1、ICS 65.120 B 46 DB41 河南省地方标准 DB41/T 19022019 饲料添加剂 凝结芽孢杆菌 2019-09-30 发布 2019-12-30 实施 河南省市场监督管理局 发 布 河南省地方标准公共服务平台河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 要求.1 4 试验方法.2 5 检验规则.3 6 标签、包装、运输与贮存.4 7 保质期.4 附录 A（规范性附录）凝结芽孢杆菌的测定.5 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给
2、出的规则起草。本标准由河南省农业农村厅提出并归口。本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所、河南省乘风动物保健技术研究所、洛阳希望生物科技有限公司、河南智盛优品生物科技有限公司。本标准主要起草人：郭芙蓉、杨灵杰、谢二伟、段伟凯、田艳飞、吴贺伟、王伟伟、杨顺强。河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 1 饲料添加剂 凝结芽孢杆菌 1 范围 本标准规定了饲料添加剂 凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）的技术要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输与贮存。本标准适用于以凝结芽孢杆菌为菌种，经液态发酵、过滤、浓缩、干燥制成的饲料添加剂 凝结芽孢杆菌。2 规范性引用文件
3、下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4789.3 食品微生物学检验 大肠菌群计数 GB 4789.5 食品微生物学检验 志贺氏菌检验 GB 4789.10 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB 10648 饲料标签 GB/T 13079 饲料中总砷的测定 GB/T 13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T 13081 饲料中汞的测定 GB/T 13082 饲料
4、中镉的测定方法 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检验方法 GB/T 13092 饲料中霉菌总数的测定 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 17480 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 GB/T 18823 饲料检测结果判定的允许误差 NY/T 1444 微生物饲料添加剂技术通则 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 定量包装商品计量监督管理办法中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局令（2005）第75号 饲料原料目录中华人民共和国农业部公告第1773号 饲料添加剂品种目录（2013）中华人民共和国农业部公告第2045号 3 技术要求 3.1 原料 应符合饲料添
5、加剂品种目录（2013）和饲料原料目录的规定。河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 2 3.2 感官 粉状或颗粒状，色泽一致，无霉变和结块，有特殊的发酵气味。3.3 成品粒度 全部通过2.00 mm编织筛，1.50mm分析筛筛上物不大于10%。3.4 水分 水分应不大于12.0%。3.5 理化指标 理化指标应符合表1的规定。表1 理化指标 项目 指标 凝结芽孢杆菌活菌数/CFU/g 1.00109 砷（以总砷计）的允许量/mg/kg 2 铅（以 Pb 计）的允许量/mg/kg 20 汞（以 Hg 计）的允许量/mg/kg 0.1 镉（以 Cd 计）的允许量/mg/kg 1
6、大肠菌群的允许量/个/kg 1105 霉菌总数的允许量/个/kg 2107 黄曲霉毒素 B1/g/kg 30 沙门氏菌的允许量/（25g 中）不得检出 志贺氏菌 不得检出 金黄色葡萄球菌 不得检出 4 试验方法 4.1 感官 取适量样品，在非阳光直射条件下，观其色泽、形态，嗅其气味。4.2 成品粒度 按GB/T 5917.1的规定执行。4.3 水分 按GB/T 6435的规定执行。4.4 凝结芽孢杆菌活菌数 按附录A的规定执行。4.5 砷 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 3 按GB/T 13079的规定执行。4.6 铅 按GB/T 13080的规定执行。4.7 汞 按
7、GB/T 13081的规定执行。4.8 镉 按GB/T 13082的规定执行。4.9 大肠菌群 按GB 4789.3的规定执行。4.10 霉菌总数 按GB/T 13092的规定执行。4.11 黄曲霉毒素 B1 按GB/T 17480的规定执行。4.12 沙门氏菌 按GB/T 13091的规定执行。4.13 志贺氏菌 按GB 4789.5的规定执行。4.14 金黄色葡萄球菌 按GB 4789.10的规定执行。5 检验规则 5.1 检验批次 同一配方、同一发酵周期生产的产品为一个检验批次。5.2 采样 按GB/T 14699.1的规定执行。5.3 试样制备 按GB/T 20195的规定执行。5.4
8、 出厂检验 5.4.1 检验项目 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 4 感官、成品粒度、水分、凝结芽孢杆菌活菌数。5.4.2 判定规则 以本标准的有关试验方法要求为依据，对抽取样品按出厂检验项目进行检验，检验结果中如有一项指标不符合标准要求时，应重新加倍抽样进行复检，复检结果如仍有一项指标不符合本标准要求，则该批产品不合格。各项成分指标判定合格或验收的界限按GB/T 18823规定执行，微生物指标凝结芽孢杆菌不低于5%。5.5 型式检验 5.5.1 检验条件 有下列情况之一，应进行型式检验：a)改变生产工艺；b)正常生产每年至少进行一次；c)停产半年后再恢复生产时。5.
9、5.2 检验项目 第3章规定的全部内容 5.5.3 判定规则 以本标准的有关试验方法和要求为依据。检验结果中如有一项指标不符合标准要求时，应重新加倍抽样进行复检，复检结果如仍有一项指标不符合本标准要求，则该周期产品不合格。各项成分指标判定合格或验收的界限依据GB/T 18823执行。微生物指标不得复检。如型式检验不合格，应停止生产至查明原因。6 标签、包装、运输与贮存 6.1 标签 按GB 10648的规定执行。6.2 包装 包装材料应符合国家有关安全卫生要求。净含量的允许短缺量应符合 定量包装商品计量监督管理办法的规定。6.3 运输与贮存 运输途中应有遮盖物，并防止雨淋。不应与有毒、有害、有
10、辐射等物品混装、混运。应贮存在通风、干燥、阴凉、无污染的库房内，避免阳光直晒。7 保质期 在6.2、6.3规定的包装贮存条件下，自生产之日起，原包装产品的保质期12个月。河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 5 A 附 录 A（规范性附录）凝结芽孢杆菌的测定 A.1 原理 每个活菌在适宜的培养基和良好的生长条件下，经过合适的培养时间可繁殖成一个肉眼可见的菌落，通过对菌落数量的统计，便可计算出相应的单位或活菌数。A.2 菌种鉴别 A.2.1 菌落特征 凝结芽孢杆菌在MRS培养基（A.3.1）上菌落生长形态特征见表2。表2 凝结芽孢杆菌在 MRS 培养基上的菌落特征 菌种类型
11、菌落特征 芽孢杆菌 单菌落成圆形，不透明，凸起边缘整齐，少数呈短链。A.2.2 培养特征 单菌落成圆形，不透明，凸起边缘整齐，少数呈短链。革兰氏染色成阳性，细胞呈杆状且可形成端生椭圆形芽孢，芽孢囊不明显膨大。A.2.3 生理生化特征 对凝结芽孢杆菌进行接触酶检测，厌氧生长检测，50 生长检测和7%氯化钠生长检测，再进行验证检测，包括糖、醇发酵、运动性检测、淀粉水解实验和酪素水解生长温度检测。凝结芽孢杆菌的生理生化特征见表3。表3 凝结芽孢杆菌生理生化特征 项目 凝结芽孢杆菌 革兰氏染色 7%氯化钠生长 运动性 接触酶 50 生长 木糖产酸 淀粉水解 厌氧生长 葡萄糖产酸 酪素水解 注：阳性反应
12、；：阴性反应 河南省地方标准公共服务平台DB41/T 19022019 6 A.3 凝结芽孢杆菌活菌数培养与计数 A.3.1 MRS培养基的配制 分别称取蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母浸粉5.0 g、葡萄糖20.0 g、醋酸钠5.0 g、磷酸氢二钾2.0 g、硫酸镁0.5 g、硫酸锰0.2 g、柠檬酸三铵2.0 g、TW-80 1.0 mL、琼脂15 g加入1000ml蒸馏水中，加热至溶解，pH6.60.2，分装，121 高压灭菌15 min备用。A.3.2 样品制备与稀释 以无菌操作称取被检样品25 g，加入装有225 mL无菌生理盐水的三角瓶中（瓶内先放置约二十粒玻璃珠），充
13、分振动30 min。制成1:10（即10-1）的均匀稀释液。用1 mL吸管吸取10-1稀释液1 mL，慢慢注入含有9 mL无菌生理盐水的小三角瓶或试管，并振动三角瓶或试管，制成10-2的均匀稀释液。上述操作继续稀释，每次10倍，分别制成10-3，10-410-n的均匀稀释液。A.3.3 培养 倾注法：先对被检样品所含菌体数进行估计，选择三个稀释度，每个稀释度分别取1 mL，注入三个平皿中。每个平皿1 mL，每个稀释度做三个平皿。及时将保温至45 50 的培养基倒入平皿（每个平皿约15 mL），并轻轻摇动平皿使培养基和菌液混合均匀，待琼脂凝固后，将平皿倒置于37 培养箱24 h，即可计算平皿内菌
14、落总数。涂布法：先对被检样品所含菌体数进行估计，选择三个稀释度，预先准备好可用的 MRS 培养基平板9 块，吸取三个梯度稀释液各 100 L 至平板中涂布均匀，每个梯度 3 块平板，倒置平板于 37培养箱培养 2436h，即可计算平皿内的菌落总数。A.3.4 菌落计数 以平板上出现30个300个菌落数的稀释度平板为计数标准。当只有一个稀释度，其平均菌落数在30300时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。若有连个稀释度，其平均菌落数在30300时，应按两者菌落总数比值来定。若其比例小于2,应计数两者的平均数，若大于2则计数其中稀释度较小的菌落总数。若三个稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。若三个稀释度的平均菌落数均小于300，则应按稀释度最低的菌落平均数乘以稀释倍数。若三个稀释度的平均菌落数均不在30300，则应以最接近的平均菌落数乘稀释倍数。A.3.5 计算公式 统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数。目标菌落数按照下列公式计算：样品的活菌数（CFU/g）菌落平均数稀释倍数。_ 河南省地方标准公共服务平台
