1、ICS 65.020.30 B 45 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13762011 鸡蛋中氟苯尼考的残留测定 高效液相色谱法 Determination of florfenicol residues in eggs by HPLC method 2011-03-16 发布 2011-04-16 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 13762011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草
2、人：李珲、许世富、汤春莲、陶小平、丁作坤、陈文帮。DB34/T 13762011 1 鸡蛋中氟苯尼考的残留测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了鸡蛋中氟苯尼考检验的高效液相色谱法（HPLC）测定方法。本标准适用于鸡蛋中氟苯尼考残留的定量检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 14699.1 抽取有代表性的不少于 500 g 的鸡蛋样
3、品，经匀浆后装入磨口瓶中在-18 冰箱保存备用。4 原理 试样中残留的氟苯尼考经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂，高效液相色谱仪测定，外标法定量。5 试剂和材料 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。5.1 氟苯尼考标准品：纯度98。5.2 甲醇：色谱纯。5.3 乙酸乙酯。5.4 正己烷。5.5 氢氧化铵：2528。5.6 无水硫酸钠：经 300 灼烧 4 h，置于干燥器中备用。5.7 流动相：甲醇：水（40：60）。5.8 聚丙烯离心管：50 mL，1.5 mL。5.9 比色管：50 mL，具塞。5.10 梨形瓶：25 mL。5.11 滤膜：0.45 m，
4、无机相。DB34/T 13762011 2 5.12 氟苯尼考标准储备液（1 mg/mL）：准确称取氟苯尼考标准品 100 mg，用甲醇稀释至 100 mL，摇匀，-18 保存，有效期 90 d。5.13 氟苯尼考工作液（10 g/mL）：准确移取（5.12）中氟苯尼考标准储备液 1.0 mL，用甲醇稀释配制成 100 mL，摇匀，-4 保存，有效期 30 d。5.14 氟苯尼考标准溶液：取氟苯尼考工作液（5.13）适量，分别用流动相（5.7）稀释为 0、20、50、100、200、400 ng/mL 的标准溶液，摇匀，4 保存，有效期 7 d。6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪，配置二极
5、管阵列检测器或紫外检测器。6.2 离心机，转速不低于 4000 r/min。6.3 振荡器。6.4 涡旋混合器。6.5 分析天平：感量 0.0001 g，0.01 g。6.6 超声波清洗器。6.7 组织匀浆机。6.8 旋转蒸发仪。7 测定步骤 7.1 试样提取 称取均质后的试样 5 g（精确至 0.01 g），置于 50 mL 聚丙烯离心管中，依次加入 30 mL 乙酸乙酯（5.3），0.9 mL 氢氧化铵（5.5），5 g 无水硫酸钠，振荡提取 30 s，以 4000 r/min 离心 5 min，上清液转移至 50 mL 比色管中，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀后取 10 mL 乙酸乙酯提取液
6、到 25 mL 梨形瓶中，45 水浴中旋转浓缩至干。7.2 试样净化 梨形瓶中的残渣用 3 mL 水溶解，超声 5 min，加入 3 mL 正己烷（5.4）涡旋混合 30 s，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加 3 mL 正己烷（5.4）涡旋混合 30 s，静置分层，移取 1 mL 水相于 1.5 mL 的聚丙烯离心管中，以 8000 r/min 离心 5 min，经 0.45 m 滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析。7.3 色谱测定 色谱柱：C18(4.6250 mm，5 m)，或相当者。柱温：40。进样体积：20 L。流速：1.0 mL/min。检测波长：365 nm。流动相：甲醇-水（40：6
7、0）。7.4 上机测定 DB34/T 13762011 3 取适量试样溶液和相应浓度的标准溶液，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。标准溶液及试样液中氟苯尼考的相应值均在仪器检测的线性范围内，标准溶液高效液相色谱图见附录 A 中图A.2。8 结果计算 按照下式计算试样中各种药物的含量：1000mAs1000VCsAX=.(1)式中：X 试样中各种药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值；V 定容体积，单位为毫升（mL）；Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）。平行测定结果
8、用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法在鸡蛋中的检出限为 20 g/kg。9.2 准确度 本方法在添加浓度为 80 g/kg 添加水平的回收率均为 70110。9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。DB34/T 13762011 4 A A 附 录 A（资料性附录）色谱图 A.1 空白鸡蛋样品溶液色谱图 图A.1 空白鸡蛋样品溶液色谱图 A.2 标准物质溶液色谱图 图A.2 标准物质溶液色谱图 DB34/T 13762011 5 A.3 空白鸡蛋中添加标准物质溶液色谱图 图A.3 空白鸡蛋中添加标准物质溶液色谱图 _
