1、GB8788-88附录A高铁血红蛋白定量测定法(补充件)A.1原理高铁血红蛋白在波长630m处有一特有的吸收光带，当加入氰化物后，高铁血红蛋白即转化为氰化血红蛋白，此吸收光带亦随即消失。因此加入氰化物前后用分光光度计（或光电比色计）测定其吸光度之差，按标准计算高铁血红蛋白的含量。A.2试剂a.1/15M磷酸氢二钠溶液：准确称取NHP0.12H,023.87g,用蒸馏水溶解稀释至1L。b.1/15M磷酸二氢钾溶液：准确称取KH,PO,9.07g,用蒸馏水溶解稀释至1L。c,1/60MpH6.6磷酸盐缓冲液：量取1/15M磷酸氢二钠溶液3.75ml,1/15M磷酸二氢钾溶液6.25ml,蒸馏水30
2、ml,混合后即可使用（此液用时配制）。d.5%(W/P)氰化钾（钠）溶液.e.5%(W/T)高铁氰化钾溶液t.1%triton X-100(辛烷基酚聚氧乙烯酰)溶液。A.3操作步骤取2支小试管，以“A”、“B”编号，各加1/60MpH6.6磷酸盐缓冲液4.5ml,被检查末梢血40l,0.5ml1%triton X-100。“A”管于630nm波长，以磷酸盐缓冲液或蒸馏水调零测得吸光度为D,后，加入5%氰化钾（钠）溶液50山，混匀，放置2min,以同样波长测得吸光度为D,。“B”管加入5%高铁氰化钾溶液50川l,在25min后，在630nm波长处测得吸光度为D,然后加入5%氰化御（钠）液50ul
3、,混匀，放置2mn,以同样波长测得吸光度为D,。A,4计算方法高佚血红蛋白/总血红蛋白(6)=公二及100A.5方法说明A.5.1高铁血红蛋白形成后，由于红细胞中还原酶的存在，可使高铁血红蛋白逐渐还原消退，因此必须立即采样，若现场不能分析，可将抗凝血直接采于缓神液内，贮存在2一4冰壶内（保存期不超过10),带回实验室测定。抗凝剂以肝素为佳，禁用草酸盐，因其会导致高铁血红蛋白生成。A.5.2本法必须使用分辨能力强的分光光度计，而且在使用前必须校验分光器的波长是否准确。A.5.3全血在加入试剂后，血细胞破坏。由于少量碎片的存在，使溶液发生混浊，影响吸光度（尤其是正常人会出现负值)，使用非离子表面活性剂riton X-l00稀释液，或经过离心步骤可克服血红蛋白的混浊。3
