1、NY/T4362-20238.2.2液态试样的制备平行做2份试验。准确吸取试样1mL,用硼酸缓冲溶液(5.11)定容至100mL,摇匀。吸取适量溶液用硼酸缓冲溶液(5.11)稀释，稀释后的待测酶液中角蛋白酶活力控制在10U/mL15U/mL。8.3L-酪氨酸标准曲线的绘制分别准确吸取L酪氨酸标准系列溶液(5.15)各1mL,于具塞试管中（每个浓度做2个平行），分别加人5.0mL碳酸钠溶液(5.2)和1.0mL福林工作溶液(5.8)，摇匀。置于(40士0.2)水浴中显色20min,取出，置于冷水中，迅速冷却至室温，用10mm比色皿，以不含酪氨酸的0管为空白，在分光光度计波长680m处分别测定其吸
2、光度。以吸光度为横坐标、L-酪氨酸浓度为纵坐标绘制标准工作曲线，标准曲线的相关系数R2不低于0.99。利用标准曲线，计算出当吸光度为1时的L-酪氨酸的量(g),即为吸光常数K值。K值应在95105范围内；反之，需重新配制试剂，进行试验。注：L酪氨酸标准稀释溶液应在配制后立即进行测定。8.4试样溶液测定8.4.1试样空白溶液的测定吸取1.00mL稀释好的酶液(8.2)置于10mL试管中，(40士0.2)水浴2min。加入2.00mL三氯乙酸溶液(5.3)，混匀，(40士0.2)保温10min。加入1.00mL预热的酪蛋白溶液(5.12)，混匀.8.4.2试样溶液的测定吸取1.00mL稀释好的酶液
3、(8.2)置于10mL试管中，(40士0.2)水浴2min。加人1.00mL预热的酪蛋白溶液(5.12)，混匀，(40士0.2)保温10min。加人2.00mL三氯乙酸溶液(5.3)，混匀。8.4.3显色反应将混匀后的试样空白溶液(8.4.1)与试样溶液(8.4.2)分别置于室温下静置10min,用滤纸过滤。分别取1.00mL滤液，加人5.00mL碳酸钠溶液(5.2)、1.00mL福林工作溶液(5.8)，(40士0.2)保温20min显色。冷却至室温后，于680nm波长下，用10mm比色皿分别测定空白吸光度(A。)与试样吸光度(A).9试验数据处理试样中角蛋白酶活力以X计，数值以酶活单位每克(
4、U/g)或酶活单位每毫升(U/L)表示，按公式(1)计算。X=g-p)X4Xn.(1)m10式中：一根据试样吸光度A由标准曲线计算出的试样溶液中L酪氨酸浓度的数值，单位为微克每毫升（g/mL);P一根据空白吸光度A。由标淮曲线计算出的空白溶液中L酪氨酸浓度的数值，单位为微克每毫升（g/mL);n一试样的稀释倍数：4-酶反应体系总体积的数值，单位为毫升(L):m一称取或吸取试样量的数值，单位为克或毫升(g或L)；10一反应时间的数值，单位为分钟(min)。测定结果以平行测定的算术平均值表示，计算结果保留至整数。10精密度在重复性条件下，获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于其算术平均值的10%。3
