1、ICS 65.120 B 46 T/ZZB 14062019 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌 Microorganism feed additive-Bacillus licheniformis 2019-12-06 发布 团体标准 浙江省品牌建设联合会 发 布 2019-12-31 实施 T/ZZB 12062019 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 基本要求.1 5 技术要求.2 6 试验方法.4 7 检验规则.6 8 标签、包装、运输和贮存.7 9 质量承诺.7 附 录 A（资料性附录）.8 T/ZZB 12062019 II 前 言
2、 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由浙江省品牌建设联合会提出并归口管理。本标准由浙江省标准化研究院牵头组织制定。本标准主要起草单位：浙江惠嘉生物科技股份有限公司。本标准参与起草单位：中国计量大学，浙江省标准化研究院（排名不分先后）。本标准主要起草人：刘金松、杨彩梅、曹广添、曾新福、胡玉华、李慧、张玲玲、郗洪生、吕晓思。本标准评审专家组长：廖上富。本标准由浙江省标准化研究院负责解释。T/ZZB 12062019 1 饲料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌 1 范围 本标准规定了饲料微生物添加剂地衣芽孢杆菌的术
3、语和定义、基本要求、技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存、质量承诺等内容。本标准适用于固态和液态的地衣芽孢杆菌饲料添加剂。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志 GB 4789.5 食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验 GB 4789.10 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定法 两层筛筛分法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB
4、10648 饲料标签 GB/T 13079 饲料中总砷的测定 GB/T 13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T 13081 饲料中汞的测定方法 GB/T 13082 饲料中镉的测定方法 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的测定 GB/T 13092 饲料中霉菌检验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 17480 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 GB/T 18869 饲料中大肠菌群的测定 GB 19541 饲料原料 豆粕 GB/T 23530 酵母抽提物 NY/T 119 饲用小麦麸 NY/T 1444 微生物饲料添加剂技术通则 NY/T 1461 饲
5、料微生物添加剂 地衣芽孢杆菌 国家质量监督检验检疫总局令第75号 定量包装商品计量监督管理办法 3 术语和定义 NY/T 1461界定的术语和定义适用于本文件。4 基本要求 T/ZZB 12062019 2 4.1 设计研发 4.1.1 应具备自主筛选、培育菌种和优化发酵工艺的设计研发能力。4.1.2 具有省级以上或同等能力的研发团队。4.2 原辅材料 4.2.1 豆粕 应符合GB 19541中一级品以上要求。4.2.2 酵母抽提物 应符合GB/T 23530中纯品型要求。4.2.3 麸皮 应符合NY/T 119中二级品以上要求。4.3 工艺装备 4.3.1 应采用液体发酵和喷雾干燥的工艺。4
6、.3.2 应配备发酵后处理、喷雾干燥、震动过筛和包装环节的自动化生产线。液体发酵应采用自动控制系统（DCS）。4.4 检验检测 应具备地衣芽孢杆菌含量、水分、粒度、重金属、总砷、微生物等项目的检验能力。5 技术要求 5.1 微生物指标 5.1.1 菌体形态 5.1.1.1 染色：革兰氏染色为阳性。5.1.1.2 形态特征：菌体细胞（营养体）呈直杆状，单个、成对或短链排列，大小为（0.60.8）m（1.53.0）m，两端钝圆。有芽孢，芽孢近椭圆形，中生，大小为 0.8 m1.3 m，具有稀疏的周身鞭毛，能运动。孢子囊不膨大，内生孢子释放后孢子壳不是多处破裂。5.1.2 菌落形态 5.1.2.1
7、LB 营养琼脂培养基（Luria-Bertani Agar，LB）：菌落呈灰白色或乳白色，圆形或花瓣形。5.1.2.2 营养琼脂培养基（Nutrients Agar,NA）：菌落呈杏仁白色，湿润有光泽，表面略有放射状条纹。5.1.2.3 桑塔斯琼脂培养基（Sautons Agar,SA）：菌落呈乳脂色，湿润有光泽，不透明，中央凸起。5.1.2.4 牛肉浸汁培养基（Beef extract Agar）：菌落呈乳脂色，湿润有光泽，不透明，边缘毛发状。5.1.3 细胞壁化学 T/ZZB 12062019 3 菌体细胞壁水解液含有内消旋二氨基庚二酸（meso-DAP）和甘氨酸，无特征性糖（糖型C），为
8、细胞壁II型。5.1.4 生理生化特征 地衣芽孢杆菌生理生化特征应符合表1的要求。表1 生理生化特征 特征 结果 特征 结果 明胶液化 生长温度范围 15 55 淀粉水解 利用柠檬酸盐 硝酸盐还原 苯丙氨酸脱氨 0.001%溶菌酶生长 酪素分解 7%NaCl 酪氨酸分解 pH 5.58.7生长 牛奶凝固 厌氧洋菜生长 牛奶胨化 V-P试验 利用糖产酸 葡萄糖 卵黄反应 阿拉伯糖 接触酶反应 木糖 吲哚反应 甘露醇 注：为阳性反应；为阴性反应。5.2 感官指标 产品性状可分为固态和液态两类，应符合包装上标明的产品固有的形状、色泽和气味等，均匀程度、杂志等，无异臭味、无发霉变质，无异物。5.3 理
9、化指标 理化指标应符合表2的要求。表2 理化指标 项目 指标 水分（固态菌剂），%9.0 粒度（固态菌剂，孔径850 m试验筛通过率），%95.0 地衣芽孢杆菌菌数，cfu/（g或mL）1.01011 5.4 卫生指标 卫生指标应符合表3的要求。表3 卫生指标 项目 指标 黄曲霉毒素B1，g/kg 10.0 砷（以As计）的允许量，mg/kg 2.0 T/ZZB 12062019 4 表3（续）项目 指标 铅（以Pb计）的允许量，mg/kg 5.0 汞（以Hg计）的允许量，mg/kg 0.1 镉（以Cd计）的允许量，mg/kg 0.5 杂菌率，%0.1 霉菌总数的允许量，cfu/（g或mL）2
10、.0104 大肠菌群的允许量，cfu/（100 g或100 mL）400 沙门氏菌 不得检出 志贺氏菌 不得检出 金黄色葡萄球菌 不得检出 5.5 净含量允差 净含量允差应符合原国家质量监督检验检疫总局第75号令。6 试验方法 6.1 抽样 按GB/T 14699.1的规定，进行样品的采集。采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品，样品采集后应立即进行检测。6.2 感官检验 取适量样品（固态250 g，液态250 mL）于无色玻璃杯中进行感官检验，观察、嗅闻或触摸。6.3 水分测定
11、 按GB/T 6435规定执行。6.4 粒度检测（固态菌剂）按GB/T 5917.1规定执行。6.5 地衣芽孢杆菌检测 6.5.1 菌体形态检验：6.5.1.1 染色：革兰氏染色和芽孢染色。6.5.1.2 形态检验：用营养琼脂，在 30 条件下，培养 48 h 后，在无菌环境下，取菌体涂片染色，用光学显微镜观察菌体形态。6.5.2 菌落特性检验：在LB营养琼脂、营养琼脂、桑塔斯琼脂和牛肉浸汁琼脂平板上，30 培养48 h后，观察菌落颜色、形态和色素等。T/ZZB 12062019 5 6.5.3 生理生化特征检验：参照Bergeys Mannual of Systematic Bacterio
12、logyVol.II和常见细菌系统鉴定手册的有关内容进行。6.5.4 活菌计数 6.5.4.1 采用稀释倒平板法。按 10 倍稀释法制成不同浓度稀释液，从稀释液中分别吸取一定体积置于无菌培养皿中，每一稀释度做 3 次重复。将事先融化并冷却至 50 左右的营养琼脂培养基，向每个培养皿中倒入约 12 mL，摇匀，凝固后倒置培养 24 h，进行菌落计数。6.5.4.2 对培养后的每个稀释度取 5 个10 个菌落的菌体，涂片染色，进行显微镜识别。6.5.4.3 选择适宜的稀释度，菌落在 30 个300 个之间的平板进行计数。6.5.4.4 计算公式见（1）、（2）：()()()mL1mLgmLmLcf
13、u/g接种量数数或菌剂母液菌悬液体积稀释倍数菌落平均数、地衣芽孢杆菌=.（1）()100%+=杂菌数目标活菌数杂菌数杂菌率.（2）6.6 卫生检验 6.6.1 黄曲霉素 B1检验 按GB/T 17480规定执行。6.6.2 砷含量测定 按GB/T 13079规定执行。6.6.3 铅含量测定 按GB/T 13080规定执行。6.6.4 汞含量测定 按GB/T 13081规定执行。6.6.5 镉含量测定 按GB/T 13082规定执行。6.6.6 霉菌检测 按GB/T 13092规定执行。6.6.7 大肠菌群检测 按GB/T 18869规定执行。6.6.8 沙门氏菌检测 按GB/T 13091规定
14、执行。6.6.9 志贺氏菌检测 T/ZZB 12062019 6 按GB 4789.5规定执行。6.6.10 金黄色葡萄球菌检测 按GB 4789.10规定执行。6.7 净含量允差 按原国家质量监督检验检疫总局第75号令执行。7 检验规则 7.1 检验分类 7.1.1 检验类型 分为出厂检验和型式检验。7.1.2 出厂检验 出厂检验项目见表4。表4 检验项目 序号 检验项目 检验类型 技术要求 试验方法 出厂检验 型式检验 1 微生物指标-5.1 6.5.1、6.5.2、6.5.3 2 感官指标 5.2 6.2 3 水分 5.3 6.3 4 粒度 5.3 6.4 5 地衣芽孢杆菌活菌数 5.3
15、 6.5.4 6 杂菌率 5.4 6.5.4 7 黄曲霉素B1-5.4 6.6.1 8 砷（As）5.4 6.6.2 9 铅（以Pb计）5.4 6.6.3 10 汞（Hg）5.4 6.6.4 11 镉（Cd）5.4 6.6.5 12 霉菌总数 5.4 6.6.6 13 大肠菌群 5.4 6.6.7 14 沙门氏菌-5.4 6.6.8 15 志贺氏菌-5.4 6.6.9 16 金黄色葡萄球菌-5.4 6.6.10 17 净含量允差 5.5 6.7 注：大肠菌群、铅和砷每2个月进行定期检验。7.1.3 型式检验 T/ZZB 12062019 7 一般情况下，企业半年进行一次型式检验，型式检验项目见
16、表4。但有下列情况之一时，应进行型式检验，且生产用地衣芽孢杆菌菌种需送至有资质机构进行菌种鉴定：a)当产品的原料、工艺设备有大的改变，可能影响产品质量时；b)产品停产 3 个月以上，恢复生产时；c)出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时；d)当用户对产品质量有较大异议时；e)当国家产品质量监督管理机构提出要求时。7.2 组批与抽样 7.2.1 组批：在同一混合机同时混合的，或同一罐由同一喷雾干燥塔喷雾出来的，包装完好的产品确定为一个批次。7.2.2 抽样按 GB/T 14699.1 规定进行。7.3 判定规则 7.3.1 检验结果有一项指标不符合本标准时，应重新加倍抽样，进行复检。复检结果有一项指标不符合标准，则判定整批产品为不合格产品。7.3.2 如有致病菌检出，不得复检，直接判定该批产品为不合格产品。8 标签、包装、运输和贮存 8.1 标签 8.1.1 采用鲜明的标签贴于外包装。8.1.2 标签内容应按 GB 10648 规定执行。8.2 包装 8.2.1 包装图示标志应符合 GB/T 191 的规定，包装完整，标签等资料齐全。8.2.2 包装材料应采用符合国家相关标准的、无毒包装
