1、EB病毒IgA抗体酶联免疫 吸附法诊断试剂盒 受理号：X0407269 中山大学中山医学院 朱振宇教授、医学博士、博士生导师 中山大学达安基因股份首席科学家 一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系 鼻咽癌鼻咽癌NPC是来源于鼻咽粘膜是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或未分化癌上皮细胞的低分化或未分化癌。本病本病可见于世界各地可见于世界各地，但但NPC有明显的种有明显的种族倾向族倾向，大局部患者是中国人及其后大局部患者是中国人及其后裔裔，在爱斯基摩人在爱斯基摩人、北非洲人和马来北非洲人和马来人中也较常见人中也较常见。病人的肿瘤细胞中有规律地隐匿着病人的肿瘤细胞中有规律地隐匿着潜 伏 状 态 的潜 伏 状
2、态 的 EB 病 毒病 毒 Epstein-Barr Virus，EBV。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒 发现发现 EB病毒是病毒是1964年年Epstein与与Barr在在非洲儿童恶性淋巴瘤的瘤细胞中观察非洲儿童恶性淋巴瘤的瘤细胞中观察到的一种疱疹病毒。到的一种疱疹病毒。1966年年Old等采用免疫扩散法发现鼻等采用免疫扩散法发现鼻咽癌病人的血清能与非洲儿童淋巴细咽癌病人的血清能与非洲儿童淋巴细胞的抽提液起反响。胞的抽提液起反响。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒 证据证据1：1969年年de-the从鼻咽癌活检培养的类从鼻咽癌活检培养的类淋巴细胞中别离出淋巴细胞中别离出EB病毒病毒。国
3、内也已经从鼻咽癌组织培养所建国内也已经从鼻咽癌组织培养所建立的类淋巴母细胞株中证明带有立的类淋巴母细胞株中证明带有EB病病毒壳抗原毒壳抗原VCA和早期抗原和早期抗原EA，并在电镜下找到了典型的疱疹病毒颗并在电镜下找到了典型的疱疹病毒颗粒粒，其形态与其形态与EB病毒相同病毒相同。1、病人的肿瘤细胞中隐匿着EB病毒 证据证据2：Kottaridis SD等等1996年年认为鼻咽认为鼻咽癌患者血清中抗癌患者血清中抗EBNA的水平反映肿的水平反映肿瘤的大小瘤的大小。Anticancer Res,1996,16(2):785-789 Vera-Sempere FJ等等1996年年采采用巢式用巢式PCR和
4、免疫组化分析说明了不和免疫组化分析说明了不管组织学类型，鼻咽癌中均有管组织学类型，鼻咽癌中均有EB病毒病毒感染。感染。Eur J Cancer B Oral Oncol,1996,32B(3):163-168 2、几乎100%鼻咽非角化性癌均有EBV感染。在我国，几乎所有四岁以上的人群均已感染过EBV，80%以上的健康成人是EBV携带者。特别在珠江三角洲及香港地区，是世界上NPC的高发区。根据中山市的肿瘤统计资料流行病学，NPC的年龄和性别的校正发病率为18.12/10万(男：25.60/10万；女：11.05/10万)。97%的NPC为非角化性癌。经EBER1原位杂交所谓“金标准 证实癌细胞
5、中有EBV感染。EBERs原位杂交 3、NPC病人血清中的EBV抗体水平普遍升高 NPC的显著特征是病人血清中对EB病毒各种抗原的抗体尤其是IgA亚型水平普遍升高，借此可区分NPC与健康携带者。Werner Henle et al.,1976.中国医学科学院等单位采用间接免疫荧光法，发现鼻咽癌患者血清中IgA/VCA的阳性率为90.14，几何平均滴度为1:15.3,而其它癌瘤和健康携带者血清中IgA/VCA的阳性率为2.61%-3.30%，几何平均滴度为1:1.3。同时还发现鼻咽癌病人放疗后，其IgA抗体水平随存活时间的延长而逐渐下降，在放疗后 422年者仅39.29为阳性；但当病者出现肿瘤复
6、发或转移时，阳性率又再次升至85.75。一、鼻咽癌与EB病毒感染的关系 小结：流行病学小结：流行病学、血清学和分子生物血清学和分子生物学的资料证实学的资料证实,EBV感染与感染与NPC有密切有密切关系关系。鼻咽癌患者癌细胞中证实有鼻咽癌患者癌细胞中证实有EB病病毒的毒的DNA，经原位杂交经原位杂交，多数癌细胞多数癌细胞呈呈EBERs阳性阳性、核抗原核抗原EBNA-1阳性阳性。鼻咽癌患者肿瘤细胞中有鼻咽癌患者肿瘤细胞中有EB病毒病毒，血清有一套抗血清有一套抗EB病毒的抗体病毒的抗体，血清中血清中的的EBV抗体水平普遍升高抗体水平普遍升高。1997年世界卫生组织在国际抗癌年世界卫生组织在国际抗癌联
7、盟年会上把联盟年会上把EBV归类为第一类致癌归类为第一类致癌物物特别是鼻咽癌特别是鼻咽癌。二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同 EBV血清学诊断利用血清学诊断利用NPC的一个特征，的一个特征，即患者多种即患者多种EBV抗体的水平较非患者高抗体的水平较非患者高Werner Henle et al.,1976.。EBV血清学诊断已用于血清学诊断已用于NPC高危人群高危人群的筛查和对的筛查和对NPC可疑病例的诊断。根据可疑病例的诊断。根据从从70年代后期以来的研究结果，年代后期以来的研究结果，VCA-IgA检测通常被用于筛查以排除检测通常被用于筛查以排除NPC的诊的诊断断；EA-Ig
8、A检测目前被用于检测目前被用于NPC确实定确实定性检测。性检测。二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同 检测哪种抗体？检测抗体哪种类型？因为鼻咽癌NPC是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的低分化或未分化癌。所以我们可以先了解EB病毒在上皮细胞中的潜伏感染以及两种形式的EB病毒感染所表达的各种抗原。各种抗原相应产生不同的特异性抗体中哪种有代表性？1、EB病毒的潜伏感染 上皮细胞中病毒复制循环中的B淋巴细胞池 长期潜伏感染 如果感染了无复制缺陷突变的病毒 EB病毒感染口咽上皮细胞 如果感染了复制缺陷突变的病毒 待上皮细胞增生后个别细胞死亡EB病毒 引自:J Immmunol.2022;1749
9、8:4972-8 2、两种形式的、两种形式的EB病毒感染病毒感染 潜伏性感染潜伏性感染(latent infection)I型潜伏性感染型潜伏性感染:表达表达EBNA1，病征为病征为 Burkitt 淋巴瘤淋巴瘤 II 型 潜 伏 性 感 染型 潜 伏 性 感 染:表 达表 达 EBNA1 和和 LMP1、LMP2A、LMP2B，病征为病征为Hodgkin 淋巴瘤淋巴瘤、鼻咽癌鼻咽癌、鼻型鼻型 NK/T-细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤 III型潜伏性感染型潜伏性感染:表达表达EBNA1、EBNA2、EBNA3、EBNA4、EBNA5、EBNA6，病征为传染性单核病征为传染性单核
10、细胞增多症细胞增多症、移植后淋巴移植后淋巴 组织增生性疾病组织增生性疾病 溶解性感染溶解性感染(lytic infection)在在EBV潜伏感染的淋巴细胞中有小局部潜伏感染的淋巴细胞中有小局部约约15%20%出现溶解性感染出现溶解性感染，溶解性溶解性感染出现三个时相感染出现三个时相phase。立 即 早 期立 即 早 期:表 达表 达 Zta(ZEBRA)、EBNA1等等 早期早期:表达表达EA(D)、EA(R)、EBNA1等等 晚期晚期:表达表达VCA、EBNA1等等 EBNA-1 是在所有不同是在所有不同EBV感染细胞中都出感染细胞中都出现的唯一抗原现的唯一抗原。3、检测抗体哪种类型？遵
11、循免疫学抗体产生的根本原那么遵循免疫学抗体产生的根本原那么 IgG IgM IgA是上皮细胞的分泌型抗体是上皮细胞的分泌型抗体 IgD IgE 二、EB病毒携带者与鼻咽癌病人血清中EBV抗体的不同 检测 对象 例数 EBNA1/IgA（rOD）中位数 范围 鼻咽癌 121 2.6 0.47.5 患者 健康 332 0.5 0.23.9 携带者 NPC病人血清中的EBNA1/IgA抗体平均水平是健康携带者的4倍以上。EBNA 1 IgA 的抗体水平 在NPC患者中高于正常的EBV携带者 EBNA1-IgA检测的检测的OD值范围分布图值范围分布图05101520253035-(0.8-0.7)-(
12、0.6-0.5)-(0.4-0.3)-(0.2-0.1)0-0.10.2-0.30.4-0.50.6-0.70.8-0.9OD Range%Normal%NPCCutoff OD 小结 NPC主要表现是主要表现是EBV潜伏感染伴少量溶解性感潜伏感染伴少量溶解性感染染。EBNA-1 是在所有不同是在所有不同EBV感染细胞中都出感染细胞中都出现的唯一抗原现的唯一抗原。NPC是来源于鼻咽粘膜上皮细胞是来源于鼻咽粘膜上皮细胞，检测上皮细检测上皮细胞的分泌型胞的分泌型IgA抗体水平对抗体水平对NPC较有诊断意义较有诊断意义。NPC的显著特征是病人血清中的的显著特征是病人血清中的EBV抗体抗体尤尤其是其是
13、IgA亚型亚型水平普遍升高水平普遍升高，这种变化在这种变化在NPC发病前期将先于病症出现发病前期将先于病症出现，借此可区分借此可区分NPC与其与其它它EB病毒感染相关疾病或健康携带者病毒感染相关疾病或健康携带者。我们认为我们认为EBNA1/IgA抗体水平的检测对抗体水平的检测对NPC高高危人群的筛查可作为早期发现鼻咽癌的有效手段危人群的筛查可作为早期发现鼻咽癌的有效手段之一之一。三 本品是用于NPC 辅助诊断的有效手段 NPC是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的一种恶性肿瘤，是来源于鼻咽粘膜上皮细胞的一种恶性肿瘤，组织病理学检查是确诊组织病理学检查是确诊NPC的唯一方法。的唯一方法。NPC的早期病症是非
14、特异的，的早期病症是非特异的，EBV血清学体外诊血清学体外诊断最常用于诊断程序的初期及断最常用于诊断程序的初期及NPC高危人群的筛查。高危人群的筛查。NPC的显著特征是病人血清中的的显著特征是病人血清中的EBV多种抗体水多种抗体水平普遍升高，因此一种抗体的检测有一定的局限性。平普遍升高，因此一种抗体的检测有一定的局限性。本品的设计应用本品的设计应用ELISA技术技术，采用了高度纯化的，采用了高度纯化的EBNA 1的抗原的抗原，它的抗体水平在鼻咽癌和非鼻咽，它的抗体水平在鼻咽癌和非鼻咽癌患者之间的差异，大于那些不是由肿瘤细胞所表癌患者之间的差异，大于那些不是由肿瘤细胞所表达的抗原的特异性抗体。同
15、时每个试剂盒中参加了达的抗原的特异性抗体。同时每个试剂盒中参加了一份定值参考对照，在每次的检测中与测试样品同一份定值参考对照，在每次的检测中与测试样品同时进行检测，使抗体的水平以标准的时进行检测，使抗体的水平以标准的rOD单位来表单位来表示示，这样可以减少实验之间和实验室之间的误差，这样可以减少实验之间和实验室之间的误差，从而可以直接地比较不同的实验室在不同的时间所从而可以直接地比较不同的实验室在不同的时间所独立得出的检测结果。独立得出的检测结果。1、本品的用途和局限性 用途用途 本品适用于疑似鼻咽癌病人的血清学检测，本品适用于疑似鼻咽癌病人的血清学检测，检测结果有助于临床医生作出排除或进一步
16、确检测结果有助于临床医生作出排除或进一步确认认 NPC 的诊断。的诊断。主要可用于高危人群的筛查。主要可用于高危人群的筛查。局限性局限性 本品并非本品并非NPC诊断确实诊试剂，只有组织诊断确实诊试剂，只有组织病理学检查能确诊病理学检查能确诊NPC。检测结果只提供了额外的信息，以指导对检测结果只提供了额外的信息，以指导对疑似疑似NPC病例的诊断。同时对健康人群来说，病例的诊断。同时对健康人群来说，检测结果可能反映检测结果可能反映NPC的风险程度。的风险程度。2、本品的使用特点 推荐使用的诊断参数及其临床意义：推荐使用的诊断参数及其临床意义：当疑似鼻咽癌病症的病人首次到专科门诊就诊时，血当疑似鼻咽癌病症的病人首次到专科门诊就诊时，血清学诊断可作初步筛选，此时敏感性为主要的诊断参数。清学诊断可作初步筛选，此时敏感性为主要的诊断参数。其目的是评估病人被诊断为鼻咽癌的可能性大小。推荐其目的是评估病人被诊断为鼻咽癌的可能性大小。推荐使用当使用当 rOD值低于值低于0.700时，可判定为阴性时，可判定为阴性此时敏感性此时敏感性大于大于94.1%，支持排除，支持排除NPC，但应建议病人定期复查；，但应
