1、ICS 11.220B 41备案号：60763-2019DB54西藏自治区地方标准DB 54/T 01592018牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法2018-07-20 发布2018-08-19 实施西藏自治区市场监督管理局发 布DB54/T 01592018I目次前言.II1范围.12术语和定义.13牛羊东毕吸虫病的诊断.14诊断结果.2附录 A（规范性附录）实验用品与试剂.3附录 B（规范性附录）样本采集、保存、送检.4DB54/T 01592018II前言本标准按照GB/T1.1的规则起草。本标准由西藏自治区农牧业标准化技术委员会提出并归口。本标准由西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，中国农业
2、科学院上海兽医研究所负责起草。本标准主要起草人：刘建枝、刘金明、石斌、李浩、夏晨阳、陆珂、唐文强、朱传刚、单曲拉姆。本标准为首次制定。DB54/T 015920181牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法1范围本标准规定了牛羊东毕吸虫病及其流行区的定义、临床诊断、实验室诊断及结果判定等技术。本标准适用于西藏自治区境内牛羊东毕吸虫病的诊断、防治效果考核、检疫和流行病学调查。2术语和定义下列术语及定义适用于本标准。2.1牛羊东毕吸虫病由扁形动物门、吸虫纲、枭形目、分体科、东毕属的各种吸虫寄生于牛、羊肠系膜静脉和门静脉系统所引起的疾病。2.2东毕吸虫病流行区存在东毕吸虫的中间宿主，有牛和羊感染的地区。3牛羊东
3、毕吸虫病的诊断3.1临床诊断牛、羊等家畜感染东毕吸虫后，临床症状因家畜品种及其年龄和感染强度而异。本病一般为慢性经过的消耗性疾病，个别情况下出现急性病例。急性病例主要为幼龄牛羊或从外地新引进的牛羊在突然感染大量尾蚴后发生。其症状为发热、食欲减退、呼吸促迫、下痢、消瘦等，可造成大批死亡。慢性病例指感染剂量较低的吸虫后无典型病症或症状较轻者，或急性病例耐过后的慢性感染者。慢性病例的症状为消瘦、可视粘膜苍白，略有黄染，被毛杂乱，下颌及腹部多有不同程度水肿，腹围增大，消化不良，多有稀便或下痢；重度感染者食欲停止、久卧不起、呼吸缓慢，最后衰竭而死亡；幼畜发育停滞，母畜不发情，不孕或流产。来源于东毕吸虫流
4、行区的家畜，有以上症状者，列为疑似病例，但确诊需进行实验室诊断。3.2实验室诊断3.2.1实验步骤3.2.1.1取样每头（只）家畜的粪样分别进行1次独立的孵化试验。将采集的粪样分成2份，每份粪量为牛粪50g，羊粪10g。DB54/T 0159201823.2.1.2羊粪加样取羊粪10g加入长颈平底烧瓶并编号,往长颈平底烧瓶内加入25水至瓶口下4cm5cm处。3.2.1.3牛粪加样将50克牛粪放入铜筛中，铜筛置塑料量筒上部，加水淹没粪样，用竹筷搅拌至稀浆状，捞出铜筛，沥干后再次浸入，搅拌，如此3次。再将塑料量筒中的粪样静置沉淀15min20min（室温超过20时静置时间不超过10min），弃上层
5、清液，将沉淀物倒入长颈平底烧瓶，加水至瓶口下4cm5cm。3.2.1.4毛蚴孵化用玻璃棒将折叠好的1cm1.5cm厚的松软脱脂棉推入长颈平底烧瓶,使脱脂棉刚好浸入液面,补加水至液面高出脱脂棉2cm3cm。往长颈平底烧瓶颈部加脱脂棉时不能有气泡，产生气泡时，用挑虫针轻轻地挑动脱脂棉使气泡溢出。将装好粪样的长颈平底烧瓶放置于2030环境中，在光照（日光或灯光）条件下进行孵育，避免阳光直射。如室温低于20，可将长颈平底烧瓶放入25温箱（内加入日光灯）或水浴锅中进行孵化。3.2.2毛蚴观察孵化3h，将长颈平底烧瓶向着光源（或在光线充足的地方），并以黑色遮光板为背景，肉眼或用放大镜观察瓶颈部脱脂棉以上清
6、水部位。每个样品每次观察应在2min以上，孵化后5小时再观察一次。3.3结果判定3.3.1东毕吸虫毛蚴形态及运动特征毛蚴眼观为针尖大小、灰白色、梭形，折光性强，在脱脂棉上层清液中作水平或斜向直线运动。3.3.2阴性、阳性判定发现毛蚴，则判定为阳性；阴性样本复查1次，如未发现毛蚴，则判定为阴性。4诊断结果4.1疑似有流行病学接触史的动物，出现本病临床症状。4.2确诊粪便孵化发现毛蚴。DB54/T 015920183AA附录A（规范性附录）实验用品与试剂A.1实验用品A.1.1孵育室（箱）室温低于20时，采用温箱或在房间内开启取暖设备，以维持2025的环境条件，也可以用水浴锅维持孵化温度为25。孵
7、育室（箱）需满足日光或灯光的光照条件。500mL烧杯或塑料量杯、长颈平底球瓶(500ml)、40目80目的铜筛滤杯、温度计、水浴锅、玻璃棒、挑虫针、洗瓶、棉花、镊子、遮光板(黑色)、记号笔、竹筷、粪桶、放大镜、显微镜、吸管、载玻片、盖玻片、取暖炉、盆、水缸、水桶、闹钟。A.2试剂A.2.1水蒸馏水或桶（瓶）装饮用水，也可用自来水、河水、池水、井水等。处理方法如下：自来水，在容器中存放12h以上或阳光下暴晒8小时以上；河水、池水、井水等，加温至60，冷却；混浊的水，每50L水加明矾3g5g，充分搅拌，澄清。用NaOH或HCL调节pH值至6.87.2。自来水在盛器中存放去氯过程中需敞口，不能盖盖子。DB54/T 015920184BB附录B（规范性附录）样本采集、保存、送检B.1样本采集直肠采集新鲜粪样，采粪量：牛100g，羊20g25g。每采集一头（只）家畜更换手套一次，粪样采集时间为每年的9月底12月初。B.2样本保存采集的粪样保存于无毒、无污染的自封袋内，标记采集地点、畜种、性别、年龄、采粪日期，4保存。B.3样本送检4条件下保存送检，7天内完成检查。_
