1、ICS65.120B46B中华人民共和国国家标准GB/T26442-2010饲料添加剂亚硫酸氢烟酰胺甲萘醌Feed additive-Menadione nicotinamide bisulfite2011-01-14发布2011-07-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T26442-2010100.0g/mL,200.0g/mL的标准工作液。临用现配。4.1,17烟酰胺标准溶液的配制：a)标准储备液：准确称取100.0mg烟酰胺标准品(4.1.11)于100mL容量瓶中，用水溶解并定容，此储备液浓度为1000g/L。置于28冰箱中保存，有效期3个
2、月。b)标准工作液：取适量标准储备液，用水稀释成浓度分别为5.0g/mL、20.0g/mL、50.0g/mL、100.0g/mL、200.0g/mL的标准工作液。有效期1个月。4.1.18邻菲罗啉指示液：称取硫酸亚铁(4.1.3)0.5g,加水100mL溶解，加硫酸(4.1.6)2滴和邻菲罗啉(4.1.4)0.5g,摇匀。本品需临用现配。4.2仪器和设备4.2.1高效液相色谱仪（配紫外检测器或二极管阵列检测器）。4.2.2成压干燥器。4.2.3熔点测定仪。4.2.4薄层板(GF254)。4.2.5254紫外灯。4.3鉴别4.3.1甲萘醌的鉴别：取试样约0.1g,加水25mL,溶解后，滴加氢氧化
3、纳溶液(4.1.12)即生成甲萘醌的黄色沉淀。4.3.2烟酰胺的鉴别：取试样适量（相当于烟酰胺0.05g),溶于15mL水中，置于分液漏斗中，加30mL三氯甲烷(4.1.7)和5mL碳酸钠溶液(4.1.13)，振摇萃取，静置，取上层水相作为样品溶液。同时称取0.05g烟酰胺标准品，溶于20L水作为标准品溶液。以薄层板(GF254)为固定相，以100份甲醇(4.1.9)和1.5份氨水溶液(4.1.14)为展开剂展开，取出晾干后在254紫外灯下观察，样品点和标准品溶液点的比移值(RF)应相同。4.3.3熔点的测定：按中华人民共和国兽药典2005年版一部附录45熔点测定法第一法测定，熔点为175180。4.4含量测定4.4.1原理试样在水溶液中分解为亚硫酸甲萘醌和烟酰胶，经反相色谱分高，用紫外检测器检测，外标法计算含量。4.4.2试样溶液的制备称取试样0.5g(精确至0.0001g),置于100mL容量瓶中，加水70mL,超声提取5min,用水定容，摇匀。精密吸取1mL于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，过0.45m微孔滤膜，供高效液相色谱仪分析。4.4.3测定4.4.3.1色谱条件色谱柱：C1柱，长250mm,内径4.6mm,粒径5um,或相当者。杜温：30。
