1、I C S6 7.0 5 0C C SC5 3中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T4 6 7 5.3 22 0 2 2进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定分光光度法D e t e r m i n a t i o no f s o d i u mc a r b o x y m e t h y l c e l l u l o s e(CMC-N a)i nw i n e s f o ri m p o r t a n de x p o r tS p e c t r o p h o t o m e t r y2 0 2 2-0 3-1 4发布2 0 2 2-1 0-0 1实施中华人民共和国海关
2、总署发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准前 言 本文件按照G B/T1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件是S N/T4 6 7 5的第3 2部分。S N/T4 6 7 5已经发布了以下部分:第1部分:出口葡萄酒中甘油的测定 酶法;第2部分:出口葡萄酒中2,3-丁二醇的测定 气相色谱法;第3部分:出口葡萄酒中乙醇稳定碳同位素比值的测定;第4部分:出口葡萄酒中乳酸的测定 酶法;第5部分:出口葡萄酒中有机酸的测定 离子色谱法;第6部分:出口葡萄酒中葡萄糖、果糖和蔗糖的测定;第7部分:出口葡萄酒中乙醛的测定 气相色谱-质谱法;第8部分:出
3、口葡萄酒中5-羟甲基糠醛的测定 液相色谱法;第9部分:出口葡萄酒中二甘醇的测定 气相色谱-质谱法;第1 0部分:出口葡萄酒中赭曲霉毒素A的测定 液相色谱-质谱/质谱法;第1 1部分:出口葡萄酒中7种花色苷的测定 超高效液相色谱法;第1 2部分:出口葡萄酒中溶菌酶的测定 液相色谱法;第1 3部分:出口葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚残留量的测 气相色谱-质谱法;第1 4部分:出口葡萄酒中纳他霉素的测定 液相色谱-质谱/质谱法;第1 5部分:出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定 液相色谱法;第1 6部分:出口葡萄酒中富马酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法;第1 7部分:出口葡萄酒中丁基锡含量
4、的测定 气相色谱-质谱/质谱法;第1 8部分:出口葡萄酒中二硫代氨基甲酸酯残留量的测定 顶空气相色谱法;第1 9部分:出口葡萄酒中钠、镁、钾、钙、铬、锰、铁、铜、锌、砷、硒、银、镉、铅的测定;第2 0部分:出口葡萄酒中稀土元素的测定 电感耦合等离子体质谱法;第2 1部分:出口葡萄酒中可溶性无机盐的测定 离子色谱法;第2 2部分:出口葡萄酒中总二氧化硫的测定 比色法;第2 3部分:出口葡萄酒及葡萄汁中氨氮的测定 连续流动分析仪法;第2 4部分:出口葡萄酒福林肖卡指数的测定 分光光度计法;第2 5部分:出口葡萄酒颜色的测定 C I E1 9 7 6(L*a*b*)色空间法;第2 6部分:出口葡萄酒
5、浊度的测定 散射光法;第2 7部分:出口葡萄酒碱性灰分的测定;第2 8部分:出口葡萄酒中细菌、霉菌及酵母的计数;第2 9部分:出口葡萄酒中酒香酵母检验 实时荧光P C R法;第3 0部分:出口葡萄酒中拜氏接合酵母检验 S Y B RG r e e nI荧光P C R法;第3 1部分:出口葡萄酒中丙三醇碳稳定同位素比值的测定 液相色谱-稳定同位素比值质谱法;第3 2部分:进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定 分光光度法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国北戴河海关、华南农业大学、中华人民
6、共和国杭州海关。本文件主要起草人:张昂、齐鹏宇、王圣仪、刘亚新、杨志伟、雷红涛、谢文、陈瑞、王飞、张进杰。S N/T4 6 7 5.3 22 0 2 2以正式出版文本为准以正式出版文本为准进出口葡萄酒中羧甲基纤维素钠的测定分光光度法1 范围本文件规定了葡萄酒中羧甲基纤维素钠的分光光度测定方法。本文件适用于进出口葡萄酒(白葡萄酒、桃红葡萄酒、红葡萄酒等)中羧甲基纤维素钠的测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T6 6 8
7、 2 分析实验室用水规格和实验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法提要通过沉降、透析等处理从葡萄酒中分离出羧甲基纤维素钠,其在酸性介质中水解生成的乙醇酸降解成甲醛,甲醛与2,7-二羟基萘在1 0 0的浓硫酸中反应生成紫蓝色的2,2,7,7-四羟基二萘甲烷(图1),在5 4 0n m处有特征吸收;以福林酚法间接定量样品中的基体干扰,扣减基体干扰后与标准比较进行定量。图1 羧甲基纤维素钠与2,7-二羟基萘的反应过程5 试剂和材料除非另有说明,本文件中所用试剂均为分析纯,实验用水为符合G B/T6 6 8 2规定的一级水。5.1 浓硫酸。1S N/T4 6 7 5.3 22 0
8、 2 2以正式出版文本为准5.2 氯化钠。5.3 氢氧化钠。5.4 碳酸钠。5.5 浓盐酸:质量分数为3 7.5%。5.6 酒石酸钾钠。5.7 五水硫酸铜。5.8 无水乙醇。5.9 福林酚试剂(1m o l/L)。5.1 0 2,7-二羟基萘(C A S号5 8 2-1 7-2,C1 0H8O2):色谱纯,纯度大于等于9 8%。5.1 1 氯化十六烷基吡啶(C A S号6 0 0 4-2 4-6,C2 1H3 8C l NH2O):纯度大于等于9 9%。5.1 2 羧甲基纤维素钠(C A S号9 0 0 4-3 2-4,C6H7O2(OH)2O C H2C O O N an):平均黏度为4 0
9、 0m P as 10 0 0m P as,取代度为0.6 00.9 5,纯度大于等于9 9%。5.1 3 0.2m o l/L氯化钠溶液:称取1 1.7g氯化钠(5.2),用水溶解并定容至1L。5.1 4 0.4m o l/L氢氧化钠溶液:称取1 6.0g氢氧化钠(5.3),用水溶解并定容至1L。5.1 5 8%碳酸钠溶液:称取8 0.0g碳酸钠(5.4),用水溶解并定容至1L。5.1 6 0.0 5m o l/L盐酸:取4.1 7m L浓盐酸(5.5),用水稀释并定容至1L。5.1 7 4%酒石酸钾钠溶液:称取4.0g酒石酸钾钠(5.6),用水溶解并定容至1 0 0m L。5.1 8 2%
10、五水硫酸铜溶液:称取2.0g五水硫酸铜(5.7),用水溶解并定容至1 0 0m L。5.1 9 0.0 5%二羟基萘溶液:称取0.5g(精确至0.0 0 1g)2,7-二羟基萘(5.1 0),用浓硫酸(5.1)溶解并定容至1L,2 8水浴中避光放置4h(正常呈浅蓝灰色,若泛红色,需重新配制),转至棕色试剂瓶中4贮存,有效期1个月。5.2 0 0.1%氯化十六烷基吡啶溶液:称取1.0g氯化十六烷基吡啶(5.1 1),用氯化钠溶液(5.1 3)溶解并定容至1L。5.2 1 L o w r y试剂:等体积0.4m o l/L氢氧化钠溶液(5.1 4)与8%碳酸钠溶液(5.1 5)混合得试剂;等体积4
11、%酒石酸钾钠溶液(5.1 7)与2%五水硫酸铜溶液(5.1 8)混合得试剂;试剂与试剂按体积比5 01混匀得L o w r y试剂,即配即用。5.2 2 羧甲基纤维素钠标准储备液:称取0.1g(精确至0.0 0 01g)羧甲基纤维素钠(5.1 2),用水溶解并定容至1 0 0m L,即储备液浓度为1m g/m L,4贮存,有效期1个月。5.2 3 羧甲基纤维素钠标准工作液:分别吸取羧甲基纤维素钠储备液(5.2 2)0m L、1.0 0m L、2.0 0m L、3.0 0m L、4.0 0m L、5.0 0 m L,用水定容至1 0 0 m L,对应溶液质量浓度分别为0 m g/L、1 0.0
12、m g/L、2 0.0m g/L、3 0.0m g/L、4 0.0m g/L、5 0.0m g/L,现配现用。5.2 4 基体干扰物质(M a t r i x i n t e r f e r e n c e,以下简称M I)母液:基体干扰物质由实验室自制,制备方法见附录A。称取0.1g(精确至0.0 0 1g)M I,用水溶解并定容至1 0 0m L,4贮存,有效期1个月。5.2 5 M I工作液:分别吸取M I母液(5.2 4)0m L、2.0 0m L、4.0 0m L、6.0 0m L、8.0 0m L、1 0.0 0m L,用水定容至1 0 0 m L,对应质量浓度分 别为0 m g/
13、L、2 0.0 m g/L、4 0.0 m g/L、6 0.0 m g/L、8 0.0 m g/L、1 0 0.0m g/L,4贮存,即配即用。5.2 6 透析袋(截留分子量60 0 0D a 80 0 0D a,MD:4 4mm):使用前裁剪成长度8.00.5c m的小段,置于烧杯中加适量水,煮沸1 0m i n,换水后备用,临用时处理。6 仪器与设备6.1 紫外可见分光光度计(波长范围含4 2 0n m、5 4 0n m、6 4 0n m),配光程为0.5c m石英比色杯。6.2 离心机:转速不低于1 00 0 0r/m i n。2S N/T4 6 7 5.3 22 0 2 2以正式出版文
14、本为准6.3 恒温水浴锅。6.4 电子天平:感量为0.0 0 01g。6.5 旋涡混合器。6.6 旋转蒸发仪。7 分析步骤7.1 标准曲线的制作7.1.1 羧甲基纤维素钠标准曲线的制作取系列浓度羧甲基纤维素钠标准工作液(5.2 3)各2.0m L,装入透析袋(5.2 6)中,将透析袋放入装有2.0L水的烧杯中,透析1 5h,取0.5m L透析后工作液于2 0m L具塞玻璃试管,加入2,7-二羟基萘溶液(5.1 9)4.5m L,涡旋混匀,置沸水浴中2.0h,其间每0.5h震荡试管,反应结束后冷却至室温。以0m g/L反应液调零,分别于4 2 0n m和5 4 0n m处测得吸光值A4 2 0和
15、A5 4 0,以标准工作液浓度为横坐标,吸光度差值(A5 4 0-A4 2 0)为纵坐标,绘制羧甲基纤维素钠的标准曲线L 1。7.1.2 基体干扰物质工作曲线的制作7.1.2.1 取系列M I工作液(5.2 5)0.5 0m L,加入0.5m L水,再加入L o w r y试剂(5.2 1)1.0m L,涡旋混匀,2 5水浴中反应1 0m i n,再加入0.2m L福林酚试剂(5.9),2s内混匀,2 5水浴中反应3 0m i n,以0m g/L反应液调零,以M I浓度为横坐标,6 4 0n m处吸光值为纵坐标,绘制工作曲线L2。7.1.2.2 取系列M I工作液(5.2 5)0.5 0m L
16、于2 0m L具塞玻璃试管,加入2,7-二羟基萘溶液(5.1 9)4.5m L,反应条件同7.1.1;以0m g/L反应液调零,以M I浓度为横坐标,以4 2 0n m和5 4 0n m处吸光值为纵坐标,分别绘制4 2 0n m和5 4 0n m下的工作曲线L3和L4。7.2 样品前处理取1.0m L(V1)样品(起泡葡萄酒需超声脱气5.0m i n)于1 0m L离心管中,加入1.5m L0.1%氯化十六烷基吡啶溶液(5.2 0),混匀后室温下静置2 0m i n,再加入5.0m L无水乙醇(5.8),静置1 5m i n,90 0 0r/m i n离心1 5m i n,弃去所有液体,沉淀用2.0m L0.0 5m o l/L盐酸溶液(5.1 6)复溶并转移至透析袋(5.2 6)中,透析条件同7.1.1,将透析后样品用移液管转入试管中,记录体积记为V2。注:透析体积和容器视实际情况选择,确保每毫升样品1 5h内使用2.0L水,可使用磁力搅拌,下同。8 试样测定取0.5m L透析后样品于2 0m L具塞玻璃试管,加入2,7-二羟基萘溶液(5.1 9)4.5m L,反应条件同7.1.1,
