1、SN0296-93氟化碳再重复提取两次,合并四氯化碳至上述茄形瓶中,于5060水浴中用旋转蒸发器浓缩至干,加入0.5mL甲醇溶解残留物供TLC实验用。此样液中相当于禽肉试样浓度为15g/mL。3.4.3测定3.4.3.1生物自显影将每个样品及标准溶液分别点在四块薄层板上,先于每块薄层板下端2c处划一条基线,然后在这条基线上分别点20L试液和3g(效价)/mL莫能菌素标准溶液,试液和标准溶液点相距2.5cm。在展开缸中用乙酸乙酯进行展开,直至溶剂前沿线距板顶端1.5m处为止,取出薄层板,风干后备培养用。将薄层板水平置于高压灭菌的长方形培养皿中,无菌操作将已熔化并冷却至5055的生物自显彩用培养基
2、均匀地喷在其表面上,然后用10L上述接种芽胞菌悬液的培养基铺满整个薄层板,保持水平,待其凝固,于37土1培养18h。3.4.3.2对照试验除不加试样外,按上述测定步骤进行。3.5结果计算和表述经过培养后,在薄层板上与莫能菌素标准液产生抑菌圈的R:值(约0.38)相同位置上,显现抑菌圈者即为阳性。当样品判定为阳性时,测量四块薄层板上的试液及标准溶液产生的抑菌圈直径,分别计算出平均值。当每组四个直径值的相对标准偏差(RSD)均不超过5%时,并且试液的抑菌圈直径与标准溶液(20L)的抑菌圈直径近似(直径相差不超过土1mm),则其样品中莫能菌素含量按下式计算:式中:X一样品中莫能菌素的含量,mgkg;c一试验中所用的标准溶液的浓度,g/mL;m一最终试液所代表的禽肉试样的浓度,g/mL。4测定低限、回收率4.1测定低限本方法测定低限为0.20mg(效价)/kg。4.2回收率回收率的实验数据:莫能菌素浓度在0.200.67mg(效价)/kg范围内,回收率为81%100%。3