1、 ICS 65.020.20 B 23 DB51四川省地方标准DB51/T 8182008马铃薯脱毒种薯生产技术规程 Technical Procedures of Virus-free Seed Potato Production 2008-6-6 发布 2008-9-1 实施四川省质量技术监督局 发布 食品伙伴网http:/DB51/T 8182008 I 目 次 前言-1.范围-1 2.规范性引用文件-1 3.术语和定义-1 4.脱毒组培苗快繁-2 5.原原种生产-3 6.原种生产-4 7.脱毒种薯繁育体系（见附录 G）-4 附录 A MS 培养基贮备液的配制-5 附录 B（规范性附录）
2、酶联免疫吸附试验法-6 附录 C（规范性附录）往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法-8 附录 D 种薯切块操作程序-12 附录 E 主要病虫害防治-12 附录 F（规范性附录）马铃薯主要虫害症状与防治方法-13 附录 G 脱毒种薯繁育体系-15 食品伙伴网http:/DB51/T 8182008 II 前 言 本标准附录B、附录C、附录F为规范性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省农业技术推广总站、成都市农林科学院作物研究所负责起草。本标准主要起草人：陈涛、章锐、周孝强、梁南山、何卫等。食品伙伴网http:/DB51/T 8182008 1 马铃薯脱毒
3、种薯生产技术规程 1 范围 范围 本规程规定了马铃薯脱毒苗的培育、繁殖，各级脱毒种薯的生产、扩繁栽培和各级脱毒种薯的检验、收获、贮藏等技术操作规程。本规程适用于四川省马铃薯脱毒种薯生产。2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 3243-82 马铃薯种薯生产技术操作规程 GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程 GB 18133-2000
4、 马铃薯脱毒种薯 3 术语和定义 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 脱毒组培苗脱毒组培苗（Virus-free in-vitro plantlets）简称脱毒苗，是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯Y 病毒（PVY）、马铃薯 A 病毒（PVA）、马铃薯 X 病毒（PVX）、马铃薯 M 病毒（PVM）或马铃薯 S病毒（PVS）等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的再生试管苗，经过组织培养方法大量扩繁的且不带上述病毒和类病毒用于生产原原种的试管苗。3.2 试管薯试管薯(In-vitro micro tuber)脱毒苗经诱导培养，直接在试
5、管(或瓶)内结的小薯。3.3 扦插苗扦插苗(Trans-plants)脱毒苗切段在网室扦插成活或马铃薯试管薯直播于网室出苗后，剪取其主茎及侧枝顶端扦插成活的苗。3.4 脱毒种薯脱毒种薯(Virus-free seed potato)从繁殖脱毒苗开始，经逐代繁殖增加种薯数量的种薯生产体系生产出来的各级种薯。脱毒种薯分为原原种、原种、生产用种薯。3.4.1 原原种原原种(Pre-basic seed)（脱毒小薯）（脱毒小薯）利用组培苗或系选苗（clonal selection）在防虫网室和温室条件下生产出来的、不带马铃薯病毒、类病毒及其他马铃薯病虫害的、质量在 1 g10 g 之间的小薯。3.4.
6、2 原种原种(Basic seed)用原原种作种薯，在良好隔离条件下生产的符合质量标准的种薯。3.4.3 生产用种薯生产用种薯(Certified seed)用原种或其加代繁殖一代后作种薯，在隔离条件下生产出的符合一级种薯质量标准的种薯。3.5 病毒病株允许率病毒病株允许率(Maximum virus-infected plant percentage allowed)脱毒种薯繁殖田中病毒病株的允许百分率。3.6 细菌病株允许率细菌病株允许率(Maximum bacterial-infected plant percentage allowed)食品伙伴网http:/DB51/T 818200
7、8 2 脱毒种薯繁殖田中细菌病株的允许百分率。3.7 真菌病株及其它病株允许率 3.7 真菌病株及其它病株允许率(Maximum fungal or other pathogen infected plant percentage allowed)脱毒种薯繁殖田中真菌病株和其它病株的允许百分率 3.8 混杂植株允许率混杂植株允许率(Maximum off-type plant percentage allowed)脱毒种薯繁殖田中混杂的其它马铃薯品种植株的允许百分率。3.9 有缺陷薯有缺陷薯(Defect tuber)指畸形、次生、龟裂、虫害、冻伤、黑心和机械损伤的薯块。3.10 隔离栽培隔离
8、栽培(Isolated planting)指在与病虫害相对隔离条件下进行的栽培方式。3.11 扩繁栽培扩繁栽培(Multiplication planting)主要指 l g 以上脱毒原原种直接种入大田，采取调节播种期、喷药防虫、剔除病、杂株等综合保护措施，生产脱毒原种的种植方式。4 脱毒组培苗快繁 脱毒组培苗快繁 4.1 脱毒组培苗的培育脱毒组培苗的培育 4.1.1 选材：选材：应选用生产上主栽的、或具有某种特性(如抗马铃薯癌肿病)优良品种块茎的休眠芽或刚出土幼苗的茎尖、或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。4.1.2 培养基的制备：培养基的制备：在每 l000 mlMS 培养基(见附录 A)中
9、加 GA30.2 mg0.3 mg、6-BA0.1 mg0.2 mg、NAA0.01 mg0.05 mg、泛酸钙 1.5 mg2.5 mg，分装入管(或瓶)。4.1.3 灭菌：灭菌：在 0.15 Mpacm2压力下灭菌 15 min20 min，冷却备用。4.1.4 茎尖剥离接种：茎尖剥离接种：将入选材料放入纱布袋，用自来水冲洗 1 h 后，在无菌条件下，放入 70 75酒精中浸 2 s3 s，再用 0.1 升汞液消毒 3 min6 min(或用 3 次氯酸钠液加 24 滴吐温振荡消毒 15 min20 min)，取出用无菌水冲洗 35 次，用灭菌滤纸吸干材料表面水分，在体视解剖镜下用手术刀等
10、工具轻、准、快速地剥去幼叶，切取带 l2 个叶原基(0.1 mm0.4 mm 大小)的生长点，迅速接入装有茎尖分化培养基的试管或培养瓶中，每管（瓶）放 1 个生长点。注明品种，茎尖号，接种期。4.1.5 培养条件：培养条件：日温 25，夜温 15，光照时数 l 2 hd14 hd，光照强度 2 0003 000 1x 条件下培养。4.2 病毒检测病毒检测 本单位自检，然后送国家法定植检部门复检认定。用于检测的数量不低于总数的 10%。根据检测结果出具检验结果报告单，如果脱毒苗没有检出PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM 或 PVS 和 PSTVd 等病毒和类病毒，则应批准进行组培苗生产。不
11、合格的脱毒苗不得用于组培快繁。4.2.1 检测方法：检测方法：马铃薯 PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM 或 PVS 等病毒，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测（见附录 B），无阳性反应再用指示植物鉴定。纺锤块茎类病毒(PSTVd)用往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法（R-PAGE）检测（见附录 C），鉴定筛选出不带 PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和 PSTVd 的脱毒苗。4.2.2 脱毒苗复检：脱毒苗复检：继代扩繁中选留的脱毒苗，每年至少作一次病毒复检。4.3 脱毒苗组培快繁脱毒苗组培快繁 4.3.1 脱毒组培苗来源：脱毒组培苗来源：经 4.2.1 检测，脱除了所列病毒的组
12、培苗。4.3.2 培养基：培养基：用 MS 培养基。灭菌同 5.1.3。4.3.3 快繁：快繁：将脱毒苗剪切成 1 cm 左右，带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上，每瓶培养基接种 1015 个茎段，待茎段长成高 10 cm 左右小苗（培养 15 d30 d），进行切段转接，如此，反复继代培养繁殖。4.3.4 培养条件：培养条件：同 4.1.5 食品伙伴网http:/DB51/T 8182008 3 4.4 脱毒组培苗的保存脱毒组培苗的保存 4.4.1 培养基：培养基：Ms+B95 mg/l10 mg/l+甘露醇 40 mg/l+琼脂 7000 mg/l+40000 mg/l。pH5.8.每瓶装
13、培养基 45 ml70 ml，灭菌同 4.1.3。4.4.2 接种：接种：选继代培养中生长健壮的组培苗，进行切段，每瓶接种 10 个茎段。4.4.3 培养：培养：置弱光（1000 lx）和较低温度（5 10）下保存。36 个月转接一次。3 y4 y 更新一次用于快繁的脱毒组培苗。5 原原种生产 用脱毒组培苗或试管薯在60目以上网室内隔离栽培。5.1 隔离网室的建立隔离网室的建立 5.1.1 环境条件：环境条件：选择四周无高大建筑物，水源、电源、交通便利，通风透光的地方建网室。5.1.2 建设要求：建设要求：隔离网室用热镀锌钢管作支撑，高 3 m3.5 m，宽 6 m10 m。网室内地表及网室四
14、周 2 m 内，应建成水泥地面，网室周围 10 m 范围内不能有其它可能成为马铃薯病虫害侵染源或可能成为蚜虫寄主的植物。严防网室内地表积水和网室外水流入。用于隔离的的网纱孔径要达到 6080 目。5.2 扦 扦插插(或播种或播种)前准备前准备 5.2.1 炼苗：炼苗：将长到 78 片叶，苗龄 30 d 左右的组培苗拔去瓶塞，炼苗 2 d3 d。5.2.2 基质：基质：蛭石、草炭、珍珠岩或细砂均可作基质。生产原原种以蛭石、珍珠岩混合基质为好，混合比例 2：1，将混合基质装入规格适宜的育苗盘，基质装填前应充分吸水。每茬薯收后基质必须严格蒸煮消毒，一般反复使用 3 y4 y。5.2.3 消毒：消毒：
15、工作人员进出棚必须更换鞋和工作服，并用肥皂洗净手。扦插（或播种）工具每次使用前均应蒸煮消毒，不能蒸煮的用肥皂水认真清洗后用 75 酒精浸泡消毒。5.2.4 切段：切段：将经炼苗的脱毒试管苗用镊子轻轻取出，用剪刀剪为 3 cm4 cm 长的茎段，供扦插用。5.2.5 剪尖：剪尖：扦插的脱毒苗高 5 cm7 cm、直播薯苗高 8 cm10 cm，侧枝长 5 cm6 cm 时，剪取 3 cm4 cm 长的主茎顶端或侧枝尖端（每株只剪 34 次），供扦插用。5.3 切段和扦插苗处理切段和扦插苗处理 将切段和扦插苗放入20 ppmNAA+1 克露+1 威力特的混合液中浸泡10 min15 min后取出备
16、插。5.4 试管薯播种与剪尖苗扦插试管薯播种与剪尖苗扦插 5.4.1 选薯：选薯：生产原原种用的试管薯，必须是通过休眠、萌芽整齐的薯。5.4.2 密度：密度：生产原原种的组培苗切段扦插株行距为 2.5 cm2.5 cm；扦插苗为 3.33.3 cm。5.4.3 放盘：放盘：将插、播好的育苗盘规范整齐放置于网室，分厢放置，每厢 2430 盘，每厢间隔 80 cm。5.5 管 管理理 5.5.1 拱棚盖膜：拱棚盖膜：脱毒苗（或薯）插（播）好后，轻细均匀喷水，使基质充分饱和吸水，及时拱棚盖膜，小拱棚内相对湿度保持在 90 95。5.5.2 施肥：施肥：从小苗生根成活（插后 7 d d）及时撤拱棚到收薯前 10 d，根据苗情喷施 0.2 0.3 N:P:K2:1:3 的营养液 46 次，每厢（3.5 m2）喷 7500 ml（出拱棚后喷第一次肥浓度应减半，每 7 d10 d 喷一次）。5.5.3 浇水：勤浇、细浇、少浇，保持基质湿润，持水量 50 60，收前 7 d10 d 停止浇水。5.5.4 病虫害防治：病虫害防治：防治对象、时期、方法按附录 D 执行。发现病株连同薯块拔除，带出网室外销毁
