1、河南预防医学杂志2023 年 2 月第 34 卷第 2 期Henan J Prev Med，Feb.2023，Vol.34,No.22020-2021 年河南省市级疟疾诊断实验室检测能力评估李素华，纪鹏慧，贺志权，周瑞敏，王丹，钱丹，杨成运，刘颖，王昊，张红卫河南省疾病预防控制中心，河南省传染病病原学重点实验室，河南省寄生虫病原与媒介医学重点实验室，河南 郑州450016摘要：目的对市级疟疾诊断实验室送交的样本进行复核，评价市级疟疾检测能力。方法对 2020-2021 年收到的疟疾血涂片和抗凝全血样本进行复核，依据血涂片制作、染色、清洁度等指标对血涂片进行逐张评分，评价和比较各送样单位血涂片质
2、量，计算血片制作染色合格率。采用镜检和荧光 PCR 对样本进行复核，分析和比较送样单位疟疾阳性符合率和虫种符合率情况。结果2020-2021 年各市级疟疾诊断实验室送交的 134 份血涂片、137 份抗凝全血样本（存在一例病例多家单位送样），河南省疟疾诊断参比实验室复核确认疟疾病例 118 份，其中间日疟原虫 11 份，恶性疟原虫48 份，三日疟原虫 9 份，卵型疟原虫 45 份，混合感染 5 份，阴性 19 份。市级疟疾诊断实验室平均阳性符合率 86.13%（118/137），虫种符合率 83.89%(99/118)。134 张血涂片制作、染色、清洁度及综合判定的合格率分别为 98.50%（
3、132/134），70.14%（94/134），69.40%（93/134）和 97.01%（130/134）。市级疟疾诊断实验室血涂片镜检阳性符合率 86.56%（116/134），虫种符合率 84.48%（98/116），间日疟原虫，恶性疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、混合感染的误判率分别为18.18%（2/11），4.17%（2/48），22.22%（10/45），22.22%（2/9），80.00%（4/5）。结论应持续提高血涂片染色质量，通过推进市级疟疾诊断实验室网络建设，提高疟疾检测准确率，巩固河南省消除疟疾成果。关键词：疟疾；检测能力；镜检；荧光 PCR；河南省中图分类号：R53
4、1.3文献标识码：A文章编号：1006-8414(2023)02-0095-05Analysis of malaria detection capacity of Henan province in 2020-2021LI Suhua,JI Penghui,HE Zhiquan,ZHOU Ruimin,WANG Dan,QIAN Dan,YANG Chengyun,LIU Ying,WANG Hao,ZHANG HongweiHenan Center for Disease Control and Prevention,Henan Provincial Key Laboratory for I
5、nfectious Disease Prevention andControl,Henan Provincial Medical Key Laboratory of Parasitic Pathogen and Vector,Zhengzhou 450016,ChinaCorresponding author:ZHANG Hongwei,E-mail:Abstract:Objective To re-examine the malaria blood smear and whole anticoagulant blood submitted by the city-level malarial
6、aboratory in Henan province,and to evaluate the testing ability of malaria at the municipality level.Methods Malaria bloodsmears and anticoagulant whole blood samples from 2020 to 2021 were re-examined by Henan Provincial Malaria DiagnosticReference Laboratory.The blood smears were scored one by one
7、 according to the smear production,staining,and cleanliness.The quality and the qualified rate of blood smears of each sending unit was evaluated and compared.The samples were checkedby microscopy and fluorescent PCR,and the positive and species coincidence rates of malaria samples were analyzed.Res
8、ultsFrom 2020 to 2021,Henan Provincial Malaria Diagnostic Reference Laboratory received 134 blood smears and 137anticoagulant whole blood(including one case senting by multiple units)from the municipal Centers for Disease Control andPrevention.The Provincial reference laboratory confirmed 118 cases
9、including 11 plasmodium vivax,48 plasmodium falciparum,9 plasmodium malariae,45 plasmodium ovale,5 cases of mixed infection,and 19 negative cases.The average positivecoincidence rate of municipal malaria diagnostic laboratory was 86.13%(118/137)and the species coincidence rate was 83.89%基金项目：2019 年度
10、河南省医学科技攻关计划联合共建项目（LHGJ20190706）；2021 年度河南省医学科技攻关计划联合共建项目（LHGJ20210134）；2022 年河南省医学科技攻关计划联合共建项目（LHGJ20220157）作者简介：李素华，硕士，主管技师，主要从事寄生虫病防治和研究工作通信作者：张红卫，E-mail：DOI:10.13515/ki.hnjpm.1006-8414.2023.02.004 论著 95 河南预防医学杂志2023 年 2 月第 34 卷第 2 期Henan J Prev Med，Feb.2023，Vol.34,No.2(99/118).The qualified rates
11、 of the 134 blood smears for making,staining,cleanliness and comprehensive judgment were98.50%(132/134),70.14%(94/134),69.40%(93/134)and 97.01%(130/134),respectively.The positive coincidence rate ofblood smears in municipal malaria diagnostic laboratory was 85.56%(116/134),the species coincidence ra
12、te was 84.48%(98/116),the misjudgment rate of P.vivax,P.falciparum,P.ovale,P.malariae and mixed infection was 18.18%(2/11),4.17%(2/48),22.22%(10/45),22.22%(2/9),80.00%(4/5),respectively.Conclusion The quality of blood smear staining should becontinuously improved,and the accuracy of malaria detectio
13、n should be improved by promoting the construction of the municipalmalaria diagnostic laboratory network to consolidate the results of malaria elimination in Henan province.Keywords:Malaria;Detectability;Microscopy;Fluorescent PCR;Henan province疟疾是全球最严重的公共卫生问题之一。据2021 年世界疟疾报告显示，2020 年全球估计有 2.41亿疟疾病例
14、和 62.7 万人死于疟疾。与 2019 年相比，2020 年的病例和死亡人数分别多 1 400 万和 6.9 万，约有 2/3（4.7 万例）死亡人数与新冠病毒大流行期间疟疾预防、诊断和治疗服务中断有关。为及时发现疟疾病例、正确用药治疗、及时进行疫情处置等工作，需要对疟疾病例进行快速而准确的诊断。河南省曾是全国疟疾严重流行区之一，经过多年综合防治，于 2012 年实现无本地感染病例，2018 年通过了消除疟疾终审评估工作。随着河南省近年来对外交流的日益频繁，前往非洲、东南亚等疟疾流行区旅游、经商和务工人员数量逐渐增加，输入性疟疾病例数不断上升1-2。在巩固疟疾防治成效，防止输入性病例引发本地
15、继发感染中，疟疾实验室诊断能力在病例的早发现中起到关键作用。本研究对 2020-2021 年河南省报告疟疾样本的收集和报送、血涂片制作和染色质量及诊断结果等方面进行评价，分析比较市级人员疟疾检测能力。1材料与方法1.1资料和样本来源收集 2020-2021 年中国疾病预防控制信息系统中河南省网报疟疾病例资料，河南省各省辖市及直管县送交至河南省疟疾诊断参比实验室的厚薄血涂片和抗凝全血样本。1.2检测方法1.2.1显微镜镜检油镜（10100 倍）镜检复核Giemsa 染色的厚薄血膜血涂片，观察血膜上疟原虫及其寄生红细胞形态鉴定阴、阳性和虫种3。参照卫生部 疟疾的诊断（WS 259-2015）附录
16、B 病原学检查规范要求，由河南省疟疾诊断参比实验室持 WHO 镜检水平一级证书的检验人员和省级镜检专家同时于光学显微镜下观察鉴定疟原虫虫种类型，若两者结果不一致，由第三名持 WHO 镜检水平一级证书的检验人员确定。1.2.2荧光 PCR 检测采用上海之江生物工程股份有限公司的疟原虫核酸检测试剂盒进行核酸检测，反应体系如下：核酸荧光 PCR 检测混合液 35 L，内部对照品 1 L，Taq 酶 0.4 L，DNA 模板 4 L。参照试剂盒说明书读取并记录检测结果。1.3复核确认各省辖市及直管县报送病例的阳性符合率和虫种符合率的评价以省级疟疾诊断参比实验室检测结果为标准。镜检和荧光 PCR 检测有一种阳性即为疟疾阳性3。如有虫种检测结果不一致的，以核酸检测结果为准。阳性符合率=省级复核确诊阳性数/省级复核病例数100%；虫种符合率=省级复核虫种一致数/省级复核确诊阳性病例数100%；误判率=虫种判定正确数/省级复核确诊阳性病例数100%。1.4血涂片制作染色质量评价根据消除疟疾技术方案（2011 年版），将血涂片制作、染色、清洁度作为评定标准。综合评判：血涂片制作、染色、清洁度等3 项总分
