醋酸氢化可的松 醋酸氟氢可的松 醋酸泼尼松 醋酸可的松 醋酸地塞米松 哈西奈德 羟基醋酸去氧皮质酮 丙酸倍氯米松 孕激素炔诺酮 孕酮 甲烯雌醇醋酸酯 甲炔诺酮 地屈孕酮 醋酸羟孕酮 醋酸甲地孕酮 米非司酮 醋酸氯地孕酮 醋酸甲羟孕酮 己酸羟孕酮 犛 犖犜 附录犅（资料性附录）液相色谱 质谱质谱法仪器参数与监测离子）仪器参数与监测离子）雾化气 （）：（）（氮气）；）气帘气（）：（）（氮气）；）喷雾电
13、压（）：；）离子源温度（）：；）去溶剂气流 ：（）（氮气）；）碰撞气（）：（）（氮气）；）其他质谱参数见表。表 犅 待测药物的主要参考质谱参数）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 型液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。药物名称定量离子对定性离子对驻留时间 去簇电压 入口电压 碰撞能量 碰撞室出口电压 醋酸地塞米松 倍他米松 醋酸可的松 醋酸羟孕酮 己酸羟孕酮 泼尼松龙 甲泼尼松龙 羟基醋酸去氧皮质酮 醋酸甲地孕酮 醋酸氯地孕酮 犛 犖犜 表 犅（续）药物名称定量离子对定性离子对驻留时间 去簇电压 入口电压 碰撞能
14、量 碰撞室出口电压 地塞米松 哈西奈德 曲安西龙 丙酸倍氯米松 甲炔诺酮 醋酸氢化可的松 氟氢轻 氢化可的松 甲烯雌醇醋酸酯 孕酮 醋酸氟氢可的松 氟米松 曲安奈德 醋酸泼尼松 醋酸甲羟孕酮 犛 犖犜 表 犅（续）药物名称定量离子对定性离子对驻留时间 去簇电压 入口电压 碰撞能量 碰撞室出口电压 米非司酮 炔诺酮 地屈孕酮 犛 犖犜 附录犆（资料性附录）液相色谱 质谱质谱法与液相色谱法标准溶液色谱图图 犆 糖皮质激素、孕激素标准溶液（犵犔）多反应监测色谱图犛 犖犜 图 犆（续）图 犆 糖皮质激素、孕激素标准溶液（犵犽 犵）液相色谱图犛 犖犜 附录犇（资料性附录）液相色谱 质谱质谱法与液相色谱法
15、回收率数据表 犇 化妆品中糖皮质激素、孕激素类药物添加浓度及回收率试验数据（犔 犆 犕 犛犕 犛法）药物名称添加浓度（）回收率药物名称添加浓度（）回收率醋酸地塞米松 甲炔诺酮 倍他米松 醋酸氢化可的松 醋酸可的松 氟氢轻 醋酸羟孕酮 氢化可的松 己酸羟孕酮 甲烯雌醇醋酸酯 泼尼松龙 孕酮 甲泼尼松龙 醋酸氟氢可的松 羟 基 醋 酸 去氧皮质酮 氟米松 醋酸甲地孕酮 曲安奈德 醋酸氯地孕酮 醋酸泼尼松 地塞米松 醋酸甲羟孕酮 犛 犖犜 表 犇（续）药物名称添加浓度（）回收率药物名称添加浓度（）回收率哈西奈德 米非司酮 曲安西龙 炔诺酮 丙酸倍氯米松 地屈孕酮 表 犇 化妆品中糖皮质激素、孕激素类
16、药物添加浓度及回收率试验数据（犔 犆法）药物名称添加浓度（）回收率药物名称添加浓度（）回收率醋酸地塞米松 甲炔诺酮 倍他米松 醋酸氢化可的松 醋酸可的松 氟氢轻 醋酸羟孕酮 氢化可的松 己酸羟孕酮 甲烯雌醇醋酸酯 泼尼松龙 孕酮 甲泼尼松龙 醋酸氟氢可的松 羟 基 醋 酸 去氧皮质酮 氟米松 犛 犖犜 表 犇（续）药物名称添加浓度（）回收率药物名称添加浓度（）回收率醋酸甲地孕酮 曲安奈德 醋酸氯地孕酮 醋酸泼尼松 地塞米松 醋酸甲羟孕酮 哈西奈德 米非司酮 犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口化妆品中糖皮质激素类与孕激素类检测方法 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元
