1、ICS 65.150B 50D B 1 3河北省地方标准DB13/T 1127-2009中 华 鳖 穿 孔 病 防 治 技 术 规 范2009-08-10发布2009-08-25实施河d匕省质量技术监督局发布食品伙伴网http:/ i j 青本 标 准 由 河 北 省 水 产 局 提 出。本 标 准 起 草 单 位：保 定 市 水 产 技 术 推）站、廊 坊 市 水 产 技 术 推 广 站。本 标 准 主 要 起 草 人：张 耀 红、刘 学 军、杨 方 辉、徐 彩 利、李 盼 刚、王 艳 池、葛 京、张 修 建、韩 占 江、高 倩食品伙伴网http:/ 1127-2009中 华 鳖 穿 孔 病
2、 防 治 技 术 规 范范 围本 标 准 规 定 了 由 嗜 水 气 单 胞 菌、产 碱 假 单 胞 菌 引 起 的 中 华 鳖 穿 孔 病 的 诊 断 和 防 治 技 术。本 标 准 适 用 T 中 华 鳖 养 殖 生 产 中 穿 孔 病 的 诊 断 和 防 治。规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，其 随 后 所 有 的修 改 单（不 包 括 勘 误 的 内 容）或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准，然 而，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议
3、的 各 方 研 究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。GB汀6682-1992分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088-2000出入境动物检疫采样 SC/T 1010中华鳖池塘养殖技术规范 SC/T 1047中华鳖配合饲料 NY 5051无公害食品淡水养殖用水水质 NY/T 5067无公害食品中华鳖养殖技术规范 NY 5070无公害食品水产品中渔药残留限量 NY 5071无公害食品渔用药物使用准则 NY 5072无公害食品渔用配合饲料安全限量3流行特点及病因 发 病 期 4月
4、一 10月，5月 一 7月 为 高 发 期，流 行水 温 25 C-30 C；可 感 染 任 一 阶 段 的 中 华 鳖，尤其对 温 室 幼 鳖 危 害 最 大，发 病 率 可 达 50%；常 与 腐 皮、疖 疮 病 并 发：具 有 流 行 面 广 、传 染 性 强、病 程 长、伴 随 继 发 感 染 等 特 点；饲 养 环 境 恶 化、饲 料 腐 败 变 质、受 伤 等 导 致 鳖 体 抗 病 力 下 降，是 该 病 发 生 的 主 要原 因。4病原 中 华 鳖 穿 孔 病 的 致 病 菌 为 气 单 胞 菌 属 的 嗜 水 气 单 胞 菌（A erom onas hydr叩 hila)和
5、产 碱 假 单 胞 菌(Pseudom onas pseudoalcaligenes)o5样品采集、保存 选 择 症 状 明 显 的 中 华 鳖，按 G B/T 18088-2000进 行 产 地 采 样、保 存：在 无 菌 操 作 下 挑 取 病 灶 放 入 盛有 无 菌 水 和 玻 璃 珠 的 二 角 烧 瓶 中，1 2 0 rp m 振 荡，4 保 存。实 验 室 用 水 符 合 G B 汀 6 6 8 2-1 9 9 2 要 求。6诊断6.1临床诊断 发 病 初 期，病 鳖 的 背 甲、腹 甲 及 裙 边 出 现 直 径 大 约 为 0.2 cm-1.0 cm 的 白 色 疮 痴，其
6、周 围 出 血，疮 痴 挑 开 后，内 容 物 呈 脓 汁 状，并 伴 有 腥 臭 味；随 着 病 情 的 发 展，患 部 溃 烂 成 洞 穴，深 者 通 达 体 腔，病鳖 行 动 缓 慢，反 应 迟 钝，拒 食，头 不 能 缩 回 背 甲 内；解 剖 观 察，病 鳖 肝、胰、脾 肿 大，呈 化 脓 性 淤 血，颜 色 趋 紫 黑 色，口 腔、咽 部 淤 血 发 黑，肠 充 血，肺 呈 紫 黑 色，有 的 腹 腔 内 有 腹 水。食品伙伴网http:/ 1127-20096.2病理诊断6.2.1血细胞形态及生理指标 病 鳖 血 液 中 红 细 胞 总 数 减 少，低 于 4.5 X 1 0 5
7、 个 m m 3，且 形 态 不 规 则、破 碎 的、不 成 熟 的 红 细 胞 增多。白 细 胞 总 数 明 显 增 多，高 于 1.5 X 1 0 丬 个 m m 3，其 中 单 核 细 胞 明 显 增 加，占 白 细 胞 总 数 的 2 以 上；嗜 中 性 粒 细 胞 明 显 增 加，变 形 较 大，部 分 细 胞 内 特 殊 颗 粒 排 列 疏 松，有 的 颗 粒 散 落 一 边；部 分 淋 巴 细 胞个 体 增 大。6.2.2血液生化特性 病 鳖 的 血 液 中 谷 草 转 氨 酶、葡 萄 糖、钙 均 值 分 别 大 于 900 IU L一 ,5 m m olL一，,2.2 m m
8、olL；血 液氯、钠、尿 素 氮 均 值 分 别 小 于 80 m m ol L,110 m m ol L一，、2.8 m m ol L 6.2.3器官组织显微观察特性6.2.3.1肺 局 部 坏 死，肺 泡 壁 上 皮 细 胞 和 毛 细 血 管 内 皮 细 胞 肿 胀、变 性，胞 核 固 缩、碎 裂 乃 至 坏 死 解 体。肺 泡壁 毛 细 血 管 破 裂、出 血。肺 泡 隔 内 血 管 充 血，部 分 红 细 胞 核 消 失、解 体，仅 留 残 骸；并 有 血 浆 渗 出 和 嗜中 性 白 细 胞。肺 泡 内 有 许 多 组 织 渗 出 液、红 细 胞 及 嗜 中 性 白 细 胞。肺 组
9、 织 间 嗜 中 性 白 细 胞 大 量 浸 润，核碎 裂，坏 死 成 脓 细 胞，肺 组 织 呈 局 部 化 脓 灶。6.2.3.2肝脏 肝 内 黑 色 素 增 多，淤 血：肝 细 胞 混 浊 肿 胀；肝 血 管 充 血，血 浆 渗 出；进 而 细 胞 核 碎 裂，溶 解，胞 质 水样 变 性，并 有 嗜 中 性 自 细 胞 浸 润，白 细 胞 核 碎 裂，坏 死 成 脓 细 胞，形 成 化 脓 灶。6.2.3.3肾脏 肾 小 管 上 皮 细 胞 混 浊 肿 胀。随 着 病 情 的 发 展，肾 局 部 坏 死，肾 小 管 上 皮 细 胞 核 碎 裂、溶 解，管 腔 内有 嗜 伊 红 的 蛋
10、自 及 红 细 胞。有 大 量 红 细 胞 从 血 管 中 渗 出，嗜 中 性 白 细 胞 浸 润，坏 死，形 成 化 脓 灶。肾 小球 萎 缩，囊 腔 相 对 扩 大，并 有 嗜 伊 红 的 浆 液 渗 出 物。6.2.3.4脾脏 脾 包 膜 出 血，脾 小 叶 界 限 模 糊，红 髓 扩 大 并 聚 集 大 量 红 细 胞，白 髓 明 显 缩 小。6.2.3.5肠 肠 壁 充 血、出 血。肠 腔 内 大 量 嗜 中 性 白 细 胞 浸 润，核 固 缩、碎 裂，变 成 脓 细 胞。6.2.3.6心 心 肌 间 有 大 量 渗 出 液 和 红 细 胞；部 分 心 肌 纤 维 弯 曲、断 裂。6
11、.3病原学诊断6.3.1嗜水气单胞菌6.3.1.1分离培养 在 无 菌 状 态 下，取 病 鳖 的 肺、脾、肝、血 液 等 病 料 分 别 接 种 于 普 通 肉 汤 培 养 基 中（接 种 前 加 30 g/m L氨 苄 青 霉 素），置 28 C-30 C培 养 6 h-8 h，分 别 移 植 普 通 琼 脂 平 板，再 继 续 培 养 18 h-24 h，挑 选 纯化 单 独 大 菌 落 分 别 移 植 厌 氧 培 养 基、M 培 养 基、SS培 养 基、E M B 培 养 基、R S培 养 基、血 平 板 培 养 基，革 兰 氏 染 色，分 离 菌 保 存，按 Bergeys系 统 细
12、 菌 学 分 类 鉴 定 和 检 索 表 程 序 对 分 离 菌 株 进 行 鉴 定。6.3.1.2鉴定 菌 体 短 杆 状，直 形 略 有 弯，大 小（(0.6-0.9)林 mX(1.0-2.0)林 m，两 端 钝 圆，单 个 或 两 个 相 连，无 英 膜、无 芽 抱，极 生 单 鞭 毛，有 运 动 性。结 合 生 理 生 化 特 性 鉴 定 分 离 菌 为 嗜 水 气 单 胞 菌。6.3.1.3分离菌的人工感染 将 分 离 菌 株 用 无 菌 生 理 盐 水 稀 释 到 5X 10个 ml-5.5 X 10个 ml。之 后 取 巧 g-20 g的 健 康 幼 鳖 各1 0 只 进 行 腿
13、 部 肌 肉 注 射 和 腹 甲 划 痕 后 涂 抹，每 只 0.1 m l,1 h 后 分 别 置 于 不 同 的 水 族 箱 中，于（3 0 士 1)水 温 中 饲 养。对 照 组 注 射 或 涂 抹 相 同 剂 量 的 生 理 盐 水。6-7 d后 试 验 组 幼 鳖 出 现 于 自 然 病 历 相 同 的感 染 结 果。并 从 其 肝 脏、肾 脏、皮 肤 病 灶 分 离 出 与 接 种 菌 相 同 的 细 菌。而 观 察 期 内 对 照 鳖 无 异 常 表 现。因 此 嗜 水 气 单 胞 菌 是 穿 孔 病 的 致 病 菌。食品伙伴网http:/ 13汀1127-20096.3.2产碱
14、假单胞菌6.3.2.1分离培养 在 无 菌 状 态 下，取 病 鳖 的 肝、脾、肾 等 病 料 接 种 普 通 营 养 琼 脂 平 板 28 C 培 养 24 h，挑 取 单 个 菌 落 接种 普 通 营 养 琼 脂 斜 面 进 行 纯 培 养，28 培 养 24 h。取 纯 化 的 细 菌 接 种 于 肉 汤 培 养 基，28 培 养 24 h。观察 分 离 得 到 的 菌 落 形 态 并 进 行 革 兰 氏 染 色。按 B ergey s系 统 细 菌 学 分 类 鉴 定 和 检 索 表 程 序 对 分 离 菌 株进 行 鉴 定。6.3.2.2鉴定 革 兰 氏 阴 性 短 杆 菌，单 个
15、或 成 双 排 列，链 状 较 少，一 般 大 小 为（(0.4-0-6)卩 m X (1.0-1.5)阝 m o无 芽 胞，无 荚 膜，极 生 单 鞭 毛，有 运 动 力。结 合 生 理 生 化 特 性 分 离 菌 为 产 碱 假 单 胞 菌。6.3.2.3人工再感染 方 法 步 骤 及 感 染 结 果 同 6.3.1.3，因 此 产 碱 假 单 胞 菌 是 穿 孔 病 的 致 病 菌 之 一。7防治7.1预防7.1.1水质调控 养 殖 池 的 水 质 指 标 符 合 N Y 5051的 要 求，室 内 池 水 温 稳 定 在 28 士 2 C，养 殖 过 程 中 采 用 微 生 态 制剂
16、调 水：室 外 池 采 用 鱼 鳖 混 养、移 栽 水 草、接 种 有 益 微 生 物 等 措 施 调 控 水 质。7.1.2环境消毒 水 体、用 具、饵 料 台、晒 背 台 的 消 毒 按 照 S c 汀 1 0 1 0 进 行；温 室 采 用 甲 醛 喷 雾 或 紫 外 灯 光 照 射 灭 菌，紫 外 灯 设 置 密 度 40瓦 八 O m 2，每 天 照 射 15 m in-20 m in.7.1.3饲喂 每 日 投 喂 2-5次，定 点 投 喂 符 合 S C/T 1047,N Y 5072规 定 的 全 价 配 合 饲 料，以 30 m in内 吃 完 为 宜。7.1.4逐级培育，合理放养 根 据 N Y/T 5 0 6 7，适 时 分 级、分 池 饲 养，避 免 因 争 斗 产 生 外 伤。7.1.5病鳌隔离 发 现 患 鳖，隔 离 治 疗。7.1.6中草药预防7.1.6.1芪参免疫散 将芪参免疫散按每kg鳖lg-2g（以5投饵率计）制成药饵，投喂Id-2d，间隔15 d重复给药。7.1.6.2六味地黄散 将六味地黄散按每kg鳖0.1 g（以5投饵率计）制成药饵，连续投喂5
