1、rI中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4进出口肉及肉制品中2甲4 氯及2甲4氯丁酸残留量检验方法De t e r mi n a t i o n o f M CP A a n d MCP Br e s i d u e s i n me a t a n d me a t p r o d u c t s f o r i mp o r t a n d e x p o r t2 0 0 4-0 6-0 1 发布2 0 0 4-1 2-0 1实施中华人民共和匡国家 质 量 监 督检 验 检 疫 总 婿S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4前言本标准的附录A为资
2、料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出人境检验检疫局、天津中医学院第一附属医院起草。本标准主要起草人:林安清、许13 4 1 唐丹舟、垢静。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4进出口肉及 肉制品中 2甲 4 氯及2甲4氯丁酸残留量检验方法范围 本标准规定了进出口肉及肉制品中2甲4 抓及 2甲4 抓丁酸残留量检验的抽样、制样和气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于进出口冻分割牛肉中2甲4 氯及 2甲4 氯丁酸残留量的检验。2抽样和制样2.1 检验批 以不超过2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批的商品应
3、具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等2.2 抽样数t 抽样数量见表 1,表 1单 位 为 件批 量最 少 抽 样 数1 -2 5一I2 6-1 0 051 0 1 -2 5 0一2 51 一 5 0 01 55 0 1 -1 0 0 01 7 0 0 一 2 5 0 0一2.3 抽样方法 按 2.2 规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。肉及肉制品:从每件中取一袋作为原始样品，其总量不少于2 k g，放人清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。如每件中无小包装或有小包装但每袋重量超过 2k g 者，则可用锋利刀(用酒精灭菌过)在抽出的包件中，每件割取不少于 1 0 0 g,混合后
4、置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2 k g。加封后，标明 标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 肉及肉制品:从所取全部样品中取出有代表性样品约 1 k g，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化2.5 试样保存 将试样于一1 8 冷冻保存。测定方法3.1 方法提要 在酸性条件下，用三氯甲烷提取组织中残留的2甲4 氯、2甲4 氯丁酸及其钠盐，并转移至碱液中，S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4用有机溶剂洗涤后再将其酸化，2甲4 氯,2甲4氯丁酸再用三氯甲烷提取。蒸除溶
5、剂将其甲醋化，用气相色谱一 质谱仪检测，外标法定量。3.2 试荆和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1 三氯甲烷:重蒸馏。3.2.2乙醇。3.2.3 正 己烷:重蒸馏。3.2.4甲醇。3.2.5 乙醚:重蒸馏。3.2.6 硫酸一 水(1+9):用优级纯浓硫酸配制。3.2.7 氢氧化钠:优级纯。3.2.8 氢氧化钠溶液(3 0 g/L):称取 3 0 g氢氧化钠(3.2.7)溶于 1 0 0 0 mL蒸馏水。3.2.9 氯化钠:优级纯，于 6 0 0 灼烧 4 h.贮于具塞瓶中。3.2.1 0 饱和氯化钠溶液:用足量氯化钠(3.2.9)溶解于蒸馏水中直至不溶解。3.2.1
6、1 无水硫酸钠:于 6 5 0 灼烧 4h，储于密封容器中备用。3.2.1 2 硫酸钠溶液(4 0 g/L):称取4g无水硫酸钠(3.2.1 1)溶解于 1 0 0 m L蒸馏水中。3.2.1 3 三氟化硼一 乙醚溶液:市售，避光保存。3.2.1 4 甲酷化溶液:将三氟化硼一 乙醚(3.2.1 3)和甲醇，于一1 5 下预冷后，将 3 0 mL冷三氟化硼一 乙醚试剂和 1 2 0 mL冷甲醇混合，于。4 储存备用3.2.1 5 2甲4 氯,2甲4 氯丁酸标准品:纯度)9 9 写3.2.1 5.1 2甲4氯,2甲4 氯丁酸标准溶液:准确称取适量的2甲4氯,2甲4 氯丁酸标准品，用甲醇配制成浓度为
7、。.1 mg/m L标准储备溶液。再以甲醇稀释成适用浓度的标准工作溶液。3.3仪器和设备3.3.1 气相色谱一 质谱联用仪。3.3.2 高速均质器。3.3.3心形瓶:2 5 0 mL,3.3.4 密封试管:1 5 mL，带螺旋盖(配聚四氟乙烯内衬密封垫)。3.3.5恒温水浴箱。3.4 测定步骤3.4.1 提取及净化 称取搅碎混匀的试样约2 0 g(精确到0.0 1 g)于锥形瓶中，加 1 5 m1乙醇,5 mL硫酸一 水(3.2.6),1 0 g 氯化钠(3.2.9)和1 0 0 m L 三氯甲 烷(3.2.1)。在高速均质器上均质提取5 m i n。通过快速滤纸过滤，滤液收 集于2 5 0
8、m 1分 液漏斗中。用约5 0 m L 三氯甲 烷分三次洗涤锥形瓶及滤渣，合并洗液于 分液漏斗中.于上述分液漏斗中加2 5 mL氢氧化钠溶液(3.2.8)和5 0 mL蒸馏水，再加人 1 0 mL饱和氯化钠(3.2.1 0)。此时水相p H应大于1 2，否则应补加适量氢氧化钠溶液(3.2.8)对于极易乳化的样品可再补加约3 g 氯化钠(3.2.9),振摇提取2 m i n。静置分层，弃去三氯甲烷层用 2 5 m L三氯甲烷洗涤水层两次，弃去三氯甲 烷层 再用2 5 m L 乙醚洗涤水层，静置分层，将下 层水相转移至另一2 5 0 m L分液漏斗中，弃去乙醚层。于上述水相中，加入2 5 m L硫
9、酸一 水(3.2.6)进行酸化，摇匀。水相 p H应小于2，否则应适量补加硫酸一 水(3.2.6)，然后分别用5 0 mL,2 5 m L,2 5 m L三氯甲烷提取水相。将三氯甲烷提取液收集于2 5 0 m L心形瓶中。于 6 0 水浴中通以氮气流将三氯甲烷挥发至约3 -5 mL。完全转移至密封试管(3.3.4)中。再用氮气流于 5 0 水浴中吹干。3.4.2甲醋化 于上述密封试管中，加 1 mL甲醋化溶液(3.2.1 4)，用螺旋盖密封。充分振动混匀，于 7 0 水浴酷S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4化 1 h，放冷至室温。以约 1 0 mL硫酸钠溶液(3.2.1 2)将甲醋液转
10、移至 2 5 m L具塞试管中，分别以4 m L 正己烷提取两次。用滴管将正己烷层转移至另一 2 5 m L具塞试管中，用2 mL硫酸钠溶液洗涤正己烷层两次，用滴管吸除水层，将正己烷层转移至 1 0 m L容量瓶并以正己烷定容。吸取上述正己烷榕液3 -5 m L于1 0 m L 具塞试管中，加约1 g 无水硫酸钠，振摇脱水。供气相色 谱一 质 谱分析。3.4.3 2甲4氮,2甲4氮丁酸标准工作溶液的制备 准确吸取适用浓度的2甲4 氯,2 甲4抓丁酸标准溶液1 mL(3.2.1 6)于带螺旋帽盖的试管(3.3.4)中，用氮气流于 5 0 水浴中吹干，按 3.4.2操作进行甲酷化。3.4.43.4
11、.4.a)b)c)d)e)f)3.4.4.2 a)b)c)d)e)f)测定 色谱条件色谱柱:弹性石英毛细柱 D B S MS 3 0 mX0.3 2 mm(内径)X0.2 5 p m或相当者;_2 0 C/ml.服程序:5 0 1:;2 4 0 C(1 0 mi n);汽化室温度:2 5 0 C;载气:氦气，纯度 9 9.9 9 9%，流速 1.2 m L/mi n;进样方式:无分流;进样量:1 H L,质谱条件接口温度:2 5 0 0C;离子源:电子轰击源(E D;电子能量:7 0 e V;离子源温度:2 0 0 0C;检测方 式:S I R;选择离子(m/z)及相对丰度(%):见表2.表
12、2选择离子及相对丰度被 侧 组 分2甲4氯甲酷2甲4 氛丁酸甲酷选择离子/(m/z)1 4 11 5 721 421 61 011 0 7.1 4 22 1 1相对丰度/(%)8 52 01 0 03 41 0 01 3983.4.4.3 气相色谱一 质谱测定 对样液(3.4.2)及标准工作溶液(3.4.3)等体积参插进样测定。实际应用的标准工作溶液及待测样液中，2甲4氯甲醋,2甲4 氯丁酸甲醋的响应值均应在仪器线性范围内。在上述条件下 2甲4 氯甲酷、2甲4 氯丁酸甲酷保留时间分别约为7.8 m i n和 9.1 mi n。标准品气相色谱一 质谱图参见附录A.3.4.4.4 空白试验 除不加
13、样品外，按上述相同条件和步骤进行。3.5 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值。(1)V一1、-AA-了 -式中:X 试样中2甲4氯或2甲4氯丁酸含量，单位为毫克每千克(mg/k g);A 样液中 2 甲4氯甲酷或2甲4 氯丁酸甲醋的峰面积，单位为毫米(m m);A标准溶液中2甲4氯甲醋或 2甲4氯丁酸甲醋的峰面积，单位为毫米(m m);c 标准工作溶液中2甲4 氯或 2甲4 氯丁酸浓度，单位为微克每毫升(p g/m L);V 样液最终定容体积，单位为毫升(mL);S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4。最终样液所代表的试样量，单位为克(9)。4 方法的测
14、定低限、回收率4.1 测定低限 本方法测定低限为:0.0 2 m g/k g.4.2 回收率 牛肉中2甲4 氯添加浓度及回收率的实验数据:在。.0 2 m g/k g时，回收率为8 5.5%;在。，1 0 m g/k g 时，回 收率为9 5,0 写;在 0.2 0 m g/k g时 回收率为9 2.0%e 牛肉中 2 甲4氯丁酸添加浓度及回收率的实验数据:在0.0 2 m g/k g时，回收率为9 0.0%;在0.1 0 m g/k g 时，回 收率为9 0.0 0 0;在 0.2 0 m g/k g时，回收率为9 3.0%S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4 附录A (资料性附录)标
15、准物气相色谱一 质谱图M CPA.R1 007.8 02S c a n E l-T TC9.0 R2%7.00 08.00 09.0 001 0.00 0图A.2甲4氮及2甲4抓丁酸标准衍生物气相色谱一 质谱图(T I C)M C P A(7.8 0 2 mi n10 021 4Sca n E l26 61 5 5%1 257721 6/|1.;les比份，5 16 3 7 41 4 31.5 41 5 7，1 5 81 8 289际丫5g1 I 32 171 6 71 84习洲6 08010 01 2 016 01 8020 0图A.2 2甲4 氮标准衍生物质谱图S N/T 1 3 9 2-
16、2 0 0 4MC P B(9.0 8 2 m in 1 011 00S-2 昆5 9%6 9 7 71 0 7二:.142J r2112 42891_ 1 5 71 93608 01 001 6018 020 022 02 4 0图 A.3 2甲4 点丁酸标准衍生物质谱图S N/T 1 3 9 2-2 0 0 4F or e wo r dAn n e x A o f t h i s s t a n d a r d is on in f o r ma t i v e a n n e x.T h i s s t a n d a r d w a s p r o p o s e d b y a n df i c a t io n a n d Ac c r e d it a t io n.i s u n d e r t h e c h a r g e o f N a t io n a l R e g u la t i o n C o mmis s io n f o r C e r t i-T h is s t a n d a r d w a s d r a f t e d b y T ia n
