1、安 徽 省 地 方 标 准 蔬菜中农药残留量测定方法 DB34/T 202-2000 1 范围 本标准规定了蔬菜中已知和未知组分的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的速测方法、残留量的定量分析方法；有机氯和拟除虫菊酯类农药残留量的测定方法。本标准适用于安徽省内蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留的速测和定量分析，以及有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的分析。同时也适用于水果、茶叶中农药多种残留量的分析。2 引用标准 本标准引用下列标准，下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
2、GB/T5009.38-1996 食品中多菌灵残留量的测定 GB/T14970-1994 食品中噻嗪酮残留量的测定 GB/T14973-1994 食品中粉锈宁残留量的测定 GB/T16340-1996 食品中灭幼脲残留量的测定 GB/T17331-1998 食品中有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留量的测定 GB/T17332-1998 食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定 3 测定方法 3.1 速测法 3.1.1 速测卡法 3.1.1.1 测定原理：利用乙酰胆碱酯酶对在有机磷或氨基甲酸酯类具有高度的敏感而引起的变化来测定蔬菜中是否具有超量的有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。3.1.1.2
3、检测材料：农药速测卡。3.1.1.3 检测步骤：a）叶菜类表面农药残留的检测 1）用超声波清洗器或干净的纸和水清洗菜叶上的灰尘和杂物。2）在洗净的菜叶上滴 2 滴洗脱液，用另一片菜叶在滴液处轻轻磨擦。3）取一片速测卡，将涂有洗脱液的菜叶上出的菜汁轻轻地涂在白色药片上。静置 10min，使农药与白色药片反应。4）将速测卡向内对折，用手指捏紧，使白色药片和红色药片紧密接触，3min 后打开，观察结果。5）白色药片变兰色为阴性反应，说明农药残留符合卫生标准；若白色不变或显淡兰色则为阳性反应，说明有过量农药残留，超过卫生标准规定。b）果菜类农药残留的检测 安徽省质量技术监督局 2000-07-0120
4、00-07-01 发布 2000-07-012000-07-01 实施 DB34/T202-2000 1）取菜体约 5g，用不锈钢剪或刀剪切碎置于试管中，加 10 滴洗脱液和 5ml 净水，或用力摇 1min。2）取试管内提取液 1 滴滴在速测卡的白色药片中放置 10min。3）将速测卡向内对折，用手指捏紧，使白色药片和红色药片紧密接触，3min 后打开，观察结果。结果判定 3.1.1.3 条的 a）。3.1.2 酶抑制率法 酶抑制率法测定农药残留，以对乙酰胆碱酯酶（AchE）具有抑制作用的有机磷和氨基甲酸酯类农药为检测对象。3.1.2.1 试剂 a)缓冲液：0.1M 磷酸盐缓冲液 PH=8.
5、0。b)酶液：适量的乙酰胆碱酯酶溶于缓冲液 c)底物：适量的碘化硫代乙酰胆碱（acctylthio-cholinc，AT chl）溶于蒸馏水。d)显色剂：适量的硫化双硝基苯甲酸（DTNB）溶于缓冲液。3.1.2.2 仪器：农药残留毒性快速测定仪。3.1.2.3 检测步骤：a)待测液制备：取 2g 剪碎的蔬菜样品放入试管中，加 6ml 缓冲液，盖上塞子，振荡 2min 后取出清液即为待测液。b)仪器校准：仪器预热 3min，按校准程序进行校准后，方可测试。c)对照测试：取酶 20l，缓冲液 2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀静置 5min 后，加入显色剂 100l，底物 20l，摇匀后立即转入比
6、色皿中，即时上机检测，打印结果。d)样品测试：取酶 20l，待测液 2.5ml，加入专用反应瓶中，混匀静置 5min 后，加入显色剂100l，底物 20l，摇匀后立即转入比色皿中，上机检测，打印结果。3.1.2.4 检测结果判定 被测样品的酶抑制率读数超过 40（即达到 40%以上）时，则表明被测样品的农药残留毒性可能超过安全的界定标准。3.2 定量分析法 3.2.1 有机磷和氨基甲酸酯类农药多种残留量的测定。3.2.1.1 试剂材料 a)丙酮：重蒸。b)二氯甲烷：重蒸。c)乙酸乙酯：重蒸。d)甲醇：重蒸。e)正乙烷：重蒸。f)磷酸。g)氯化钠。h)无水硫酸钠：700灼烧 4h，密封于瓶中备用
7、。i)氯化胺。j)硅胶：60-80 目 130烘 2h，以 5%水失活。k)助滤剂：celite545。l)凝结液：5g 氯化胺+10ml 磷酸+10ml 水，用前稀释 5 倍。m)脱脂棉：将脱脂棉放入大号索氏提取器中，加 4%丙酮-正已烷洗剂，在水浴上回流 4h 后，在通气橱内让其自行挥发干。DB34/T202-2000 n)农药标准品。o)农药标准液的配制 分别准确称取农药标准品，用丙酮为溶剂，分别配成 1mg/ml 标准储备液贮于冰箱，使用时可用丙酮稀释成单品种的标准使用液，也可根据各种农药在仪器上的响应情况，以质谱定性的结果，吸取不同量的标准储备液，用丙酮稀释成混合标准使用液。3.2.
8、1.2 仪器 a)组织捣碎机 b)匀浆机 c)超声波清洗机 d)离心机：5000r/min e)恒温水浴锅 f)旋转蒸发仪 g)气质联用仪 h)色谱仪 i)微量注射器 3.2.1.3 检测步骤 a)样品制备 蔬菜样品擦去表层泥水，取可食用部分捣碎匀浆制成分析试样备用。b)提取 按 GB/T173311998 第 6.1.1.2 条执行。c)净化 按 GB/T173311998 第 6.2 条执行。d)测定 1)气相色谱参考条件 色谱柱：OV101 25m0.32mm（内径）石英弹性毛细管柱。气体流速：氮气：50ml/min 尾吹气（氮气）：30ml/min 氢气：0.5kg/cm2空气：0.3
9、kg/cm2温度：柱温采用程序升温方式。140 180 195 235 235进样口温度 250检测器：质量选择检验器（MSD）或氮磷检测器（FTD）。50/min 10/min恒温 2min2/min 恒温 1min 2)色谱分析 分别量取 1l 混合标准溶液及样品净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准样的峰高或峰面积比较定量。3.2.1.4 计算：按式（1）计算。Xi=（1）hiEsi1000 hsimf 式中 Xii 组分有机磷农药的含量，mg/kg；hi试样 i 组分的峰高或面积；his标准中 i 组分的峰高或面积；Esi标样中 i 组分的量，g；DB34/T20
10、2-2000 m样品量，g；f换算系数，2/3。3.2.1.5 精密度和准确度 将有机磷和氨基甲酸酯类农药混合标准液分别加入到西红柿、白菜等中进行方法的精密度和准确度试验，添加回收率在 73.38%-108.22%之间，变异系数在 2.17%-7.69%之间。3.2.1.6 复检 如按 3.2.1.3 条的 b）规定，提取、净化后检测不出农药组分，建议称取试样量增大到 50g 按同样方法提取、净化、检测。3.2.2 有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留量的测定 3.2.2.1 试剂材料 a)石油醚：沸程 60-90重蒸。b)苯：重蒸。c)丙酮：重蒸。d)乙酸乙酯：重蒸。e)无水硫酸钠：700灼烧
11、4h，密封于瓶中备用。f)弗罗里硅土：层析用，于 620灼烧 4h 备用。用前 140烘 2h，趁热加 5%水失活。g)农药标准品。h)标准溶液的配制：分别准确称取农药标准品，用苯溶解并配成 1mg/ml 储备液，使用时可用石油醚稀释配成单品种的标准使用液，再根据各种农药品种在仪器上的响应情况以及质谱仪定性检测的结果，吸取不同量的标准储备液，用石油醚稀释成混合标准使用液。3.2.2.2 仪器 a)振荡器 b)组织捣碎机 c)匀浆机 d)旋转蒸发仪 e)层析柱 f)气质联用仪（或附电子捕获检测器）3.2.2.3 检测步骤 a)样品制备：取蔬菜样除去泥水擦净，取可食用部分备用。b)提取 按 GB/
12、T173321998 第 6.1.2 条执行。c)净化 按 GB/T173321998 第 6.2 条执行。d)测定 1)气相色谱参考条件 色谱柱：OV101 15m0.25mm（内径）石英弹性毛细管柱。气体流速：氮气：40ml/min 尾吹（氮气）：60ml/min 分流比：1：50 温度：柱温自 180 230保持 30min-检测器、进样口温度 250。5/min DB34/T202-2000 检测器：质谱仪（MSD）（或电子捕获器 ECD）。2）色谱分析 吸取 1l 试样液注入气相色谱仪，先以质谱仪进行定性测定，记录色谱峰的保留时间和峰高。根据质谱仪的检测结果，确定残留农药的品种，吸取
13、相应农药标准储备液，配制混标溶液，吸取 1l 混标溶液注入气相色谱，记录色谱峰的保留时间和峰高，用外标法定量。3.2.2.4 结果计算：计算按式（1）计算。Xi=k（1）hiEsiV2hsiV1m 式中 Xi样品中农药的含量，mg/kg；Esi标准样品中 i 组分农药的含量，g；V1样品中进样体积l Hsi标准样品中i组分农药峰高，mm；hi样品中 i 组分农药峰高，mm；m试样的质量，kg；k稀释倍数。3.2.2.5 精密度和准确度 将农药混合标准液加入到蔬菜 中进行方法的精密度和准确度试验，添加回收率在81.71%-112.41%之间，变异系数在 2.48%-10.05%之间。3.2.2.6 复检 如按 3.2.2.3 条的 b）规定，提取、净化后检测不出农药组分，建议称取试样量增大到 50g，按同样方法提取、净化、检测。3.2.3 多菌灵残留量的测定 按 GB/T5009.38 的规定执行。3.2.4 噻嗪酮残留量的测定 按 GB/T14970 的规定执行。3.2.5 粉锈宁残留量的测定 按 GB/T14973 的规定执行。3.2.6 灭幼脲残留量的测定 按 GB/T16340 的规定执行。附加标准：本标准由安徽省质量技术监督局提出。本标准由安徽质量技术监督局、安徽国家农业标准化与监测中心负责起草。本标准主要起草人：周云霞、朱竹、王先宏、金美峰、徐长兴。
