1、书 书 书食 品 补 充 检 验 方 法犅 犑 犛 食品中爱德万甜的测定 发布国家市场监督管理总局发 布书 书 书食品中爱德万甜的测定范围本方法规定了食品中爱德万甜的测定方法。本方法第一法为高效液相色谱串联质谱法，适用于饮料、酒类、焙烤食品、可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果、发酵乳和风味发酵乳、果冻、冷冻饮品、蛋制品、复合调味料中爱德万甜的测定。本方法第二法为高效液相色谱荧光检测法，适用于加工水果（水果干类、水果罐头、果酱、果泥、蜜饯凉果等）中爱德万甜的测定。第一法高效液相色谱串联质谱法 原理试样中的爱德万甜用乙腈溶液提取，经离心取上清液加入 粉末净化后，用反相液相色谱分离、串联质谱正离子
2、模式检测，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水为符合 规定的一级水。试剂 甲醇（）。乙腈（）。正己烷（）。甲酸（）。氯化钠（）：分析纯。试剂配制 饱和氯化钠水溶液（常温 ）：称取过量（）氯化钠（）加入 水溶解，溶液底部应有过量的氯化钠固体。乙腈溶液（含氯化钠水溶液）：量取 乙腈（）和 饱和氯化钠水溶液（），混匀后静置，收集上层乙腈层备用。乙腈溶液（含正己烷）：量取 乙腈（）和 正己烷（），混匀后静置，收集下层乙腈层备用。标准品爱德万甜标准物质（，号 ，相对分子质量 ）：经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。（相关信息见附录）标准溶液配制 爱德万甜标准储备液：称取爱德万甜
3、标准物质（精确至 ），于 容量瓶，用犅 犑 犛 甲醇（）溶解并稀释至刻度。下避光保存，保存期为个月。标准中间溶液：吸取上述标准储备液（）于 容量瓶中，用甲醇（）稀释到刻度配制成质量浓度为 的标准中间溶液，下避光保存，保存期为个月。材料 微孔滤膜：，有机相。吸附剂：粒径 。仪器和设备 高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（）。电子天平：感量分别为 和 。涡漩混合器。超声波清洗器。恒温水浴振荡器。离心机：转速不低于 。匀浆机。高速粉碎机。分析步骤 试样制备与保存 果冻、巧克力和巧克力制品以及糖果、冷冻饮品、焙烤食品、蛋制品、固体及半固体复合调味料经匀浆机或高速粉碎机捣碎后备用。除冷冻饮品（现用
4、现制）外将样品置于样品瓶中，密封，标识后下保存。碳酸饮料倒入洁净烧杯中，超声 去除溶解性二氧化碳后，存贮于样品瓶中，密封，标识后下保存。样品前处理 提取 冷冻饮品、复合调味料、蛋制品、酒类、果冻类食品称取样品（精确至 ），置于 聚丙烯离心管中，加入水，涡漩振荡，加入（）后，加入 乙腈溶液（），加入 甲酸（），涡漩提取 ，离心 ，上清液待净化。可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果（胶基糖果除外）、焙烤类食品称取样品（精确至 ），置于 聚丙烯离心管中，加入水，水浴振荡 后，涡漩振荡，加入（），加入 乙腈溶液（），加入 甲酸（），涡漩提取，离心，上清液待净化。胶基糖果类食品称取样品（精确至 ），置于
5、 聚丙烯离心管中，加入 正己烷，超声提取 ，加入乙腈溶液（），涡漩提取，离心，取下层乙腈溶液，滤膜犅 犑 犛 过滤，待测。风味发酵乳、饮料类食品称取样品（精确至 ），置于 聚丙烯离心管中，加入水，涡漩振荡，加入（）后，加入 乙腈溶液（），加入 甲酸（），涡漩提取，离心，上清液待净化。净化移取 、和 待净化液，转移至装有 吸附剂（）的离心管中，振摇，以 离心，取上层清液，滤膜过滤，待测。基质匹配标准溶液的制备 空白样品基质溶液：取经质谱确认不含爱德万甜的与被测样相同基质的样品，按照 样品前处理方法制备。基质匹配标准工作溶液：吸取适量的标准中间溶液（），用空白样品基质溶液（）配制成质量浓度为 、系
6、列标准工作溶液，或者根据仪器响应与实际情况配制适当浓度范围的标准曲线，临用时配制。仪器参考条件 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：）色谱柱：柱，或性能相当者；）流动相：相为水，相为乙腈（），梯度洗脱条件见表；）流速：；）柱温：；）进样量：。表梯度洗脱条件时间 质谱参考条件质谱参考条件如下：）离子源：电喷雾离子源（）；）扫描方式：正离子扫描；犅 犑 犛 ）检测方式：多反应离子监测（）；）脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；）喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；）质谱检测参数详见附录。空白试验除不加试样外，均按试样同法操作。测定 标准曲线在仪器参考条件（）下，将系列标准工
7、作溶液（）按浓度由低到高的顺序进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以基质匹配标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。定性确证试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在 之内。目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，样品中目标化合物的定量离子和定性离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许的相对偏差不超过表规定的范围。表定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度犽犽 犽 犽 犽 允许的相对偏差 定量测定试样中待测物的响应值应在标准曲线的线性范围内，若含量超出线性范围，应
8、使用空白基质提取液将试样稀释后上机测定。基质匹配标准工作溶液的高效液相色谱串联质谱色谱图见附录中图。结果计算试样中爱德万甜含量按式（）计算：犡犞犳犿（）式中：犡 试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（）；试样溶液中待测组分的质量浓度，单位为微克每升（）；犞 试样提取液体积，单位为毫升（）；犳 试样制备过程中的稀释倍数；犿 称样量，单位为克（）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数犅 犑 犛 字，计算结果应扣除空白值。方法灵敏度、准确度和精密度 灵敏度数据见表。表不同食品基质中爱德万甜测定的检出限和定量限食品类别称样量提取液体积进样量检出限（）定
9、量限（）复合调味料，冷冻饮品，可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果（胶基糖果除外），果冻，焙烤食品，酒类，蛋制品 胶基糖果 饮料，发酵乳和风味发酵乳 准确度本方法在 添加浓度范围内，回收率为 。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差不得超过算术平均值的。第二法高效液相色谱荧光检测法 原理试样中的爱德万甜用水溶液或乙腈水溶液提取，在离心、稀释、过滤后经反相液相色谱分离、荧光检测器检测，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和 中规定的一级水。试剂 甲醇（）：色谱纯。乙腈（）：色谱纯。氯化钠（）。试剂配制 饱和氯化钠水溶液（常温 ）：称取过量（）氯化钠（）加入 水
10、溶解，溶液底部应有过量的氯化钠固体。乙腈溶液（含氯化钠水溶液）：量取 乙腈（）加入到 饱和氯化钠水溶液（）中，混匀后静置，收集上层乙腈层备用。犅 犑 犛 乙腈溶液：量取 乙腈（）加入 水中，混匀备用。标准品爱德万甜标准物质（，号 ，相对分子质量 ）：经国家认证并授予标准物质证书的标准物质（相关信息见附录）。标准溶液配制 标准储备液（）：称取爱德万甜标准物质（精确至 ），于 容量瓶，用甲醇（）溶解并稀释至刻度。下避光保存，保存期为个月。标准中间溶液：分别吸取标准储备液（）于 容量瓶中，用甲醇（）稀释到刻度配制成质量浓度为 的标准中间溶液，下避光保存，保存期为个月。标准工作溶液：吸取适量的标准中间
11、溶液（），用 乙腈溶液（）配制成质量浓度为 、系列标准工作溶液，或者根据仪器响应与实际情况配制适当浓度范围的标准曲线，临用时配制。材料微孔滤膜：，有机相。仪器和设备 液相色谱仪：配有荧光检测器。天平：感量 和 。涡漩混合器。恒温水浴振荡器。离心机：转速不低于 。匀浆机。高速粉碎机。分析步骤 试样制备水果干类、水果罐头、蜜饯凉果等经匀浆机或高速粉碎机粉碎后备用。提取 水果罐头称取样品（精确至 ），置于 聚丙烯离心管中，加入 乙腈（），涡漩混匀，加入 水，涡漩振荡，离心 后，将上层清液转移至 容量瓶中，用水定容，滤膜过滤，待测。水果干类、蜜饯凉果中的果糕类称取样品（精确至 ），置于 聚丙烯离心管中
12、，加入 水，水浴加热 ，涡漩振荡，冷却至室温，离心 后，将上层清液转移到 容量瓶中，用水定容，滤膜过滤，待测。犅 犑 犛 果酱、果泥、除果糕类以外的蜜饯凉果称取样品（精确至 ），置于 聚丙烯离心管中，加入 水，其中除果糕类以外的蜜饯凉果需经 水浴加热 ，冷却后加入 （），加 乙腈溶液（），涡漩振荡，离心 后，取上层清液，滤膜过滤，待测。液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：）色谱柱：柱，或性能相当者；）流动相：相为水，相为乙腈，梯度洗脱条件见表；表梯度洗脱条件时间 ）流速：；）柱温：；）进样体积：；）检测波长：激发波长 ，发射波长 ；）液相色谱图：见附录中图。测定 标准曲线用系列标准工作溶液（
13、）分别按仪器参考条件（）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。试样溶液的测定将处理好的试液和标准溶液，分别按仪器参考条件进行测定。根据保留时间定性，外标峰面积法定量。以标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线得到试液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次。标准物质液相色谱图见图。结果计算试样中爱德万甜含量按式（）计算：犡犞 犿 （）犅 犑 犛 式中：犡 试样中待测组分的含量，单位为毫克每千克（）；由标准曲线得出的样液中爱德万甜的质量浓度，单位为毫克每升（）；犞 试样溶液定容体积或试样
14、提取液体积，单位为毫升（）；犿 试样称取的质量，单位为克（）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。方法灵敏度、准确度、精密度 灵敏度数据见表。表加工水果基质中爱德万甜测定的检出限和定量限食品类别称样量定容体积或提取液体积进样量检出限（）定量限（）加工水果水果罐头 果酱、果泥、水果干类以及蜜饯凉果 准确度本方法在 添加浓度范围内，回收率为 。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的。犅 犑 犛 附录犃（资料性）爱德万甜相关信息表爱德万甜名称、号、分子式、相对分子质量及结构式见表。表犃 爱德万甜名称、犆犃犛号、分子
15、式、相对分子质量及结构式项目内容中文名称爱德万甜英文名称犖犖（）犔 犔 化学命名犖犖（羟基 甲氧基苯基）丙基犔犪天冬氨酰犔苯丙氨酸 甲酯号 分子式 相对分子质量 结构式引用于国家卫生计生委食品安全标准与监测评估司 年第号公告关于爱德万甜等种食品添加剂新品种、环己基氨基磺酸钠（又名甜蜜素）等种食品添加剂扩大用量和使用范围的公告。犅 犑 犛 附录犅（资料性）参考质谱参数参考质谱参数如下：）离子源：电喷雾离子源；）扫描方式：正离子扫描（）；）检测方式：多反应监测（）；）离子化电压（）：；）雾化气压力（）：；）辅助气压力（）：；）气帘气压力（）：；）雾化温度（）：；）定性离子对、定量离子对及其他质谱参
16、数见表。表犅 爱德万甜的定性离子对、定量离子对和质谱分析参数分析物离子对（犿狕）去簇电压碰撞能量入口电压出口电压爱德万甜 定量离子对。定性离子对。参考定性离子对，如检测过程中定性离子对遇到干扰，可增加参考定性离子对，增加定性的准确性。附录所列参考质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。犅 犑 犛 附录犆（资料性）参考质谱谱图参考质谱谱图见图 图。图犆 爱德万甜定量离子对质量色谱图（犵犔）图犆 爱德万甜定性离子对质量色谱图（犵犔）犅 犑 犛 附录犇（资料性）参考液相色谱谱图参考液相色谱谱图见图。图犇 爱德万甜标准物质液相色谱图（犿犵犔）本方法负责起草单位：大连市食品检验检测院。本方法验证单位：沈阳海关技术中心、湖北省食品质量安全监督检验研究院、深圳海关食品检验检疫技术中心、南京海关动植物与食品检测中心、河北省药品医疗器械检验研究院、大连海洋大学、大连理工大学。本方法主要起草人：曲宝成、毛希琴、勇艳华、李海燕、姜俊、李鹏、刘怡君、刘畅、边海涛、赵洪霞、李莉。犅 犑 犛
