1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中氮哌酮及其代谢产物残留量的检测方法气相色谱质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犪 狕 犪 狆 犲 狉 狅 狀 犲犪 狀 犱 犻 狋 狊犿 犲 狋 犪 犫 狅 犾 犻 狋 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犌 犆 犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前
2、言本标准的附录 和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李波、郭德华、王传现、卫锋、杨惠琴、林维宣、邓晓军、朱坚、韩丽。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口动物源性食品中氮哌酮及其代谢产物残留量的检测方法气相色谱 质谱法范围本标准规定了动物源性食品中氮哌酮及其代谢产物氮哌醇残留量检测的气相色谱 质谱测定方法。本标准适用于猪肉和猪肾中氮哌酮及其代谢产物氮哌醇残留量的测定和确证。方法提要试样用乙腈提取，经 柱净
3、化，酸性乙腈洗脱，正己烷液液分配，叔丁基甲醚萃取后，氮哌醇再经硅烷化衍生，用气相色谱 质谱法测定，内标法定量。试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。甲醇：液相色谱纯。正己烷：液相色谱纯。乙腈：液相色谱纯。乙酸乙酯：液相色谱纯。叔丁基甲醚：液相色谱纯。硫酸：。氢氧化钠。氯化钠。氯化钠溶液：称取 氯化钠溶于适量水中，并用水定容至。硫酸溶液：将 硫酸（）缓缓加入装有 水的烧杯中，混匀冷却至室温备用。硫酸溶液：移取 硫酸溶液（）至装有 水的 量杯中，加水至。硫酸溶液：移取 硫酸溶液（）至装有 水的量杯中，加水至。酸性乙腈溶液：在 乙腈中加入 硫酸溶液（）。氢氧化钠溶液：称取 氢氧化钠
4、溶于适量水，并用水定容至。乙腈饱和正己烷溶液：取 正己烷，乙腈于分液漏斗中，振荡混匀，待用。衍生化试剂：双三甲基硅基三氟乙酰胺（）三甲基氯硅烷（）（，体积比）。，六氯联苯（）：纯度大于等于。内标溶液：用乙酸乙酯配制，六氯联苯（）浓度为 。氮哌酮标准品（，号：，分子式：）：纯度大于等于。氮哌醇（，号：，分子式：）标准溶液：甲醇溶液，在 下避光保存。氮哌酮标准储备溶液：准确称取适量氮哌酮标准品，用甲醇配制成浓度为 的标准储备液，在 下避光保存，有效期半年。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 混合标准工作溶液：各准确移取 氮哌醇标准溶液（）和氮哌酮标准储备溶液（）于 棕色容量瓶并用甲醇定容
5、，溶液浓度约为 。在 下避光保存，有效期个月。柱：，或相当者。仪器和设备 气相色谱 质谱仪：四极杆质谱仪，配有 源并具有选择离子功能。分析天平：感量 和 。旋涡混匀器。组织捣碎机。旋转蒸发器。固相萃取装置。离心机：转速不低于 ，配有 和 塑料离心管。氮气吹干仪。超声波水浴。试样制备与保存 试样制备从所取全部样品中取出有代表性样品约 ，充分捣碎均质，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。试样保存将试样于 以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取称取约均匀试样（精确到 ），置于 塑料离心瓶中，加 乙腈，置于旋涡混匀器上涡旋混匀，再超声
6、提取 ，离心 。吸取 上层乙腈溶液至一已存放 氯化钠溶液（）的玻璃瓶中，混匀，置存放约，待净化。净化将 柱（）安装到固相萃取装置上，用 甲醇和 水活化，加入上述提取液（），控制流速滴，用 硫酸溶液（）淋洗，并排干柱中液体，再用 酸性乙腈溶液（）洗脱并收集于 塑料离心管中，于 下用氮气吹至约 。立即加 乙腈饱和的正己烷（），并在旋涡混匀器上高速混匀 后，离心 ，弃去正己烷层，再加 乙腈饱和的正己烷重复操作一次。残留溶液加入 氢氧化钠溶液（），调节 至，慢慢加入 叔丁基甲醚，旋涡混匀 后，离心 ，移取上层有机相至一玻璃小试管中，再用 叔丁基甲醚重复提取次，合并提取液于 下用氮气吹干。衍生化用 甲醇
7、溶解残渣并转移至衍生瓶中，再重复操作一次，合并溶液。同时吸取、混合标准使用溶液（）于另一系列衍生瓶中。同步把样品提取液和混合标准溶液在 下用氮气吹干，加入 衍生化试剂（），混匀，于 烘箱内衍生 ，冷却后用氮气吹干，加 内标溶液（）溶解残渣，供气相色谱 质谱测定。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 测定 气相色谱 质谱条件）色谱柱：，（内径）（膜厚），或相当者；）升温程序：保持 ，以 升至 （保持 ），再以 升至 （保持 ）；）载气：氦气，纯度 ，流速 ；）进样口温度：；）进样方式：无分流进样，后开阀；）进样量：；）电离方式：，；）接口温度：；）离子源温度：；）溶剂延迟：；）测定方式：
8、选择离子监测方式（）；）监测离子：见表。表氮哌酮和氮哌醇衍生物的监测离子及其丰度比名称监测离子（）监测离子丰度比氮哌醇衍生物 （定量离子）、氮哌酮 （定量离子）、内标 （定量离子）气相色谱 质谱测定根据样液中被测组分含量，选定浓度相近的标准工作溶液。其响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液与样液等体积参插进样测定，以色谱峰面积按内标法定量。在上述色谱条件下，内标 、氮哌醇衍生物和氮哌酮的参考保留时间分别为 、，标准溶液的选择离子色谱图参见附录 中图 。气相色谱 质谱确证在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差在 之内；并且被测样液与标准品的质谱图相
9、似，所选择的全部监测离子均出现；而且之间的丰度比也相一致，其允许偏差不超过表规定的范围时，则可确定为样品中存在这种药物残留。标准品的质谱图参见附录中图 和图。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（）计算样品中氮哌酮和氮哌醇残留量。计算结果需扣除空白值。犡犻犮犮 犃犻犃 犞犮 犃 犃犿（）犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售式中：犡犻 试样中氮哌酮或氮哌醇残留量，单位为毫克每千克（）；犮 标准工作溶液中氮哌酮或氮哌醇的浓度，单位为微克每毫升（）；犮 样液中内标物的浓度，单位为微
10、克每毫升（）；犃犻 样液中氮哌酮或氮哌醇的峰面积；犃 标准工作溶液中内标物的峰面积；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犮 标准工作溶液中内标物的浓度，单位为微克每毫升（）；犃 样液中内标物的峰面积；犃 标准工作溶液中氮哌酮或氮哌醇的峰面积；犿 最终样液代表的试样质量，单位为克（）。本方法氮哌酮的残留量测定结果系指氮哌酮和氮哌醇残留量之和。测定低限和回收率 测定低限本方法测定低限：。回收率 猪肉添加水平为 时，氮哌酮回收率为 ；氮哌醇回收率为 。添加水平为 时，氮哌酮回收率为 ；氮哌醇回收率为 。添加水平为 时，氮哌酮回收率为 ；氮哌醇回收率为 。猪肾添加水平为 时，氮哌酮回收率为 ；氮哌醇
11、回收率为 。添加水平为 时，氮哌酮回收率为 ；氮哌醇回收率为 。添加水平为 时，氮哌酮回收率为 ；氮哌醇回收率为 。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（资料性附录）标准品选择离子色谱图 ；氮哌醇衍生物；氮哌酮。图犃 氮哌醇标准品衍生物、氮哌酮标准品的选择离子色谱图犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犅（资料性附录）标准品质谱图图犅 氮哌醇标准品衍生物的全扫描质谱图图犅 氮哌酮标准品的全扫描质谱图犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃犪 狀 犱犪 狀 狀 犲 狓犅狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉
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13、 犪 狀 犵 犺 犪 犻犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪，犔 犻 犪 狅 狀 犻 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻
14、狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犔 犻犅 狅，犌 狌 狅犇 犲 犺 狌 犪，犠 犪 狀 犵犆 犺 狌 犪 狀 狓 犻 犪 狀，犠 犲 犻犉 犲 狀 犵，犢 犪 狀 犵犎 狌 犻 狇 犻 狀，犔 犻 狀犠犲 犻 狓 狌 犪 狀，犇 犲 狀 犵犡 犻 犪 狅 犼 狌 狀，犣 犺 狌犑 犻 犪 狀，犎 犪 狀犔 犻 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿
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