1、 ICS 65.020.01 B 31 备案号：31279-2011 江苏省地方标准 DB32 DB32/T 1879-2011 黑莓中鞣花酸含量的测定 高效液相色谱法 Method for determination of Ellagic Acid in Blackberry High Performance Liquid Chromatography Method 2011-08-15 发布 2011-10-15 实施 江苏省质量技术监督局 发布 DB32/T 1879-2011 I 前 言 本标准按 GB/T1.1-2009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写的规定编制。本标准
2、由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院农产品加工研究所。本标准主要起草人：刘小莉、周剑忠、单成俊、王英、李莹、张丽霞。DB32/T 1879-2011 1 黑莓中鞣花酸含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定黑莓中鞣花酸含量的方法。本标准适用于黑莓鲜果、黑莓叶子、黑莓籽等产品中鞣花酸的测定。本方法最低检测限为黑莓鲜果中鞣花酸含量在0.2mg/100g、黑莓叶和黑莓籽中鞣花酸含量在1mg/100g以上。2 规范性引用文献 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（
3、包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 利用鞣花酸的结构特性，是没食子酸的二聚衍生物，是一种多酚二内酯，呈反式没食子酸单宁结构，有多个共轭双键结构，在254nm处有最大吸收峰。4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器 4.2 电子分析天平 4.3 高速组织捣碎机 4.4 超声波清洗器 4.5 高速离心机 5 试剂和溶液 以下所用试剂和水，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T 6682-2008中规定的三级水。鞣花酸标准溶液：准确称取鞣花酸标准品5.0mg，以色谱纯甲醇溶解，并定容至5mL，摇匀，配成浓度为1mg
4、/mL的母液，4保存；无水乙醇；乙腈，色谱纯；磷酸；石油醚。6 试样制备 DB32/T 1879-2011 2 6.1 黑莓鲜果 准确称取250g新鲜黑莓样品，加100ml去离子水，用高速组织捣碎机打浆。取50ml匀浆，加入等体积的无水乙醇，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入50ml 50%乙醇溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。以0.45m滤膜过滤后4保存备用。6.2 黑莓叶子 新鲜黑莓叶子于电热恒温干燥箱 50烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎 1min，过孔径 0.28mm 筛后备用。准确称取 5g 黑莓叶粉末，加 40ml 5
5、0%乙醇溶液，于超声波中处理 20min 后，10000 转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入 50ml 50%乙醇溶液按上述步骤重复提取 2 次，合并上清，定容至 200ml。以 0.45m 滤膜过滤后 4保存备用。6.3 黑莓籽 新鲜黑莓种籽于电热恒温干燥箱 50烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎 1min，过孔径 0.28mm 筛后备用。准确称取 5g 黑莓籽粉末，加入 40ml 石油醚，100 转/分钟振荡 30min，弃去石油醚层，残余黑莓籽中加 40ml 50%乙醇溶液，于超声波中处理 20min 后，10000 转/分钟离心 10min，取上清，沉淀中加入50ml 50%乙醇溶液
6、按上述步骤重复提取 2 次，合并上清，定容至 200ml。以 0.45m 滤膜过滤后 4保存备用 7 检测方法 7.1 高效液相色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6250mm，5 m）流动相：乙腈-1.2%磷酸（18：82），流速 1mL/min 温度：30 进样量：20 L 检测器：紫外检测器，波长254nm 7.2 标准曲线 用流动相稀释标准储备液，配制系列浓度的标准工作溶液：5 g/mL、10 g/mL、20 g/mL、50 g/mL、100 g/mL。在上述色谱条件下测定，以峰面积为纵坐标、相应的标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。鞣花酸标样的高效液相色谱图见附录
7、A。7.3 样品检测 将过滤后的试样溶液在上述色谱条件下测定，用峰面积在标准曲线上计算试样溶液中鞣花酸的浓度。7.4 结果计算与表达 7.4.1 结果计算 结果按式（1）式计算：X=100mVC-(1)式中：DB32/T 1879-2011 3 X试样中鞣花酸含量，单位为毫克每 100 克（mg/100g）;C由标准曲线上查出或由直线回归方程求出的样品中鞣花酸的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）;V试样制备体积，单位为毫升（mL）；m试样的质量（g）；7.4.2 平行测定结果 用算术平均值表示，保留三位有效数字。8 允许差 同一分析者对同一试样同时测定两次（或重复测定）所得结果相对偏差不大于10。DB32/T 1879-2011 4 附录A (技术性附录)0.1 mg/ml鞣花酸标准品图谱 图.1 0.1 mg/ml鞣花酸标准品图谱
