1、ICS65.120B46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T2895-2016饲料中叶酸的测定高效液相色谱法Determination of folic acid in feeds-High performance liquid chromatography2016-05-23发布2016-10-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T2895-2016饲料中叶酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中叶酸含量测定的高效液相色谱方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料（反刍动物饲料除外）中叶酸的测定。本标准的方法定量限为0.3mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的
2、应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理用碳酸钠溶液提取饲料中的叶酸，提取液经阴离子交换固相萃取小柱净化富集后，注入反相高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器检测。4试剂和材料除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级用水。4.1甲醇：色谱纯。4.20.1mol/L碳酸钠溶液：称取10.6g无水碳酸钠，用水溶解并定容至1000mL。4.3
3、0.1mol/L EDTA溶液：称取37.2g二水合乙二胺四乙酸二钠，用水溶解并定容至1000mL。4.40.05mol/L磷酸二氢钠溶液(pH=6.30):称取二水合磷酸二氢钠7.8g,用水溶解并定容至1000mL。用0.1mol/L的NaOH调pH至6.30。4.5固相萃取洗脱液：甲酸+甲醇+水=5+75+20。4.6叶酸对照品：纯度大于等于97.4%。4.7叶酸标准储备液：准确称取叶酸对照品适量，用0.1ol/L碳酸钠溶液溶解，加入100g抗坏血酸并用水定容至50mL棕色容量瓶中，配制成250ug/mL的标准储备液。4避光保存，有效期为2个月。4.8叶酸标准工作液：准确量取1mL叶酸标准储备液，用水定容至50mL容量瓶中，稀释成5.0gmL的标准工作溶液。现配现用。4.9固相萃取柱：200mg/6mL,混合型阴离子交换柱。4.10微孔滤膜(PTFE):0.22um。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3超声波振荡器。
