1、GB/T19567.1-20044.2.5.2上样取上述标样溶解液上层清液,于聚丙烯酰胺凝胶的上样孔中分别上样6、8、10、12、14L(毒素蛋白含量约为3g7g),作为标准曲线:再取一定体积的试样溶液上层清液(毒素蛋白含量约为5g),加入到上样孔中,注入电极缓冲液后,接通电源。4.2.5.3电泳电泳初期电压控制在100V左右,待试样进入分离胶后,加大电压到170V,继续电泳,当指示剂前沿到达距底端1cm左右时停止电泳,取出胶板,在7.5%(体积分数)乙酸中浸泡30mi。4.2.5.4染色将分离胶部分取下,用考马斯亮蓝(CBB)R-250染色液染色过夜。4.2.5.5脱色倒去染色液,先用漂洗液
2、洗涤凝胶,然后加入脱色液,37保温脱色,更换几次脱色液,至背景清晰为止。4.2.6测定胶板经脱色后,可清晰地看到分子量为130kDa蛋白区带,用凝胶成像系统对凝胶进行分析。样品中毒素蛋白的百分含量(X)按式(1)进行计算。X-mX10o%4(1)式中:一由标准蛋白回归曲线计算得到的蛋白量:c一样品的浓度:V一样品的加样体积;一样品的稀释倍数。4.2.7允许差取其算术平均值为测定结果。两次平行测定结果相对偏差小于等于5%。4.3毒力效价的测定按附录B(规范性附录)进行。4.4pH值的测定按GB/T1601测定4.5细度的测定按GB/T16150一1995中2.2进行测定,4.6水分的测定按GB/T1600一2001中“共沸蒸馏法”进行测定。5检验规则需符合GB/T1604有关规定。极限值按GB/T1250处理。6标志、标签、包装、贮运6.1产品包装应符合GB3796规定,同时注明所用标准编号及检测所用试虫。6.2原粉主要采用塑料袋包装,密封。6.3心存时严防日晒,勿受压,置于阴凉干燥处。6.4运输时,注意轻放,防止损坏。6.5保证期:在正常贮运条件下,原粉质量保证期从生产日期算起为两年,产品出厂时毒力效价和毒素蛋白的含量不低于3.2指标,两年内产品毒力效价和毒素蛋白的含量不低于3.2指标的70%。