1、I C S6 5 1 0 0B1 6a 目中华人民共和国国家标准G B T2 5 8 6 4 2 0102 0 11 0 1 1 0 发布球孢白僵茵粉剂P o w d e ro fB e n H v e，i 口西口s s i n n 口2 0 1 1 0 6 0 1 实施丰瞀髅紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会及1 1 1刖昌G B T2 5 8 6 4 2 0 1 0本标准的附录A、附录B 为规范性附录，附录C 为资料性附录。本标准由国家林业局提出并归日。本标准起草单位：国家林业局森林病虫害防治总站、安徽农业大学、中国林业科学院、华中农业大学微生物农药国家工程研究中心。本标准主要起草人
2、：郭志红、李增智、陈昌洁、宋玉双，喻子牛、樊美珍、胡加富、崔永三、苏宏钧、李林，任浩章。G B T2 5 8 6 4 2 0 1 0引言球孢白僵菌粉剂是一种真菌杀虫剂。白僵菌经过发酵获得分生孢子，经萌发侵入目标害虫体内，破坏害虫组织并产生毒素，使害虫致死。球孢白僵菌的名称及基本参数如下：菌种中文通用名：球孢白僵菌。菌种拉丁文学名：B e 口“口e r 缸6 口s s i 口n n(B a l s)V u i l l-分类地位：球孢白僵菌在分类上属于真菌门(E u m y c o t a)，半知菌亚门(D e u t e r o m y c o t i n a)，丝孢纲(H y p h o m
3、y c e t e s)，丛梗孢目(M o n i l i a l e s)，丛梗孢科(M o n i l i a c e a e)，白僵菌属(B“。P r 妇)。鉴定特征：在麦芽浸膏培养基上，菌落的菌丝呈白色绒状，后期呈丛卷毛状至粉状，背面初期无色，菌落产孢后呈淡黄色至粉红色。分生孢子梗常浓密簇生(但有时单生或轮生)，呈瓶状，形成“之”字状弯曲产孢轴。分生孢子球形，透明，薄壁。大小为(2p m 3p m)(2p m 2 5p m)。菌种保藏条件：温度5；避光；封装。有效成分主要存在形式：分生孢子。生物活性：主要用于防治鳞翅目害虫。适宜生长条件：麦芽浸粉或P D A 培养基、适宜温度2 5、p
4、 H 6。最适贮存温度：5。球孢白僵茵粉剂1 范围本标准规定了球孢白僵菌粉剂的要求、检验方法及标签、包装、贮运等规则。本标准适用于球孢白僵菌经生物发酵与加工而获得的分生孢子粉剂。本标准不适用于布氏白僵菌或其他种类白僵菌生产的杀虫剂。2 规范性引用文件G B T2 5 8 6 4 2 010下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B T1 6 0 5 2 0 0 1商品农药采样方法
5、G B3 7 9 6 2 0 0 6 农药包装通则G B T1 6 1 5 0 一1 9 9 5 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3 1球孢白僵菌粉剂丑H y P，缸p o w d e rp m d u c t由球孢白僵菌纯菌种经生物发酵生产与加工而获得的分生孢子粉剂。是防治多种害虫的真菌杀虫剂。3 2球孢白僵菌丑P 4 H w r 缸6 口j s f 删口(B a l s)v u i l l 一种半知菌类的虫生真菌，分类上属于真菌门(E u m y c o t a)，半知菌亚门(D e u t e r o m y c o t i n a)，丝孢纲(H
6、 y p h o m y c e t e s)，丛梗孢目(M o n i l i a l e s)，丛梗孢科(M o n l l i a c e a e)，白僵菌属(B e 口M 口P r 谊)。3 3分生孢子c o n i d i a一种无性繁殖细胞。着生于分生孢子梗上的瓶状产胞细胞顶端，对昆虫具有致病力。球孢白僵茵的分生孢子大部分呈球形。3 4含孢量c j m ac t t每克白僵菌粉剂中所含的分生孢子数。3 5孢子萌发率嚣咖i n a t i o nr a t eo fc o n i d i a白僵菌粉剂中所萌发的白僵菌孢子数占孢子总数的百分比。3 6毒力测定b i o s a y用杀虫
7、剂感染目标害虫或指示昆虫使其感病死亡，是检验杀虫剂毒力的过程。1G B T2 5 8 6 4 2 0 1 03 7毒力v i n l c e对目标害虫的致死能力，以通过活体生物测定得到的致死中时L T。表示。3 8干燥减量l o s si nw e i 曲t样品在规定条件下，经加热干燥后质量减少的百分数，即样品中水分及少量低挥发物的量。3 9杂菌率m i c m b i a lc t a m i n t真菌农药中除有效成分真菌外，其他影响有效成分真菌生长的菌占总菌量的百分比。4 要求4 1 外观白色或浅灰白色粉末，不可以有团块。4 2 控制项目指标球孢白僵菌粉剂应符合表1 的要求。裹1 球孢白
8、僵菌粉剂控制项目指标项目指标高孢粉1o o o 亿孢子g含孢量低孢粉1 0 0(土1 0)亿孢子g高孢粉9 0 孢子萌发率低孢粉9 0 高孢粉L T；。5d毒力L T；。低孢粉L T s。6d高孢粉5 杂菌率低孢粉1 0 高孢粉1 0 干燥减量低孢粉1 0 高孢粉全部通过1 6 0 目筛细度低孢粉全部通过3 5 目筛贮存稳定性在5 条件下贮存1 8 0d，孢子萌发率大于标明值的8 0 5 检验方法5 1 抽样按照G B T1 6 0 5 2 0 0 1 中5 1 _ 3“商品农药采样方法”进行，用随机数表法确定抽样的包装件，最终抽样量不少于1 0 0g。5 2 鉴别试验5 2 1 菌种鉴别根据
9、所提供的菌种形态学、生物化学、D N A 分子特征或国际公认机构的鉴定特征，用显微镜观察法从生物形态上进行鉴定或采用其他(如生物化学、D N A 片段序列)方法进行鉴定。5 2 2 菌种仲裁鉴定当对鉴别结果有怀疑或争议时，应到有菌种认证资质的单位，与菌种保藏中心保藏的生产菌株进行2G B T2 5 8 6 4 2 0 1 0对照，由2 名以上的专家确定后，出具菌种鉴定报告，作为仲裁依据。5 3 含孢量的测定5 3 1 方法提要本试验采用显微记数法。将粉剂稀释至适当倍数，在显微镜下用血球记数板计孢子数，然后计算含孢量。5 3 2 试剂吐温8 0(化学纯)。5 3 3 仪器及设备光学显微镜、精度为
10、千分之一的天平、组织捣碎机、血球记数板(1 6 1 6)、微量移液器、玻璃器皿等。5 3 4 检验程序用精度为千分之一的天平准确称取低孢粉1 _ 0 0g 或高孢粉o 1 0g，装入组织捣碎机的盛液杯中，同时加入o 1m L 的吐温8 0、2 0 0m L 清水，以50 0 0r m i n 的速度搅拌2m i n，加清水定容至5 0 0m L，再以50 0 0r m i n 的速度搅拌1m i n，使之成为均匀的孢子悬浮液。将孢子浓度控制在每中格2 0 4 0 个，如果不合适可以稀释样品调节成此浓度。取深度为o 1m m、血球计数板格为1 6 1 6 个中格，盖上配套专用盖玻片，用吸管吸取配
11、制好的悬浮液沿盖玻片的边缘滴入，使孢子液恰好充满盖玻片于载玻片之间，以孢子液不入槽为度，多余孢子液用滤纸吸去。放在显微镜载物台上静置1m i n 2m i n，待浮动的孢子静止后，放大4 0 0 倍检视计数。5 3 5 检验结果计算血球计数板记数格为1 6 个中格，每个中格为1 6 个小格，则计算双线范围内任一斜对角线上的四个中格共6 4 个小格的孢子总数。记数时每中格的四周如有压线的孢子，计上线不计下线，计左线不计右线。按公式(1)计算待测样品的孢子含量：。(S 1+S 2+S 3+S 4)4 1 0 6 T。一1 r 一式中：s 含孢量，亿孢子g；s，s。任意4 个中格中孢子的数量；T 稀
12、释倍数。每个样品设3 个重复。允许误差率为1 0。5 4 孢子萌发率的测定将5 0m L 麦芽茇粉培养液(麦芽浸粉2，用蒸馏水配制)注入预先放入2 0 3 0 个直径5m m 玻璃珠的2 5 0m L 三角瓶中，在1 2 1 条件下灭菌2 0m i n 后，放人待测低孢粉o 2g(或根据含孢量换算成适合镜检的克数，高孢粉亦然)，置于1 2 0r m i n 的摇床上，在2 5 条件下培养8h 1 6h(视菌种特性而定)，取样制片镜检。用血球数板计数，芽管大于孢子半径的孢子计为萌发孢子。按公式(2)计算孢子萌发率：R 一是1 0 0 式中：R 孢子萌发率，；N 萌发孢子总数；M 一检查孢子总数。
13、每个样品设3 个重复。允许误差率为1 0。5 5 干燥减量的测定5 5 1 仪器爰设备扁形称量瓶(5 0m m)；G B T2 5 8 6 4 2 0 1 0电热恒温干燥箱(士2)。5 5 2 测定步骤将扁形称量瓶在1 1 0 干燥箱烘1 5m i n，取出称量、记录。准确称取5 o og 样品放人皿内，在(1 0 5 士2)电热恒温干燥箱中烘1h。取出后将样品和扁形称量瓶一起称重，减去扁形称量瓶的重量。按公式(3)计算干燥减重(含水率)：每个样品设3 个重复。允许误差率为2。5 6 毒力测定按附录A、附录B 进行。5 7 杂菌率测定(c l 哪法)5 7 1 采用2 麦芽浸膏、2 营养琼脂配
14、制培养基，1 2 1 高压灭菌2 0m i n 后凉至4 5 左右，倒人培养皿制成2m m 4m m 的平板。5 7 2 按5 3 4 中的操作步骤称样、均散、稀释(用无菌水)。稀释倍数依具体情况而定，或同时做几个稀释梯度，使每个培养皿中的菌落保持在1 0 2 0 个。5 7 3 用微量移液器接种1 0 0”L 菌液到培养基平板上，用曲玻棒涂布均匀。做1 0 次重复。5 7 4 在2 7 条件下培养4 8h，根据菌落特征分辨球孢白僵菌或杂菌，分别计数。计算出杂菌占总菌落数的百分比。5 8 细度的测定按照G B T1 6 1 5 0 一1 9 9 5 中的2 1 干筛法(适用于粉剂)执行。高孢粉
15、应全部通过1 6 0 目筛，低孢粉应全部通过3 5 目筛。5 9 贮存稳定性的测定将产品在5 条件下贮存1 8 0d，孢子萌发率应大于标明值的8 0。6 标志、标签、包装和贮运6 1 标志、标签球孢白僵菌粉剂的标志及标签应符合G B3 7 9 6 2 0 0 6 的规定。标签上应注明贮运条件。6 2 包装产品包装要求应符合G B3 7 9 6 2 0 0 6 的相关规定。6 3 贮运6 3 1 贮藏地点球孢白僵菌粉剂的贮藏应选择低于2 0、干燥、通风、蔽光的场所。有条件的应在5 条件下保存。6 3 2 运输球孢白僵菌粉剂在运输中应密封防潮、防晒、防高温、防雨淋。避免与皮肤、眼睛接触，防止由口鼻
16、吸人。6 4 产品特殊要求产品应采用塑料袋密封包装，以保证干燥减量在1 0 以下。6 5 保证期在规定的贮运条件下球孢白僵菌粉剂的保证期为6 个月。从生产日期算起，至少6 个月内孢子萌发率不低于标明值的8 0。等一量胍髓重样减后燥千千烘!一式眠附录A(规范性附录)以松毛虫为目标昆虫的毒力测定G B T2 5 8 6 4 2 010A 1 供试虫种马尾松毛虫D P n d r 0“m“s 声“n c 把托sW a l k e rA 2 试剂和材料麦芽浸粉(生化试剂)；葡萄糖(医用)；吐温8 0(化学纯)；新洁尔灭(医用)。A 3 仪器设备电子秤(千分之一精度)；加湿器(超声波低温加湿器)；养虫笼(由3 0c m 3 0c m 5 0c m 的木制框架构成，上下两面用木板，四个侧面用窗纱，有一个可以开关的侧门)；三角瓶(2 5 0m L)；不锈钢镊子(医用)。A 4 供试幼虫的饲养A 4 1 蛹的采集在林间用带有橡皮头的镊子轻轻取下成熟的马尾松毛虫蛹，放人养虫笼内。每笼3 0 只。保持温度在2 5、相对湿度在8 0 以上(必要时用加湿器)。A 4 2 成虫的饲养和产卵待蛹羽化后，同时放人1
