1、ICS67.120B45中华人民共和国国家标准农业部958号公告一5一2007鸡可食性组织中泰乐菌素残留检测方法高效液相色谱法High performance liquid chromatographic method for thedetermination of Tylosin residues in edible tissues of chicken2007-12-29发布2008-03-01实施中华人民共和国农业部发布农业部958号公告一5一20074.2.10磷酸缓冲液0.1moL/L称取磷酸二氢钠15.6g,用水溶解，磷酸调整pH为2.5，用水稀释到1000mL,配成0.1ol/L
2、磷酸缓冲液。4.2.11乙酸铵溶液0.1moL/L称取乙酸铵7.7g,用甲醇溶解稀释到1000mL,配成0.1moL/L乙酸铵溶液。4.2.12泰乐菌素标准贮备液精确称取泰乐菌素10.0mg,用甲醇溶解，定容至100mL,配成1004g/mL的标准贮备液，置于一20以下冰箱中保存，有效期3个月。4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）。4.3.2分析天平：感量0.00001g。4.3.3冷冻高速离心机。4.3.4匀浆机。4.3.5旋涡混合器。4.3.6循环水真空泵。4.4测定步骤4.4.1试料的制备试料的制备包括：一取均质后的供试样品，作为供试材料。取均质后的空白样品，作为空白
3、材料。4.4.2提取准确称取试料10g士0.05g,置于具塞离心管中，加乙腈10mL旋涡混合2min,10000r/min4离心l5min,取上清液于离心管中，再在试料中加乙腈10mL重复提取一次。合并上清液，10000r/min4离心10min。取上清液于圆底烧瓶中，45水浴减压蒸馏至近干，加水5.0mL溶解残渣，待净化。4.4.3净化用甲醇3mL和水3mL活化固相萃取柱，将提取液过柱，控制流速小于2mL/min。用水5mL和40%甲醇1mL淋洗，用0.1moL/L乙酸铵溶液1mL洗脱，收集洗脱液。在4045水浴条件下氮气吹干，用1.0mL甲醇溶解残渣，l0000r/min离心5min,取上
4、清液供高效液相色谱分析。4.4.4标准曲线的绘制准确移取泰乐菌素标准储备液适量，用甲醇依次稀释成浓度分别为0.1g/L、0.2g/mL、0.4ug/mL、0.8g/mL、1.6g/mL、3.2ug/mL的标准工作液，分别取20L供高效液相色谱分析，每个浓度重复3次，将测得的峰面积与对应浓度拟合，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。4.4.5测定4.4.5.1液相色谱条件色谱柱：Ca柱，5um,200mm4.6mm。流动相：甲醇/乙腈/甲酸铵溶液(0.1moL/L)比例为：10/35/55，V/V。流速：l.0mL/min。紫外检测波长：286nm。进样量：20L。柱温：30。4.4.5.2色谱测定2
