1、 ICS 67.200.10 X14 DB61 陕西省地方标准 DB 61/T 9672015 植物油中苯并a芘的测定 液相色谱-荧光检测法 Determination of benzo pyrene in vegetable oil Liquid chromatography with fluorescence detector 2015-05-25 发布 2015-07-01 实施陕西省质量技术监督局 发 布 DB61/T 9672015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准附录A、附录B均为资料性附录。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构
2、不承担识别这些专利的责任。本标准由陕西出入境检验检疫局提出。本标准由陕西省质量技术监督局归口。本标准由陕西出入境检验检疫局负责解释。本标准起草单位：陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：何强、孔祥虹、李建华、张璐、邹阳、李莹、付骋宇、包仁书。本标准首次发布。联系信息如下：单位：陕西出入境检验检疫局；电话：029-85407235；地址：西安市含光北路10号；邮编：710068。DB61/T 9672015 1 植物油中苯并a芘的测定 液相色谱-荧光检测法 1 范围 本标准规定了植物油中苯并a芘含量的液相色谱-荧光检测方法。本标准适用于花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、
3、菜籽油、橄榄油、芝麻油中苯并a芘含量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用正己烷溶解后，芝麻油样品经硅胶固相萃取柱串联聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化、其他植物油经聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化，用液相色谱-荧光检测仪检测，外标法定量。4 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。4.1 定量限 Limit of Quantity 指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测
4、定结果应具有一定的准确度和精密度。5 试剂和材料 警告：苯并a芘是一种已知的强致癌物质，应注意危险品操作规则。5.1 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。5.2 乙腈：色谱纯。5.3 二氯甲烷：色谱纯。5.4 正己烷：色谱纯。5.5 乙腈-水（95+5，V/V）：取 950mL 乙腈和 50mL 水，混合均匀。5.6 苯并a芘标准物质（Benzoapyrene,C20H12,CAS:50-32-8）：纯度不小于 99。5.7 苯并a芘标准储备溶液：准确称取适量的苯并a芘标准物质，用二氯甲烷配制成 1000g/mL 的标准储备溶液，04保存。DB61/T 9
5、672015 2 5.8 苯并a芘标准工作溶液：测定时根据需要用乙腈逐级稀释，配制成适当浓度的标准工作溶液，常用浓度范围为 0.5ng/mL20ng/mL，04保存。5.9 聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱：500mg/6 mL 或相当者，使用前依次用 3mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化。5.10 硅胶固相萃取柱：500mg/6mL 或相当者，使用前用 5mL 正己烷活化。5.11 微孔滤膜：0.2m，有机系。6 仪器和设备 6.1 液相色谱仪：配有荧光检测器。6.2 分析天平：感量 0.01mg、0.01g。6.3 涡旋混匀器。6.4 固相萃取装置。6.5 具塞离心管或试管：10mL
6、15mL。6.6 氮气吹干仪。6.7 超声波提取仪。7 测定步骤 7.1 提取净化 7.1.1 花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、菜籽油、橄榄油 称取试样0.5g（精确至0.001g）于15mL离心管中，加入3mL正己烷，涡旋溶解，上样于聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱中，用2mL正己烷洗涤样品管，将洗涤液一并上样于柱中，待样品溶液流至近干后，用5 mL正己烷淋洗，弃去所有流出液，用5mL二氯甲烷洗脱，收集二氯甲烷洗脱液，整个固相萃取过程保持流速1 mL/min2 mL/min，于40氮气吹干，用1.00 mL乙腈超声10s溶解定容，过0.2m有机系微孔滤膜，供液相
7、色谱检测。如果个别样品出现回收率偏低、色谱基线不稳定的情况，可以采用本标准7.1.2的方法进行样品净化。7.1.2 芝麻油 称取试样0.5g（精确至0.001g）于15mL离心管中，加入3mL正己烷，涡旋溶解，将硅胶固相萃取柱串联在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱上端，将样品溶液上样于串联柱中，再用2 mL正己烷洗涤样品管，将洗涤液一并上样于柱中，待样品溶液流至近干后，用5 mL正己烷淋洗串联固相萃取柱，淋洗完成后去除硅胶固相萃取柱，用5mL二氯甲烷洗脱聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，收集二氯甲烷洗脱液，整个固相萃取过程保持流速1 mL/min2 mL/min，于40氮气吹干，用1.
8、00mL乙腈超声10s溶解定容，过0.2m有机系微孔滤膜，供液相色谱检测。7.2 测定 7.2.1 液相色谱条件 测定时的液相色谱条件如下：a)色谱柱：多环芳烃分析专用柱（C18 填料），长 250mm，内径 4.6mm，粒径 5m；b)流动相：乙腈-水（95+5，V/V）等度洗脱；DB61/T 9672015 3 c)柱温：35C；d)荧光检测器：激发波长 384nm，发射波长 406nm；e)流速：1.5mL/min；f)进样量：20L。7.2.2 液相色谱测定 根据样液中苯并a芘含量情况，选定浓度与样液浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中苯并a芘的响应值均应在仪器检测范围内，如果
9、样液中苯并a芘含量超出检测的范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，以保留时间定性，外标法定量，在本标准7.2.1给定的液相色谱荧光检测条件下，苯并a芘标准品的液相色谱图参见附录A中图A.1。7.3 空白试验 除不加试样外，均按上述检测步骤进行。7.4 结果计算和表述 7.4.1 用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中苯并a芘含量（g/kg）：10001000=mAVcAXss （1）式中：X 试样中苯并a芘的含量（g/kg）；A 样液中苯并a芘的色谱峰面积；cs 标准工作液中苯并a芘的浓度（ng/mL）；V 样液最终定容体积（mL）；As 标准工作液中苯并a芘的色
10、谱峰面积；m 试样质量（g）。7.4.2 计算结果应扣除空白值。计算结果保留两位有效数字。8 检出限、定量限、回收率和精密度 8.1 检出限、定量限 本方法的检出限为0.3g/kg，定量限为1.0g/kg。8.2 回收率和精密度 苯并a芘的回收率及精密度数据参见附录B中表B.1。DB61/T 9672015 4 A A 附 录 A（资料性附录）苯并a芘标准品液相色谱图 A.1 苯并a芘标准品液相色谱图 苯并a芘标准品液相色谱图如图A.1所示。图A.1 苯并a芘标准品溶液（5.0ng/mL）液相色谱图 DB61/T 9672015 5 B B 附 录 B（资料性附录）苯并a芘的添加回收率及精密度
11、数据 B.1 植物油中苯并a芘的添加回收率及精密度数据如表B.1 所示。表B.1 植物油中苯并a芘的添加回收率及精密度数据 样品名称 加标水平/（g/kg）回收率范围/%平均回收率/%相对标准偏差/%花生油 5.0 79.3103.6 89.6 9.8 10.0 80.499.7 88.9 7.1 20.0 81.599.0 89.8 6.9 大豆油 1.0 78.198.6 87.9 7.6 5.0 80.998.4 88.6 7.1 10.0 81.9101.1 90.1 7.7 玉米胚芽油 1.0 78.997.4 87.9 7.5 5.0 79.898.1 88.8 6.8 10.0
12、81.4100.6 89.2 7.4 葵花籽油 2.0 77.3102.5 89.8 9.8 5.0 78.299.2 89.1 7.8 10.0 79.999.7 89.2 7.8 稻米油 1.0 79.7101.2 88.9 8.6 5.0 80.699.7 89.5 7.7 10.0 79.9100.2 90.1 8.3 胡麻油 5.0 77.8106.8 89.1 11.8 10.0 79.799.4 89.6 7.5 20.0 82.8102.1 89.8 7.7 坚果调和油 2.0 77.999.2 88.2 9.1 5.0 78.198.4 88.9 7.4 10.0 79.5101.8 90.0 8.2 菜籽油 1.0 78.599.6 88.4 8.1 5.0 79.697.9 88.9 7.1 10.0 80.499.6 89.4 7.4 橄榄油 1.0 79.4100.9 88.8 8.4 5.0 80.0101.3 89.9 8.2 10.0 82.5102.8 90.8 8.0 芝麻油 1.0 78.4100.3 87.2 8.9 5.0 79.499.8 88.5 7.6 10.0 81.3101.2 89.7 7.5
