1、ICS 65.020.20ICS 65.020.20CCS B 15DB23黑龙江省地方标准DB 23/T 29792021大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性鉴定技术规程2021-09-08 发布2021-10-07 实施黑龙江省市场监督管理局发 布DB23/T 29792021I前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由黑龙江省农业农村厅提出。本文件由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：中国科学院东北地理与农业生态研究所。本文件主要起草人：
2、许艳丽、陆欣春、韩晓增、潘凤娟、邹文秀、李雪光、战丽莉、严君、陈旭。DB23/T 297920211大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性鉴定技术规程1范围本文件规定了大豆对由大豆拟茎点种腐病菌（Phomopsis longicolla Hobbs）引起的种腐病抗病性鉴定术语和定义、病原菌接种体制备、大豆种子要求、大豆种子抗病性鉴定和大豆植株抗病性鉴定。本文件适用于大豆对大豆拟茎点种腐病抗病性的鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
3、GB 4404.2粮食作物种子第 2 部分：豆类SN/T 4865大豆拟茎点种腐病菌检疫鉴定方法3术语和定义菌丝覆盖率是指在大豆种子抗病性鉴定中，大豆拟茎点种腐病菌接种的种子中，菌丝全部覆盖的种子数占供试种子总数的百分率。4病原菌接种体制备4.1培养基准备病原菌菌株纯化及分离所用培养基为酸性PDA培养基(APDA)，配方为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂条20g，待PDA培养基冷却到4550时，用过滤除菌的 85%乳酸调节pH至 4.5 后到平板。4.2病原菌接种体制备挑取少量活化的大豆拟茎点种腐病菌菌丝到APDA上，252812h光照12h黑暗交替培养，直到长出典型菌落，并符合SN/T 4
4、865的规定。5大豆种子要求所用品种种子的质量要求按GB 4404.2的规定执行。6大豆种子抗病性鉴定DB23/T 2979202126.1鉴定方法和公式将病原菌接种于APDA培养基平板上，25暗培养5d后，选取健康大豆种子，经75%酒精消毒3min，用无菌水冲洗3遍，放置于灭菌的滤纸上稍风干，匀距摆放在菌落边缘，以APDA培养基上不接种病原菌的大豆种子为对照，继续25暗培养5d。每皿10粒，重复3次。接种后第4d和第5d分别调查发芽种子数，第5d调查被菌丝覆盖的大豆种子数，计算种子发芽势、发芽率和菌丝覆盖率。计算公式：种子菌丝覆盖率(%)=(被菌丝覆盖种子数/鉴定种子总数)100发芽势(%)
5、=发芽初期(第4d)正常发芽种子数/鉴定种子总数100种子发芽率（%）=发芽终期（第5d）全部正常发芽总数鉴定试种子总数1006.2抗病评价标准抗病标准以种子菌丝覆盖率、种子发芽势和发芽率降低率综合评定，即如果种子菌丝覆盖率高于80.0%时，以种子菌丝覆盖率为主要评价指标，如种子菌丝覆盖率低于 80.0%时，以种子发芽势和发芽率降低为主要指标。标准如下：种子菌丝覆盖率，种子发芽势和发芽率降低低于 40.0%：抗病品种；40.0%59.9%：中抗品种；60.0%79.9%：中感品种；80.0%99.90%：感病品种；100.0%：高感品种。记录见附录表 A。7大豆植株抗病性鉴定7.1植株准备采用
6、苗期切顶端接种法。在温室花盆中播种大豆，待大豆植株的第一片三出复叶展平时，在茎节点下面的横切面上将茎秆剪断，下部植株用于接种。7.2鉴定方法将病原菌在APDA培养基平板上25暗培养10d，在菌落边缘用打孔器打取直径为5mm的菌丝块贴于刚剪断的植株茎秆横切面上，用封口膜包住接种体和植株茎秆横切面，套塑料袋保湿48h，接种30株；以直径5mm的APDA培养基块贴于大豆植株茎秆横切面作对照。7.3 抗病性评价标准接种后2d取下接种体，接种后 7d测量大豆植株茎病斑长度，并计算茎病斑长度占植株茎长度的百分率。茎病斑长比率（%）=（茎病斑长度植株茎长度）100茎病斑长度占植株茎长度的百分率：低于 4.0
7、%：抗病品种；4.0%5.9%：中抗品种；DB23/T 2979202136.0%7.9%：中感品种；8.0%9.9%：感病品种；10.0%以上：高感品种。记录见附录表B。7.4 调查记录详细记载调查方法和鉴定过程，并记录存档。DB23/T 297920214附附录录A A（资料性）（资料性）大豆大豆拟茎点种腐病种子拟茎点种腐病种子抗抗病性鉴定记载病性鉴定记载、评价表评价表表表A.1A.1 大豆拟茎点种腐病种子大豆拟茎点种腐病种子抗抗病性鉴定种子病性鉴定种子菌丝覆盖率菌丝覆盖率调查表调查表接种日期：鉴定地点：调查日期：调查人：记录人：单位：鉴定编号重复鉴定种子数被菌丝覆盖种子数种子菌丝覆盖率（
8、%）IIIIIIIIIIIIIIIIII表表A.2A.2大豆拟茎点种腐病种子大豆拟茎点种腐病种子抗抗病性鉴定种子发芽势和种子发芽率调查表病性鉴定种子发芽势和种子发芽率调查表接种日期：鉴定地点：调查日期：调查人：记录人：单位：鉴定编号重复鉴定种子数种子发芽数种子发芽势（%）种子发芽率（%）接种第4d接种第5dIIIIIIIIIIIIIIIIIIDB23/T 297920215表表A.3A.3大豆拟茎点种腐病种子大豆拟茎点种腐病种子抗抗病性鉴定病性鉴定评价评价表表接种日期：鉴定地点：调查日期：调查人：记录人：单位：鉴定编号鉴定品种种子菌丝覆盖率（%）IIIIII平均降低种子发芽势（%）IIIIII
9、平均降低种子发芽率（%）IIIIII平均降低抗病性级别抗病性评价DB23/T 297920216附附录录B B（资料性）（资料性）大豆大豆拟茎点种腐病植株拟茎点种腐病植株抗抗病性鉴定记载病性鉴定记载、评价表评价表表表 B.1B.1 大豆拟茎点种腐病植株大豆拟茎点种腐病植株抗抗病性鉴定病性鉴定茎病斑长度茎病斑长度调查表调查表播种日期：接种日期：调查日期：调查人：记录人：鉴定地点：鉴定编号重复茎病斑长度（mm）植株茎长度（mm）茎病斑长占植株茎长百分比（%）IIIIIIIIIIIIIIIIII表表B.2B.2大豆拟茎点种腐病植株大豆拟茎点种腐病植株抗抗病性鉴定病性鉴定评价评价表表鉴定编号鉴定品种茎病斑长占植株茎长比率（%）抗病性级别抗病性评价IIIIII平均_
