1、中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验G B 4 7 8 9.1 4 一9 4蜡 样 芽 胞 杆 菌 检 验代替 G B 4 7 8 9.1 4-8 4Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f f o o d h y g i e n e Ex a mi n a t i o n o f B a c i l l u s c e r e u s1 主题内容与适用范围 本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。2 引用标准 G B 4 7 8 9.2
2、 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 G B 4 7 8 9.2 8 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂3 设备和材料3.1 温箱:3 6 士1 0C,3.2 普通冰箱。3.3 显微镜。3.4 恒温水浴4 6 士1 0C。3.5 天平。3.6 电炉。3.7 吸管:1 m L,1 0 m L a3.8 载玻片。3.9 均质器或乳钵。3.1 0 L型涂布棒。3.1 1 灭菌刀，剪，镊子。3.1 2 三角瓶:容量5 0 0 m L,4.1培养墓和试荆 肉 浸液肉汤培养基:G B 4 7 8 9.2 8 中4.1.:.;酪蛋白 琼脂培 养基;G B 4 7 8 9.2 8 中4.6 5.动力
3、一 硝酸盐 培养 基:G B 4 7 8 9.2 8 中4.7 2,缓冲 葡萄糖蛋白 陈水:G B 4 7 8 9.2 8 中3.4.血琼脂培养基:G B 4 7 8 9.2 8 中4.6.3%过氧化氢溶液。甲蔡胺一 乙酸溶液。月叹dl卜U7夕 .月乌Jq月叼.q中华人民共和国卫生郎1 9 9 4 一 0 3 一 1 8 批准1 9 9 4 一 0 9 一 0 1 实施G B 4 7 8 9.1 4 一 9 44.8 对氨基笨磺酸一 乙酸溶液。4.9 革兰氏染色液:G B 4 7 8 9.2 8 中2.2 04.1 0 甘露醇卵黄多粘菌素(MY P)琼脂培养基:G B 4 7 8 9.2 8
4、中4.6 4.4.1 1 o.5 3 0 碱性复红染色液:G B 4 7 8 9.2 8 中2.8,4.1 2 木糖一 明胶培养基;G B 4 7 8 9.2 8 中4.6 6.5 检验程序蜡样芽胞杆菌检验程序如下:6 操作步骏6.1 菌数测定 以无菌操作将检样2 5 g(m L)(按G B 4 7 8 9.2 测定)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成1 0-1-1 0-5 的稀释液。取各稀释液0.1 m L，接种在两个选择性培养基 甘露醇卵黄多粘菌素(MY P)琼脂培养基上，用I形棒涂布于整个表面，置3 6 士1 0C 温箱培养1 2 2 0 h 后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌
5、在此培养基上的菌落为粉红色(表示不发酵甘露醇)，周围有粉红色的晕(表示产生卵磷脂酶)。计算后，从中挑取5 个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克(或毫升)样品中所含蜡样芽胞杆菌数，例如M Y P平板的可疑菌落为2 5 个，取 5 个鉴定，证实为4 个，乘上稀释倍数(如1 0 )，再乘上1 g(或m L)检样数(取的是。.1 mL 样)则为:2 5 X4/5 X1 0 4 X1 0 三2X 1 0 66.2 分离培养 取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基(M Y P)上，置3 7 培养1 2 2 0 h，挑取可疑的蜡样芽 胞杆菌
6、菌落(见6.1)接种于肉 汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。6.3 证实试验G B 4 7 8 9.1 4 一 P6.3.1 形态观察 本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1 1 e m或1(a m以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。6.3.2 培养特性 本菌在肉 汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振播易乳化;在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。6.3.3 生化性状及生化分型6.3.3.1 生化性状 本菌有动力;能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶，过氧化氢酶试验阳性，溶血;不发酵甘露醇和木糖;常能液化明胶和使硝酸盐还原;在厌氧条件下能发酵葡萄糖
7、。6.3-3.2 生化分型 蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别，见表 1,表 1 蜡样芽胞杆菌生化分型型别生化试验柠檬酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解V-P反应明胶液化1234567891 01 11 21 31 41 5+6.3.4 与类似菌鉴别 本菌与其他类似菌的鉴别见表2,表 2 蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别项目巨 大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌_ _一草状芽胞杆苗炭疽芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌过氧化氢醉 动力硝酸盐还原+士+士+士十+斗G B 4 7 8 9.1 4 一 9 4续表 艺项目巨大芽胞杆菌蜡样芽胞 杆菌 苏云 金芽
8、胞杆菌革状芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌干十士+士十+十 酪蛋白分解 卵黄反应葡萄精利用(厌氧)甘露醉 木糖 溶血+十已知致病菌恃性产生肠毒素对昆虫致病的内毒素结晶假根样生长f 对动物和人致病 注+s 0%-1 0 0%的菌株阳 性;-s 0 写-1 0 0%的菌株阴 性，士 大多数菌株阳性;平 大多数菌株阴 性 本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白 质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下:取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自 然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加。5%碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气维持1.5 m i n，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自 来水充分漂洗，晾干，镜检，在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体(如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存1-2 d 后再检查)，如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人白竟玉。本标准由 卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
