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竹叶柴胡总黄酮提取及抗氧化作用研究_陈桐.pdf

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资源描述

1、第 52 卷第 2 期 辽 宁 化 工 Vol.52,No.2 2023 年 2 月 Liaoning Chemical Industry February,2023 基金项目基金项目:四川省大学生创新创业训练项目(项目编号:S202014389158)。收稿日期收稿日期:2022-03-31 作者简介作者简介:陈桐(1999-),女,四川省广安市人。通信作者通信作者:叶峻(1968-),男,四川省南江县人,教授,研究方向:光谱分析与食品安全。竹叶柴胡总黄酮提取及抗氧化作用研究 陈桐,侯林清,覃凡倚,甘鑫睿,叶峻(成都师范学院 化学与生命科学学院,四川 成都 611130)摘 要:为探究竹叶柴

2、胡的药效机理,采用超声辅助法提取了竹叶柴胡中总黄酮,并确定了最佳工艺如下:提取剂为 40%乙醇,料液比为 155,超声功率为 200 W,温度为 70,时间为 50 min。所测样品中总黄酮质量分数为 46.45 gkg-1,且竹叶柴胡提取液对 DPPH 和羟基自由基均有较好的清除率。研究表明,竹叶柴胡有较好的抗氧化活性,具有抗病毒、抗衰老、抗癌等药效作用。关 键 词:竹叶柴胡;超声辅助;总黄酮;抗氧化活性 中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1004-0935(2023)02-0187-04 竹叶柴胡为伞形科柴胡属植物,可全草入药,性味苦寒,为目前市场上三大药用柴胡之一1。竹

3、叶柴胡含有皂苷、甾醇、多糖、黄酮等生物活性成分2-3,具有解热、抗炎、抗病毒、免疫调节及抗衰老、抗癌等功效4-7。超声波辅助法提取植物黄酮的不仅不影响提取物的活性,且具有仪器简单、提取效率高、温度低、节约溶剂等优点8-9。本试验探究了超声辅助法提取竹叶柴胡中总黄酮的最佳工艺,并试验了样品总黄酮提取物对 DPPH 和羟基自由基的清除率,以研究竹叶柴胡的药效作用。1 试验部分 1.1 主要仪器与试剂 紫外分光光度计,TU-1901,普析通用仪器公司;超声仪,KQ-250DE 型,昆山超声仪器公司。竹叶柴胡,四川博仁药业有限公司;芦丁标准品,成都康邦生物科技有限公司;水杨酸、乙醇、H2O2、AlNO

4、39H2O、NaOH、NaNO2、FeSO47H2O、DPPH(1.1-二苯基-2-三硝基苯肼)、抗坏血酸,分析纯,成都市科隆化学品有限公司。1.2 样品预处理 样品置于 80 干燥箱中烘 4 h 后,用粉碎机粉碎,过 80 目(0.178 mm)筛,装袋密封备用。1.3 样品中总黄酮的测定 按 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 络合物法,用芦丁为标准品,将样品提取液于 510 nm 处测定吸光值。计算总黄酮得率:总黄酮得率=DCV/M。(1)式中:D稀释倍数;C总黄酮质量浓度,mgmL-1;V样品液体积,L;M样品质量,g。1.4 样品提取物的抗氧化活性测定 1.4.1 DPPH 自由

5、基清除能力测定 参考谷睿10等的方法,将样品提取液稀释为总黄酮质量浓度 0.016 78、0.041 91、0.209 50、0.419 10、0.838 20 mgmL-1,并各取 2.0 mL 于 20 mL试管中,分别加入 2.0 mL 0.2 mmolL-1 DPPH,混合均匀,置于暗处 30 min 后,用 95%乙醇做空白试验,在 517 nm 处测量吸光度。DPPH 自由基清除率:SR=1-(Ai-Ax)/Ao100%。(2)式中:Ai样品吸光度;Ax95%乙醇代替 DPPH 测得吸光度;Ao空白吸光度。1.4.2 羟基自由基清除能力测定 参考高亚妮11等的方法,将样品提取液稀释

6、为总黄酮质量浓度 0.016 78、0.041 91、0.209 50、0.419 10、0.838 20 mgmL-1,并各取 2.0 mL 于 20 mL试管中,分别依次加入 1.0 mL 9 mmolmL-1 FeSO4、1.0 mL 9 mmolL-1水杨酸-乙醇溶液和 1.0 mL 8.8 mmolL-1 H2O2,摇匀,置于 37 水浴锅中,30 min 后于 510 nm 处测定吸光度(Ai);用蒸馏水代替 H2O2,其余步骤不变,测定吸光度(Ax);用蒸馏水做空白试验,测定吸光度(Ao)。羟基自由基清DOI:10.14029/ki.issn1004-0935.2023.02.0

7、24188 辽 宁 化 工 2023年2月 除率 SR 计算同 1.4.1。2 结果与分析 2.1 样品中总黄酮提取工艺 2.1.1 料液比的影响 取预处理后的样品 5 份,各 0.5 g。按超声温度70,超声功率 200 W,超声时间 50 min,40%乙醇为提取剂,设置料液比(gmL-1)125、135、145、155、165,提取总黄酮,结果见图 1。图 1 料液比对总黄酮得率的影响 由图 1 可见,随料液比增大,样品总黄酮得率呈现先升后降的变化趋势。料液比为 155(gmL-1)时,样品总黄酮得率最大,为最佳料液比。2.1.2 提取剂体积分数的影响 取预处理后的样品 5 份,各 0.

8、5 g。固定料液比为 155(gmL-1),超声温度 70,超声功率 200 W,超声时间 50 min。设置提取剂乙醇体积分数为 30%、40%、50%、60%、70%,提取总黄酮,结果见图 2。图 2 乙醇体积分数对总黄酮得率的影响 由图 2 可见,样品的总黄酮得率随着乙醇体积分数的增大呈现先增后降的趋势。乙醇体积分数为40%时,样品总黄酮得率最大,为最佳提取剂体积分数。2.1.3 提取时间的影响 取预处理后的样品 5 份,各 0.5 g。固定提取剂为 40%乙醇,料液比 155(gmL-1),超声温度70,超声功率 200 W。设置提取时间为 10、20、30、40、50、60 min,

9、提取总黄酮,结果见图 3。图 3 提取时间对总黄酮得率的影响 由图 3 可见,随提取时间的延长,样品的总黄酮得率逐渐增大。提取时间为 50 min 时,样品总黄酮得率最大,为最佳提取时间。2.1.4 提取温度的影响 取预处理后的样品 5 份,各 0.5 g。固定提取剂为 40%乙醇,料液比 155(gmL-1),提取时间 50 min,超声功率 200 W。设置提取温度为 30、40、50、60、70,提取总黄酮,结果见图 4。图 4 提取温度对总黄酮得率的影响 由图 4 可见,随着提取温度的升高,样品总黄酮得率逐渐增大。但乙醇沸点为 78,当提取温度超过 75 时,提取剂损失会较大。因此,选

10、择 70 为最佳提取温度。2.1.5 超声功率的影响 取预处理后的样品 5 份,各 0.5 g。固定提取剂第 52 卷第 2 期 陈桐,等:竹叶柴胡总黄酮提取及抗氧化作用研究 189 为 40%乙醇,料液比 155(gmL-1),提取时间 50 min,提取温度 70。设置超声提取功率为 125、150、175、200、225 W,提取总黄酮,结果见图 5。图 5 超声功率对总黄酮得率的影响 由图 5 可见,随着超声功率的增加,样品总黄酮得率呈现先增后降的变化趋势。超声功率为 200 W 时,总黄酮得率最大,为最佳超声提取功率。2.2 样品中总黄酮测定 取 3 份 0.5 g 预处理后的样品,

11、在料液比 155(gmL-1)、提取剂为 40%乙醇、提取温度 60、超声功率 200 W 时,提取 50 min,静置过滤,将滤液按“1.3”进行总黄酮含量测定及加标回收实验,结果见表 1。表 1 样品测定与回收实验结果 样品 样品测定值/(mgmL-1)加标量/(mgmL-1)加标测定值/(mgmL-1)回收率/%RSD/%1 0.843 8 0.1 0.985 2 114.4 0.35 2 0.845 1 0.1 0.958 6 113.5 3 0.844 7 0.1 0.959 1 114.4 由表 1 可知,所测竹叶柴胡样品提取液中总黄酮质量浓度平均为 0.844 5 mgmL-1,

12、样品总黄酮质量分数为 46.45 gkg-1,加标回收率在 90%120%之间,RSD 为 0.35%,表明该测定方法准确、可靠。2.3 抗氧化活性研究 2.3.1 DPPH 自由基清除率 按“1.4.1”,对样品提取液进行 DPPH 自由基清除率实验,结果见图 6。由图 6 可知,样品提取液中总黄酮质量浓度为0.016 780.838 20 mgmL-1时,对 DPPH 自由基清除率达 41.13%70.62%,表明竹叶柴胡对 DPPH 自由基有较好的清除能力。2.3.2 羟基自由基清除率试验 按“1.4.2”进行样品提取液对羟基自由基清除率实验,结果见图 7。图 6 DPPH 自由基清除能

13、力测定 图 7 羟基自由基清除能力测定 由图 7 可知,样品提取液中总黄酮质量浓度为0.016 780.838 20 mgmL-1时,对羟基自由基的清除率为 3.64%17.60%,表明竹叶柴胡对羟基自由基具有一定的清除能力。3 结 论 超声波辅助法提取竹叶柴胡中总黄酮的最佳工艺为:提取剂 40%乙醇,料液比 155(gmL-1),超声功率为 200 W,温度为 70,提取时间 50 min。所测样品中总黄酮质量分数为 46.45 gkg-1,加标回收率为 113.5%114.4%,RSD 为 0.35%。样品提取液中总黄酮在 0.016 780.838 20 mgmL-1时,对DPPH、羟基

14、自由基的清除率为 41.13%70.62%、3.64%17.60%,表明竹叶柴胡抗氧化活性好,具有明显的抗病毒、抗衰老、抗癌等药效。参考文献:1姚玉乔,高映,彭财英,等.竹叶柴胡化学成分及药理活性的研究进展J.安徽医药,2019,23(10):1913-1916.(下转第 193 页)第 52 卷第 2 期 曹雯静,等:电渗析复分解技术实现无机锂盐增值的研究 193 22 JAROSZEK H,LIS A,DYDO P.Transport of impurities and water during potassium nitrate synthesis by electrodialysis

15、metathesisJ.Separation and Purification Technology,2016,158:87-93.23 卢京敏,陈庆.扩散渗析应用于石墨纯化废酸回收的研究J.辽宁化工,2021,50(11):1626-1629.24 ROTTIERS T,PINOY L,MARCHE G,et al.Co-ion fluxes of simple inorganic ions in electrodialysis metathesis and conventional electrodialysisJ.Journal of Membrane Science,2015,492:

16、263-270.Study on the Appreciation of Inorganic Lithium Salts by Electrodialysis Metathesis CAO Wen-jing,WEN Wei-fen,CHEN Qing(College of Chemistry and Material Engineering,Wenzhou University,Wenzhou Zhejiang 325035,China)Abstract:Lithium nitrate is an important precursor of LiNi1-y-zMnyCozO2(NMC),but the traditional preparation process of lithium nitrate is complicated and not environmentally friendly.In this paper,electrodialysis metathesis technology was used to directly prepare lithium nitrat

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