1、ICs65.020.30B41SH中华人民共和国水产行业标准SC/T7238-2020对虾偷死野田村病毒(CMNV)检测方法Detection methods for covert mortality nodavirus(CMNV)2020-08-26发布2021-01-01实施中华人民共和国农业农村部发布SC/T7238-2020对虾偷死野田村病毒(CMNV)检测方法1范围本标准给出了对虾偷死野田村病毒(CMNV)逆转录套式PCR检测、逆转录环介导等温扩增检测、TagMan荧光定量RT-PCR检测所需的试剂和材料、器材和设备，规定了操作步骤和结果判定的要求。本标准适用于CMNV的检测和监测2
2、规范性引用文件SC/T7103水物术规范3缩略语下列缩略语适用Bst DNA合0热启动A聚合(B2.0 WarmStart DNCMNV:偷死野田村病coveriortality nodadNTP:脱(deoxyribonueleoside triphosphateMMLV酶：M逆转录酶reyerse transcriptase M MLV RNasenested RT POR逆套式PCR(nested reverse transcription PCR)EARCgRT-PCRquantitative real-time reverse transcriptionRT-LAMP.专录温指(re
3、verse transeripon loop mediated ischermal amplification)Q4试剂和材料m4.1 RNase-free:化成其他等效的无RNA酶水4.2 RNAiso Plus试保存，或其他等效的RN队提取试剂4.3RNA酶抑制剂(RRse Inh hitor 40):商品化试剂保存，或其他等效试剂。4.4三氯甲烷：分析纯4.5异丙醇：分析纯。4.675%乙醇：见附录A中的A.4.7阳性对照：感染了CMNV的断组织或细胞培养物或含有日的片段的核酸，一80保存。4.8阴性对照：不含CMNV的对虾组织或细胞培养物，一80保存。4.9空白对照：可用RNase-f
4、ree水作为空白对照。4.10dNTP(各2.5mmol/L):含dATP、dTTP、dGTP、dCTP各2.5mmol/L的混合物，-20保存。4.11dNTP(各10mmol/L):含dATP、dTTP、dGTP、dCTP各10mmol/L的混合物，-20保存。4.12dNTP(各20mmol/L):含dATP、dTTP、dCTP、dGTP各20mmol/L,见A.2,-20保存。4.13MMLV逆转录酶(200U/L):商品化试剂，一20保存，或其他等效逆转录酶。4.145MMLV逆转录酶缓冲液：商品化试剂，一20保存，或其他等效缓冲液。4.15 Tag DNA聚合酶(5U/L):商品化试剂，一20保存，或其他等效DNA聚合酶4.1610PCR缓冲液：商品化试剂，随Taq DNA聚合酶提供，不含Mg2+,一20保存，或其等效缓冲液。
