1、 ICS 65.020 B 15 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 31992020 螟黄赤眼蜂工厂化生产技术规程 Technical specification for industrialized production of Trichogramma chilonis Ishii -11-23 发布 2020-12-30 实施吉林省市场监督管理厅 发 布 DB22/T 31992020 I 目 次 前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语及定义.14 工厂化生产流程.25 生产前准备.26 工厂化生产.57 质量控制.68 记录档案.9附录 A（资料性附录）螟黄赤眼蜂形
2、态学鉴定方法.10 DB22/T 31992020 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林农业大学、吉林省农业科学院、吉林省蚕业科学研究院。本文件主要起草人：杜文梅、张俊杰、阮长春、周淑香、朱兴友、毛刚。DB22/T 31992020 1 螟黄赤眼蜂工厂化生产技术规程 1 范围 本文件规定了螟黄赤眼蜂产前准备、工厂化生产技术要求、质量控制、记录档案。本文件适用于柞蚕卵繁育螟黄赤眼蜂的工厂化生产和质量控制。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引
3、用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 1166-2006 生物防治用赤眼蜂 DB22/T 1025-2018 柞蚕良种繁育技术规程 3 术语及定义 NY/T 1166-2006 界定的以及下列术语和定义适于本文件，为了便于使用以下重复列出了 NY/T 1166-2006 中的一些术语和定义。3.1 单卵蜂数 number of host eggs parasitized 每粒柞蚕卵内所寄生的螟黄赤眼蜂个体数。3.2 寄生率 parasitism proportion 被寄生
4、的柞蚕卵数占供检测卵数的百分比。3.3 羽化破壳率 rate of eggs with emergency holes 指有羽化孔的中间寄主卵占总寄生卵的比例。NY/T 1166-2006，术语及定义 2.16 3.4 遗留蜂率 proportion of unemerged parasitoids 滞留在柞蚕卵内成蜂数占总成蜂数的百分比。3.5 畸形蜂率 deformed adults proportion 指体形异常的成蜂数（如大肚子蜂、无翅蜂等成蜂）所占总蜂数的比例。NY/T 1166-2006，术语及定义 2.24 3.6 雌蜂百分比 female proportion 单粒寄生卵中羽
5、化的赤眼蜂雌性成蜂数占总成蜂数的百分比。DB22/T 31992020 2 3.7 D 值 D value 赤眼蜂腹中突基部至阳基侧瓣末端的距离。3.8 诱导滞育 diapause induction 利用某种特定条件（如持续低温、短光照或全黑暗）诱导螟黄赤眼蜂稳定进入滞育状态的一个过程。3.9 接蜂 inoculation 将蜂种接引到中间寄主卵上的生产环节。NY/T 1166-2006，术语及定义 2.4 4 工厂化生产流程 图1 螟黄赤眼蜂工厂化生产流程图 5 生产前准备 5.1 生产计划制定 每年的 11 月份 12 月份，根据市场需求制定生产计划，并根据虫情预测预报信息和实际情况，及
6、时调整，主要内容包括：a)所需厂房、设备；b)蜂种、蚕茧等生产资料；c)用工数量和时间；d)组织生产及应急保障措施。5.2 厂房及设备物质 5.2.1 厂房 应包括：a)蜂种繁育室；DB22/T 31992020 3 b)暖茧车间；c)剖腹取卵室；d)洗卵室；e)消毒室；f)暗室；g)发育室；h)保鲜冷藏库；i)物品保存库。5.2.2 设备 主要包括：a)低温生化培养箱；b)绞卵机；c)搅拌器；d)脱水机；e)烘干机；f)柞蚕卵色选机；g)包装机；h)空调；i)排风机；j)电暖气；k)加湿器；l)温湿度自控仪；m)电脑几打印机；n)发育盘架；o)手推运输车。5.2.3 常用药品及材料 主要包括
7、：a)25 g/L 30 g/L 苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）；b)孔径尺寸 0.150 毫米的纱网；c)孔径尺寸 2 毫米的纱网。5.3 蜂种 5.3.1 采集 在靶标害虫产卵季节，于不同地理环境广泛采集被赤眼蜂寄生的靶标害虫卵，并按不同地理位置进行标记，经室内培养，筛选出寄生率高、适应性强的蜂种。5.3.2 鉴定 根据雄性赤眼蜂外生殖器的形态特征进行鉴定，按附录 A 执行。5.3.3 纯化 DB22/T 31992020 4 对采自不同靶标害虫卵内的赤眼蜂进行如下筛选纯化：a)在试管（10 毫米70 毫米左右大小）中投放米蛾卵（100 粒为宜），再单头引入雌蜂，用棉球或纱布封口后置于发育
8、室；b)发育条件：光照 16 小时，（251）、RH（755）%；黑暗 8 小时，（20 1）、RH（755）%；c)羽化出蜂后按附录 B 逐管鉴定；d)将确定为螟黄赤眼蜂的单管合并，继续繁殖。5.3.4 保存 鉴定纯化的蜂种，经数代筛选繁殖，建立起一定数量的种群后保存使用：a)将发育到幼虫中期的蜂种，置入 12、RH（755）%的条件下，诱导滞育 30 天；b)置入（31）、RH（755）%的条件下，进行解除滞育 60 天 90 天；c)经 10 24 小时、15 24 小时 过渡后，按 4.3.3 b）变温发育至出蜂。5.4 柞蚕茧 5.4.1 备茧 应包括：a)备茧时期：在生产前一年的
9、11 月 12 月份开始按预定计划备茧：b)茧质要求：1)健康雌茧率 90%；2)雄茧率 7%；3)死伤茧率 3%；4)割口茧率 8%；5)发育蛹和嫩蛹 5%；6)茧层率 10%，无薄皮茧、瘪茧；7)茧不潮、未接触-3 以下低温。c)备茧数量：按每繁 70 万头螟黄赤眼蜂用茧 1 kg 计算。5.4.2 蚕茧保存 保存温度(31)、RH（605）%；适当通风换气，保持空气含氧量；防鼠害防农药，避免发热焐包，储存时间不低于 45 天。6 工厂化生产 6.1 灭菌消毒 在生产前一周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法参照 DB 22/T 1025-2018 中 8.3.3.1 执行。
10、6.2 蜂种复壮 根据生产计划，定期对螟黄赤眼蜂蜂种，以米蛾卵和柞蚕卵交替繁育复壮：a)接蜂比例：米蛾卵蜂卵比 1：80，柞蚕卵蜂卵比 2:1；b)接蜂时间：24 小时 48 小时；DB22/T 31992020 5 c)发育条件：同 4.3.3 b）；d)复壮周期：33 天 38 天。6.3 蜂种扩繁 以柞蚕卵为寄主，将蜂种扩繁 3 代 4 代：a)接蜂比例：1：25（蜂种寄生柞蚕卵：新鲜卵）；b)接蜂时间：24 小时；c)接蜂条件：全黑暗，（251）、RH（755）%；d)发育条件：同 4.3.3 b）；e)将末一代蜂种发育至幼虫中后期置于（31）、RH（755）%条件下冷藏，冷藏时间不超
11、过 10 天。6.4 寄主卵 6.4.1 暖茧发蛾 暖茧室保持18 22，RH（705）%，20 天 25 天逐渐羽化出蛾。6.4.2 收蛾 在柞蚕蛾羽化期内，每天下午开始将羽化的雄蛾挑检干净，次日清晨人工收雌蛾，用于当天繁蜂或储存在（31）的冷库中备用。6.4.3 剖腹取卵 用人工方法将柞蚕雌蛾腹部与头胸部分离，然后用特制的绞卵机将腹部破碎或人工挤出卵巢。6.4.4 洗卵 用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，漂净杂物，然后反复用清水冲洗。6.4.5 卵面消毒 将清洗干净的新鲜卵用 0.1%的苯扎溴铵溶液浸泡 5 分钟。6.4.6 脱水晾卵 消毒后的新鲜卵用布袋装好，用脱水机进行初步脱水，然后用
12、烘干机烘干，温度不超过 28。6.4.7 清除绿卵 烘干的新鲜卵用色选机清除绿卵后，再用于接蜂，绿卵率不高于 4%。6.5 商品代接蜂 蜂种与新鲜柞蚕卵按 1:15 1:20 比例进行接蜂。当蜂种羽化 25%30%时，将种蜂卵均匀撒在接蜂盘中，铺上孔径尺寸 2 毫米的纱网，再将新鲜卵定量平铺到纱网上，送入（251）、RH（755）%的暗室内产卵寄生，48 小时后，逐盘去除蜂种，标明日期送入发育室发育。6.6 培养发育 DB22/T 31992020 6 接蜂后的寄生卵分批次送入自然光照的变温发育室，按 4.3.3 b）培养 24 小时 48 小时，至幼虫中后期。6.7 寄生卵冷藏 将发育至幼虫
13、后期的螟黄赤眼蜂寄生卵，平铺到卵盘中置于冷库内货架上冷藏：a)铺卵厚度 3 cm 4 cm；b)冷库温度（31）、RH（755）%，全黑暗；c)冷藏时间控制在 30 天以内。6.8 寄生卵第 1 次加温 根据害虫发生时间将螟黄赤眼蜂从冷库取出，采用分步渐变加温的方式促进发育：a)在（151）、RH（755）%全暗条件下加温 24 小时；b)自然光照条件下，按 4.3.3 b）变温发育至预蛹期；c)加温 11 天 12 天可羽化出蜂。6.9 寄生卵精选 对发育至预蛹期的赤眼蜂寄生卵，用柞蚕卵色选机去除未寄生卵、劣质卵、绿卵及其他杂质。6.10 寄生卵第 2 次加温 将精选后的寄生卵，置于发育室按
14、 4.3.3 b）变温发育至蛹后期，再按 5.7 的方法冷藏，冷藏时间不超过 5 天。7 质量控制 7.1 抽样及处理调查 7.1.1 样本 A 从每批精选后的柞蚕寄生卵中多点随机抽取样卵混匀，再按十字交叉法随机抽取 1000 粒标记为样本 A。7.1.2 样本 B 在 A 样本中随机抽取 3 个 100 粒，分别装入试管中标记为 B1、B2、B3；将 B 样本发育至预蛹期后检查绿卵率、寄生率。7.1.3 样本 C 在 A 样本中随机抽取 30 粒，装入试管中，发育至预蛹期后，随机抽取 10 粒寄生卵，分别标记为 C1、C2、C10 样本；利用解剖镜检查每个样本的单卵蜂数。7.1.4 样本 D
15、 在 A 样本中随机抽取 3 个 100 粒，分别装入试管中标记为 D1、D2、D3 样本；将 D 样本加温保湿使其羽化，检查羽化破壳率。7.1.5 样本 E DB22/T 31992020 7 在 A 样本中抽取 20 粒寄生卵分装 20 个试管内，标记为 E1、E2E20 样本；将 E 样本加温保湿使其羽化，调查畸形蜂数、遗留蜂数、雌雄蜂数。7.2 检测 7.2.1 绿卵率 分别检测 B1、B2、B3 样本的绿卵数后按公式（A.1）计算，取 3 个样本的平均值为绿卵率（%）。x100%LX.(A.1)式中：L绿卵率（%）；X检测卵数（100 粒）；x绿卵数（粒）；7.2.2 寄生率 分别检
16、测 B1、B2、B3 样本的寄生数后按照公式（A.2）计算，取 3 个样本的平均值为寄生率（%）。%100NnP.(A.2)式中：P寄生率(%)；N检测卵数（检查完绿卵率后剩余的 B1、B2、B3 样本的卵数）（粒）；n寄生卵数(粒)；7.2.3 单卵蜂数 分别检测 C1、C2C10 样本的单卵蜂数后按公式（A.3）计算，取 10 个样本的平均值为单卵蜂数（头）。10).(1021CCCD.(A.3)式中：D单卵蜂数（头）；C单卵蜂数（检查 C1、C2C10 样本的单卵蜂数）（头）。7.2.4 羽化破壳率 分别检测 D1、D2、D3 样本的卵粒羽化孔数后按公式（A.4）计算，取 3 个样本的平均值为羽化破壳率（%）。%100REEY.(A.4)式中：Y羽化破壳率（%）；E有羽化孔的卵数（粒）；R未羽化卵数（粒）。7.2.5 遗留蜂率 DB22/T 31992020 8 分别检测 E1、E2E20 样本，按公式（A.5）计算，取 20 个样本的平均值为遗留蜂率（%）。%100DMMF.(A.5)式中：F遗留蜂率（%）；M卵内滞留蜂数（头）；D羽化出壳蜂数（头）。7.2.6 雌蜂百分比 分
