1、ICS 67.100X 16河北省地D B 1 3方标准DB13/T 1107-2009乳 及 乳 制 品 中 4种 a一 内 酞 胺 类 药 物 残 留 量 的测定方法液相色谱一串联质谱法 Determination of four kinds of阝 一 lactams residues in milk and milk products LC-MS/MS method2009-05-27发布2009-06-11实施河北省质量技术监督局发布食品伙伴网http:/DB13/T 1107-2009月 I j 吕 本 标 准 中 的 附 录 A、附 录 B 为 资 料 性 附 录。本 标 准 由
2、 河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位：河 北 省 食 品 安 全 重 点 实 验 室、河 北 省 食 品 质 量 监 督 检 验 研 究 院、河 北 医 科 大 学 基础 医 学 院、河 北 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院、河 北 省 化 学 工 业 研 究 院。本 标 准 主 要 起 草 人：张 岩、李 挥、张 敬 轩、吕 品、刘 辰 魁、王 丽 霞、李 丛 芬、范 斌、康 素 芬、苏 红维、刘 敬 泽、杨 小 龙。食品伙伴网http:/DB 13/T 1107-2009乳 及 乳 制 品 中 4种 p一 内 酰 胺 类 药 物 残
3、 留 量 的 测 定 方 法 液相色谱一串联质谱法范 围 本标 准 规 定了 乳 及 乳制 品 中 青霉 素 G.青霉 素V、氨 苄 西林、阿莫 西 林4种0一内 酞 胺类药 物残留量 的 液 相 色 谱 一 串 联 质 谱 测 定 方 法。本 标 准 适 用 于 生 鲜 乳、巴 士 杀 菌（灭 菌）乳 和 乳 粉 中 青 霉 素 G、青 霉 素 V.氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 残留 量 的 测 定。本 标 准 的 方 法 检 出 限：青 霉 素 G、青 霉 素 V 为 1.0 g/kg;氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 为 2.0 g/kg.2规范性引用文件 一 F列 文 件 中 的 条
4、款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，其 随 后 所 有 的修 改 单（不 包 括 勘 误 的 内 容）或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准，然 而，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法原理 试 样 中 的 4种 p一 内 酰 胺 类 药 物 残 留，用 Oasis HLB或 相 当 的 固 相 萃 取
5、 柱 净 化，液 相 色 谱 一 串 联 质 谱仪 测 定，外 标 法 定 量。4试剂和材料 除 另 有 说 明 外，所 用 试 剂 均 为 优 级 纯，水 为 G B/T 6682规 定 的 一 级 水。4.，甲 醇：色 谱 纯。4.2乙 睛：色 谱 纯。4.3乙 酸：优 级 纯。4.4乙睛十水（1+3)：量取25 m L乙睛与75 m L水混合。4.5 Oasis HLB固 相 萃 取 柱 或 相 当 者：500 mg,6 mL。使 用 前 分 别 用 5 mL甲 醇 和 10 mL水 预 处 理，保 持 柱 体 湿 润。4.6青霉素G、青霉素V,氨苄西林、阿莫西林：纯度）99%04.7
6、青 霉 素 G、青 霉 素 V,氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 标 准 储 备 溶 液：准 确 称 取 适 量 的 每 种 标 准 物 质，分 别用 乙 腈 配 制 成 浓 度 为 1.0 mg/mL的 标 准 储 备 溶 液。储 备 液 贮 存 在 一 18 冰 柜 中。4.8青 霉 素 G.青 霉 素 V,氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 标 准 E 作 溶 液：根 据 需 要 吸 取 适 量 青 霉 素 G.青 霉 素V.氨 节 西 林、阿 莫 西 林 标 准 储 备 溶 液，用 空 白 样 品 稀 释 成 适 当 浓 度 的 基 质 混 合 标 准 工 作 溶 液。仪 器液 相 色 谱
7、一 串 联 四 极 杆 质 谱 仪：配 有 电 喷 雾 离 子 源(ESI)0分 析 天 平：感 量 0.1 m g和 0.01 g0漩 涡 混 匀 器。固 相 萃 取 真 空 装 置。贮 液 器：50 m L 0微 量 进 样 器：25L,100L 0刻 度 样 品 管：5 m L，精 度 为 0.1 m Lo9QU丬兮只人匕，产只民刂一匀只二刂户010食品伙伴网http:/DB13/T 1107-20095.8真空泵：真空度应达到80 kPa5.9 pH 计：测 量 精 度 度 0.02.5.10氮吹仪。6测定步骤6.1试样溶液的制备 称 取 5g试 样（精 确 到 0.01 g）置 于
8、150 m L 二 角 瓶 中，加 人 45 m L 去 离 子 水，于 漩 涡 混 匀 器 上快 速 混 合 1 m in。样 液 移 至 下 接 O asis H LB柱 的 贮 液 器 中，以 小 于 或 等 于 3 m L/m in的 流 速 通 过 固 相 萃 取柱 后，用5 m L水洗柱，弃去全 部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽干20 m in，最 后用3 m L甲醇洗 脱，收 集 洗 脱 液 于 刻 度 样 品 管 中，于 40 水 浴 中 用 氮 吹 仪 吹 干，用 乙 睛 定 容 至 1 m L，摇 匀 后，供 液相 色 谱 一 串 联 质 谱 仪 测 定。6.2测定
9、6.2.1液相色谱条件 色 谱 柱：SunFireTM C 18 3.5林 m,150 mm X 2.1 mm或 相 当 者。流动相及流速见表10 柱温:30 C o 进 样 量：20 L0表1液相色谱梯度洗脱条件时 间 m in流 速 （协 L/min)水（含 0.4 乙 酸）（）乙 睛 （）0.0020060.040.015.0020035.065.015.0120060.040.025.0120060.040.06.2.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源(ESI)o 扫 描 方 式：正 离 子 扫 描。检 测 方 式：多 反 应 监 测。电喷雾电压：5 500 V 雾化气压力：0.055
10、M Pao 气帘 气压力：0.079 M Pao 辅助气 流速：6 L/m ind 离子源温度：400 C 定 性 离 子 对、定 量 离 子 对 和 去 簇 电 压（D P),聚 焦 电 压（FP)、碰 撞 能 量（CE）及 碰 撞 室 出 口 电 压(CXP)，见表206.2.3液 相 色 谱 一 串 联 质 谱 测 定6.2.3.1定性测定 在 相 同 试 验 条 件 下，样 品 中 待 测 物 质 与 基 质 标 准 溶 液 中 对 应 物 质 的 保 留 时 间 偏 差 在 士 2.5 之 内；样 品 色 谱 图 中 各 定 性 离 子 对 相 对 丰 度 与 浓 度 接 近 的 基
11、 质 标 准 溶 液 的 色 谱 图 中 离 子 相 对 丰 度 相 比，若 偏 差不 超 过 表 3规 定 的 范 围，则 可 判 定 为 样 品 中 存 在 该 残 留。6.2.3.2定量测定 在 仪 器 最 佳 工 作 条 件 下，用 青 霉 素 G、青 霉 素 V,氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 标 准 储 备 溶 液 配 成 的 基 质 混合 标 准 溶 液 分 别 进 样，以 标 准 工 作 溶 液 浓 度 为 横 坐 标，以 峰 面 积 为 纵 坐 标，绘 制 标 准 工 作 曲 线。用 标 准食品伙伴网http:/ DB13/T 1107-2009工 作 曲 线 对 样 品 进
12、 行 定 量，样 品 溶 液 中 青 霉 素 G、青 霉 素 V,氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 的 响 应 值 均 应 在 仪 器测 定 的 线 性 范 围 内。在 上述 色 谱条件 下，青 霉素 G、青 霉 素V,氨 苄西 林、阿 莫西 林的总 离子 流图参 见附 录A.青霉素G、青 霉 素 V,氨 苄 西 林、阿 莫 西 林 的 保 留 时 间 见 附 录 B.表 2四 种 0一 内 酞 胺 类 药 物 的 定 性 离 子 对、定 量 离 子 对、去 簇 电 压、聚 焦 电 压、碰撞能量和碰撞室出口电压名 称定 性 离 子 对 (m/z)定 量 离 子 对 (m/z)碰 撞 能 量 V去
13、 簇 电 压 V聚 焦 电 压 V碰 撞 室 出 口 电 压/V青 霉 素 G335/160335/17635/16020234520011青 霉 素 V351/160351/192351/16020154020011氨 苄 西 林350八92350/160350/16023202020011阿 莫 西 林366/114366/208366/20830192120011表 3定 性 确 证 时 相 对 离 子 丰 度的 最 大 允 许 偏差相 对 离 子 丰 度 5 0 2 0-5 0 10-20 1 0允 许 的 最 大 偏 差士20士25士30士506.3平行试验 按 上 述 步 骤，对
14、同 一 试 样 进 行 平 行 试 验 测 定。6.4空白试验 除 不 称 取 试 样 外 均 按 上 述 分 析 步 骤 进 行。结 果 计 算从 标 准 工 作 曲 线 上 得 到 试 样 中 相 应 的 R-内 酞 胺 类 药 物 浓 度 后，结 果 按 公 式（1)计 算：cxVx1000A二，二，.(1)m x 1000X 试 样 中 被 测 组 分 残 留 量，单 位 为 微 克 每 千 克（林 g/kg)一 从 标 准 工 作 曲 线 得 到 的 试 样 溶 液 中 被 测 组 分 的 浓 度，单 位 为 纳 克 每 毫 升（n g/m L).V试样溶液定容体积，单位为毫升（m
15、L).m 最 终 试 样 溶 液 所 代 表 的 试 样 质 量，单 位 为 克（g).注：计 算 结 果 需 将 空 白 值 扣 除。8精密度 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 15%a食品伙伴网http:/DB 13/T 1107-2009 附录A （资料性附录）四 种 p一 内 酞 胺 类 药 物 标 准 物 质 的 总 离 子 流 图四 种 p一 内 酞 胺 类 药 物 标 准 物 质 的 总 离 子 流 图，见 图 A.10 3.9e5 I容 Q e 5 灬匀 0 勺侧岂烤执艹“舒艺11.060，015 t/Inin1阿莫西林，2.49 min2-氨苄西林，9.80 min3-青霉素G,12.70 min4青霉素V,13.49 min图 A.1 四 种 p 一 内 酞 胺 类 药 物 标 准 物 质 的 总 离 子 流 图附 录 B （资料性附录）四 种 0 一 内 酞 胺 类 药 物 标 准 物 质 的 参 考 保 留 时 间表 B.1 四 种 0 一 内 酞 胺 类 药 物 的 参 考 保 留 时 间名 称青霉素G青霉素V氨 苄 西 林阿 莫 西 林参 考 保 留 时 间 m in12.7013.499.802.49食品伙伴网http:/食品伙伴网http:/
