1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T3196-2012水产品中致病性弧菌检测全自动病原菌检测系统筛选法Determination of pathogenic vibrio in aquatic product-Automatic detection system for screening pathogenic bacteria2012-05-07发布2012-11-16实施中华人民共和国国家质量监督检验险检疫总局发布SN/T3196-2012水产品中致病性弧菌检测全自动病原菌检测系统筛选法1范围本标准规定了水产品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的筛选方法。本标准适用于水产品中霍
2、乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T4789.7食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T0173进出口食品中副溶血性弧菌检验方法SN/T1022进出口食品中霍乱弧菌检验方法FDA/BAM Chapter9美国食品药品管理局微生物学分析手册第9章弧菌NMKL No.156北欧食品协会食品中致病性弧菌定性和定量
3、检测方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。3.1DNA(deoxyribonuleic acid):脱氧核糖核酸3.2PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应4原理BAX全自动病原菌检测系统是应用PCR技术来检测病原菌。反应所需的引物、DNA聚合酶和脱氧核苷酸等被合并成为一个稳定、干燥的片剂，并装入PCR管中。每个PCR试剂片都包含有荧光染料，该染料能结合双链DNA,并且受光激发后发出荧光信号。在检测过程中，BAX系统通过测量荧光信号的变化，分析测量数据，从而进行结果判定。5试剂5.1实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。5.2碱性蛋白胨水(APW),
4、参见A.1。5.3BAX系统霍乱弧菌/副溶血性弧菌/创伤弧菌的PCR检测试剂盒，28放置，参见A.2。1SN/T3196-20126仪器与设备6.1恒温培养箱：352。6.2冰箱：28。6.3均质器。6.4天平：感量0.1g。6.5超净工作台。6.6微量可调移液器及枪头：50L,200L。6.7BAX全自动病原菌检测系统7检测程序致病性弧菌全自动病原菌检测系统筛选法的检测程序见图。25g检样+225 mL APW增菌液352培养18h20h是取细DA模板BAX全自动病原菌检测系统检测阴性结果性结果传统方法确认结果报告图1致病性弧菌全自动病原菌检测系统筛选法的检测程序8操作步骤8.1样品制备、增菌8.1.1称取检样25g,加人装有225mL碱性蛋白胨水增菌液的广口瓶或均质袋内。固体样品应用均质器在8000r/min10000r/min条件下均质，或用剪刀充分剪碎。8.1.235士2培养18h20h。2
