1、 2016-11-28 发布 2017-01-01 实施DBS13河北省地方标准DBS13/0062016食品安全地方标准 食品中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定 高效液相色谱法 河北省卫生和计划生育委员会河北省卫生和计划生育委员会 发布 发布 DBS13/0062016 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009规定的格式编写。本标准的附录A为资料性附录。本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。本标准于2016年11月28日首次发布。DBS13/0062016 1 食品安全地方标准 食品中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定 高效液相
2、色谱法 1 范围 本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的高效液相色谱测定方法。本标准适用于食品中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的测定。2 原理 不同的性质样品采用相应的方法进行提取，提取液过滤后用高效液相色谱分离测定，色谱峰保留时间定性，外标法定量。3 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用成为本标准的条文。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 66
3、82 分析实验室用水规格和试验方法 4 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，实验用水符合 GB/T 6682 的要求。4.1 甲醇：色谱纯。4.2 磷酸二氢铵(NH4H2PO4)。4.3 亚铁氰化钾K4Fe(CN)63H2O。4.4 乙酸锌Zn(CH3COO)22H2O。4.5 氢氧化钠(NaOH)。4.6 0.1 mol/L 磷酸二氢铵溶液：称取 11.5 g 磷酸二氢铵(4.2)加水溶解并定容至 1000 mL。4.7 0.25 mol/L 亚铁氰化钾溶液：称取 106 g 亚铁氰化钾(4.3)加水溶解并定容至 1000 mL。4.8 1.0 mol/L 乙酸锌溶液：称取 220 g
4、 乙酸锌(4.4)加水溶解并定容至 1000 mL。4.9 20 g/L 的氢氧化钠溶液：称取 20 g 氢氧化钠(4.5)加水溶解并定容至 1000 mL。DBS13/0062016 2 4.10 标准品：苯甲酸钠(CAS#：532-32-1）、山梨酸钾（CAS#：24634-61-5）、脱氢乙酸钠（CAS#：4418-26-2）、糖精钠（CAS#：24634-61-5）和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）（CAS#：33665-90-6），纯度均大于或等于 98%。4.11 标准储备液：分别称取适量标准品(4.10)(精确至 0.1 mg)，糖精钠需 120 烘干 4 小时，冷却至室温时称取。脱氢乙酸
5、钠用 20 g/L 的氢氧化钠溶液（4.9）溶解，其余物质用水溶解，分别配制成含苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）1.0 mg/mL 的标准储备液。0-4 保存，可使用 3 个月。4.12 混合标准中间液：分别准确吸取 10 mL 苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的标准储备液（4.11）于 100 mL 容量瓶中，用水配制成 100 g/mL 的混合标准中间液。0-4 保存，可使用 1 个月。4.13 混合标准工作液：根据实验需要吸取适量的混合标准中间液(4.12)，用水分别配置成浓度为 0 g/mL、1 g/mL、5 g/mL、10 g/mL、2
6、0 g/mL、50 g/mL 的混合标准工作溶液，现用现配。4.14 微孔滤膜：0.45 m，水系。5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2 离心机：转速不低于 3 000 r/min。5.3 超声清洗机。5.4 涡旋混合器。5.5 天平：感量分别为 0.01 g 和 0.1 mg。6 分析步骤 6.1 样品处理 6.1.1 糕点、饼干、肉制品、奶油、蔬菜、果酱、豆干、坚果、调味品、植物蛋白饮料、乳酸饮料、乳及乳制品等含蛋白样品 固态或半固态样品称取 2.5 g5 g（精确至 0.01 g）、液态样品称取 2.5 g10 g（精确至 0.01 g），于
7、25 mL 容量瓶中，加入 2.0 mL 亚铁氰化钾溶液（4.7），2.0 mL 乙酸锌溶液（4.8），接着加水至约20 mL，混匀，超声提取 20 min，然后用水定容至刻度，混匀，移入离心管中，3 000 r/min 离心 10 min，取上清液，经微孔滤膜（4.14）过滤，滤液待高效液相色谱分析。6.1.2 碳酸饮料、果酒、调味品、葡萄酒等不含蛋白样品 称取 2.5 g10 g 制备均匀的样品（精确至 0.01 g）于 25 mL 容量瓶中，直接加水至约 20 mL，超声 20 min，然后用水定容至刻度，混匀，移入离心管中，3 000 r/min 离心 10 min，取上清液，经微孔滤
8、膜（4.14）过滤，滤液待高效液相色谱分析。6.1.3 果冻、糖果、蜂蜜类样品 DBS13/0062016 3 称取 2.5 g5 g 制备均匀的样品（精确至 0.01 g）于 25 mL 容量瓶中，加水适量，置 70 水浴中将样品完全溶解后再超声提取 20 min，放置室温后用水定容至刻度，混匀，移入离心管中，3 000 r/min离心 10 min，取上清液，经微孔滤膜（4.14）过滤，滤液待高效液相色谱分析。6.1.4 蜜饯凉果类样品 称取 2.5 g5 g 制备均匀的样品（精确至 0.01 g）于 25 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，放置 8 h 后超声提取 20 min，移入
9、离心管中，3 000 r/min 离心 10 min，取上清液，经微孔滤膜（4.14）过滤，滤液待高效液相色谱分析。6.2 高效液相色谱参考条件 a)色谱柱：C18 柱，150 mm4.6 mm，5 m，或性能相当的色谱柱；b)流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢铵溶液（A）（4.6）+甲醇（B）；梯度洗脱，洗脱条件见表 1；c)流速：1.0 mL/min；d)检测波长：230 nm；e)进样量：20 L。表 1 梯度洗脱条件 时间（min）A（%）B（%）0 95 5 3 95 5 13 65 35 20 65 35 20.1 95 5 25 95 5 6.3 测定 在仪器最佳状态下测定混合
10、标准工作溶液和样液，或参差进样，保证所测样品中待测物的响应值均在线性范围内，如果超出标准曲线范围，用水对样液进行适当稀释。以待测物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线。以保留时间定性，外标法定量。7 结果计算 样品中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）的含量按式（1）计算：100010001000mVCX.(1)式中：X 样品中被测物含量，单位：g/kg；C 由标准曲线得出的样液中被测物的浓度，单位：g/mL；V 样品溶液定容体积，单位：mL；m 样品质量，单位：g。计算结果保留两位有效数字。8 精密度 DBS13/0062016 4 在重复性条件下获得的两次独立
11、测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。9 定量限 当取样量为 2.5 g 时，乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）定量限为 3 mg/kg、苯甲酸和山梨酸定量限为 2 mg/kg、脱氢乙酸和糖精钠定量限为 4 mg/kg；当取样量为 5.0 g 时，乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）定量限为 1.5 mg/kg、苯甲酸和山梨酸定量限为 1 mg/kg、脱氢乙酸和糖精钠定量限为 2 mg/kg；当取样量为 10 g 时，乙酰磺胺酸钾（安赛蜜）定量限为 1 mg/kg、苯甲酸和山梨酸定量限为 0.6 mg/kg、脱氢乙酸和糖精钠定量限为 1.5 mg/kg。DBS13/0062016 5 A A 附 录 A（资料性附录）标准色谱图 1 安赛蜜；2 糖精钠；3 苯甲酸；4 山梨酸；5 脱氢乙酸。min 2.5 57.51012.51517.52022.5mAU010203040 1 2 35 4
