1、 ICS 65.020.01 CCS B16 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 25592022 油菜抗黑胫病室内鉴定技术规程 Technical code of practice for indoor resistance evaluation of canola against leptosphaeria biglobosa 2022-05-25 发布 2022-06-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 25592022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提
2、出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、特泥河农牧场有限公司。本文件主要起草人：宋培玲、李子钦、杨永青、燕孟娇、皇甫海燕、贾晓清、皇甫九茹、郭晨、赵丽丽、史志丹。DB15/T 25592022 1 油菜抗黑胫病室内鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了油菜黑胫病的室内鉴定技术中孢子悬浮液制备、接种方法、病情调查及抗病性评价和鉴定的方法。本文件适用于内蒙古油菜生产品种、新育成品-种、区域试验品种、亲本及育种中间材料的黑胫病抗性鉴定和抗性评价。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本
3、文件。油菜黑胫病 phoma stem canker 小球腔菌属Leptosphaeria biglobosa侵染引起的油菜病害。L.biglobosa侵染叶片后，形成具有黄色外缘的典型病斑，病斑内含有黑色分生孢子器。患病茎秆，在茎上部形成灰白色病斑，其上有黑色分生孢子器，病斑具有黑色边界。4 病原菌 病原菌来源 病原菌从内蒙古油菜地中发病植株上分离获得，结合形态学和分子水平鉴定为（L.biglobosa），中等致病力。病原菌的培养及孢子悬浮液的制备 将低温保存的黑胫病菌菌丝体接种在PDA平板上，置于25 恒温培养箱中活化培养。培养14 d后，将3 ml5 mL无菌水加在已产孢的 Lbiglo
4、bosa平板内，静置10 min，无菌载玻片轻刮平板表面，使分生孢子充分释放并悬浮于无菌水中，2 层无菌纱布过滤获得孢子悬浮液，利用血球计数板计数并将浓度调整为1107 个/mL，备用。5 鉴定品种幼苗培养 将供试材料的种子播种在装有无菌土的营养钵（13 cm13 cm）中，每个品种播种3钵，每钵播10粒，置于25、16 h/8 h（光照/黑暗）条件下，待油菜长出两片子叶时，用于接种。DB15/T 25592022 2 6 抗病性鉴定 子叶穿刺接种 油菜子叶期，用无菌针在子叶中央轻刺一下，伤口处接种10 L 1107个/mL黑胫病菌孢子悬浮液，同时以接种等量无菌水为对照。接种后，套上内部湿润的
5、塑料袋，21 下黑暗保湿培养48 h以上。病情调查 接种10 d后，根据油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准（表1）对接种叶片进行调查，并计算病情指数。表1 油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准 病级 症状 0 接种点周围无症状可见 1 接种点周围呈轻微黑色，有黄色晕圈 3 接种点周围出现 1.5-3.0 mm 坏死斑，或有黄色晕圈，有的产生孢子 5 接种点周围出现 3.0-6.0 mm 坏死斑，有的坏死组织有明显的边缘 7 组织灰绿色萎蔫，3.0-6.0 mm 坏死斑，有明显的边缘，有的形成分生孢子器 9 病斑腐烂，叶片枯死，上面有大量的分生孢子器 病情指数（ID）计算公式：（1）式中：ID 病
6、情指数；i 病害级别，i=0,1,3,.，n（0健株级别；n最严重病害级别）；Xi第i级的病株数（i=0时，X0为0级健株数）；求和号，表示对它后面的变量（iXi）求和，即从第一个（i=1）累加到最后一个（n）；Xini=1一一调查总株数（病株和健株）。品种抗性水平划分 依据病情指数计算公式计算病情指数，根据表2进行油菜抗黑胫病等级划分。DB15/T 25592022 3 表2 油菜黑胫病抗性分级标准 抗病性 病情指数 抗病性 病情指数 高抗(H)DI=0 低感(LS)40 DI60 中抗(M)0 DI20 中感(MS)60 DI80 低抗(L)20 DI40 高感(HS)DI 80 DB15
7、/T 25592022 4 参考文献 1 李欣洲,宋培玲,郝丽芬等.油菜黑胫病菌(Leptosphaeria biglobosa)侵染条件研究J.华北农学报.2013，28(2):235-238.2 Delwiche PAGenetic aspects of blackleg(Leptosphaeria maculans)resistance in rapeseed(Brassica napus)D.Madison:University of Wisconsin，1980，144 3 Somda I，Renard M，Brun H Seedling and adult plant reactions of Brassica napus-Bjuncea recombinant lines towards A and B group isolates of Leptosphaeria maculans J Annals of Applied Biology，1998，132:187-196
