1、以正式出版文本为准I C S6 5.0 2 0.0 1C C SB1 6中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 3 8 12 0 2 1 膨果苋检疫鉴定方法D e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f a m a r a n t h u s d e f l e x u sL.2 0 2 1-0 6-1 8发布2 0 2 2-0 1-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准膨果苋检疫鉴定方法S N/T 5 3 8 12 0 2 1*中国海关出版社有限公司出版发行北
2、京市朝阳区东四环南路甲1号(1 0 0 0 2 3)编辑部:(0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2-7 5 3 1网址 w ww.c u s t o m s k b.c o m/b o o k中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本8 8 01 2 3 0 1/1 6 印张1.2 5 字数3 7千字2 0 2 1年7月第一版 2 0 2 1年7月第一次印刷印数 15 0 0*书号:1 5 5 1 7 56 7 5 定价2 0.0 0元以正式出版文本为准前 言 本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1 部分:标准化文件的结构和起草规则 的规则起草。本文件由中华人民共和国
3、海关总署提出并归口。本文件起草单位:中国检验检疫科学研究院、福州海关技术中心、二连海关技术中心、青岛海关技术中心、无锡海关综合技术中心、中华人民共和国银川海关、广州海关技术中心、南通海关综合技术中心。本文件主要起草人:徐晗、潘绪斌、虞赟、袁淑珍、邵秀玲、孙旻旻、胡诗瑶、吴海荣、孙民琴。S N/T5 3 8 12 0 2 1以正式出版文本为准以正式出版文本为准膨果苋检疫鉴定方法1 范围本文件规定了膨果苋(Am a r a n t h u s d e l f l e x u s L.)检疫鉴定方法。本文件适用于膨果苋检疫鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不
4、可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。S N/T 1 1 9 3 基因检验实验室技术要求S N/T 3 7 1 0 异株苋亚属检疫鉴定方法S N/T 4 7 1 5 杂草采集、保存和制作规范3 术语、定义和缩略语3.1 术语和定义S N/T 3 7 1 0界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1.1胞果 U t r i c l e 干果的一种,又称囊果,由合生心皮形成的一类果实,具一枚种子。成熟时,果皮薄且干燥,疏松地包围种子,极易与种子分离。3.1.2苞片 B r a c t 在花或花序基部的退
5、化的单片或数片叶或叶状结构,是介于正常叶和花之间的一种变态叶,有保护花芽或果实的作用。3.1.3高光谱 H y p e r s p e c t r a l 光谱分辨率优于/1 0 0。其光谱分辨率在可见光到短波红外波段可达纳米(n m)数量级,通常具有波段多的特点,光谱通道数多达数十甚至数百个以上,而且各光谱通道间往往是连续的。3.2 缩略语下列缩略语适用于本文件。P C R:p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n,聚合酶链式反应。D NA:d e o x y r i b o n u l e i c a c i d,脱氧核糖核酸。I T S:
6、i n t e r n a l t r a n s c r i b e d s p a c e r s 1 a n d 2 a n d t h e i n t e r v e n i n g 5.8 S r i b o s o m a l g e n e,核糖体D NA内转录间隔区1和内转录间隔区2,以及5.8 S核糖体基因。T A E:T r i s a c e t a t e-E D T A b u f f e r,T r i s-乙酸电泳缓冲液。1S N/T5 3 8 12 0 2 1以正式出版文本为准4 膨果苋基本信息学名:Am a r a n t h u s d e f l e x
7、u s L.英文名:l a r g e f r u i t a m a r a n t h,A r g e n t i n a a m a r a n t h,d e f l e x e d a m a r a n t h,l o w a m a r a n t h分类地位:双子叶植物纲M a g n o l i o p s i d a,石竹目C a r y o p h y l l a l e s,苋科Am a r a n t h a c e a e J u s s i e u,苋属Am a r a n t h u s L.,白苋亚属Am a r a n t h u s s u b g e n
8、.A l b e r s i a(K u n t h)G r e n.&G o d r.有害生物信息参见附录A。5 方法原理 膨果苋植株、花序、花、胞果和种子等形态特征是鉴定该种的主要依据,基于D NA条形码鉴定的分子生物学方法作为形态学鉴定的辅助手段。当植物体组织完好,在花果期,具备花等繁殖器官,可仅使用形态学鉴定方法。当植物体组织不完整,在幼苗期,或仅有种子、叶片等部分组织时,需采用形态学和分子生物学相结合的鉴定方法。种子鉴定可选择性参考高光谱特征(参见附录B)。6 器具和试剂6.1 仪器 体视显微镜、电子天平(感量0.0 0 1 k g,0.0 0 1 g)、液氮罐、纯水机、电子天平、水
9、浴锅、高压灭菌器、高温干燥箱、离心机、电泳仪、P C R仪、电泳槽、凝胶成像系统、高通量研磨机、涡旋震荡器等。6.2 设备 电动筛或套筛、解剖刀、解剖针、放大镜、直尺、镊子、小毛笔、培养皿、指形管、广口瓶、白瓷盘、分样台、分样板、样品铲、样品袋、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、可调移液器(1 0 0 0 L,2 0 0 L,1 0 0 L,2 0 L,1 0 L,2.5 L)、可调移液器枪头等。6.3 试剂 防虫剂、樟脑精、干燥剂。植物基因组提取试剂盒、P C R反应体系常用试剂、T A E电泳缓冲液和核酸分子量标准物质等。7 检测7.1 样品检测7.1.1 口岸监测 在检疫现场采集植株鉴定用样
10、品,要求植株完整,形态学特征完好。花部鉴定用样品,要求处于果实成熟期、外型完整。种子鉴定用样品,要求发育成熟、籽粒饱满、外型完好。7.1.2 植物产品检测 将现场检疫抽取的送检样品充分混匀,制成平均样品。采用四分法,视样品多少取平均样品的二分之一至四分之三(较少样品时)作为试验样品,称取其重量并记录,每份试验样品不少于1 k g,剩余的平2S N/T5 3 8 12 0 2 1以正式出版文本为准均样品加贴标签作为保留样品保存。送检样品不足1 k g的全部检测。7.1.3 胞果和种子过筛检验 根据样品个体的直径确定套筛的规格,从大到小依次套上不同孔径的规格筛并加上底筛,将适量样品倒入规格筛的上层
11、内,盖上筛盖,用回旋法过筛(或用电动筛振荡),使样品充分分离,把过筛的筛上物和筛下物分别倒入白瓷盘内,用镊子挑取杂草籽实,放于培养皿内。混杂于植物原粮和种子中的苋属胞果或种子,一般在孔径为5 mm筛下物中获得。当样品量少时,也可将全部样品放入白瓷盘中进行人工挑检。7.2 镜检在解剖镜或放大镜下镜检。进行植株花部特征和胞果内部特征观察时,辅以解剖刀、解剖针等工具。8 鉴定方法8.1 形态学鉴定8.1.1 苋属 一年或短时多年生草本,茎直立或伏卧。叶互生,全缘,有叶柄。花单性,雌雄同株或异株,腋生或顶生,聚生成单一或圆锥状穗状花序;每花有1苞片及2小苞片,干膜质;花被片0-5,大小相等或不等,绿色
12、或着色,薄膜质,直立或向外反折,在果期直立,间或在花期后变硬或基部加厚;雄蕊5,少数1-4,花丝钻状或丝状,基部离生,花药2室;无退化雄蕊;子房具1直生胚珠,花柱极短或缺,柱头2-3,钻状或条形,宿存,内面有细齿或微硬毛。胞果球形或卵形,侧扁,膜质,不裂、周裂或不规则开裂。种子双凸镜状,侧扁,黑色、深褐色、红褐色或褐色,平滑,边缘锐或钝,具光泽。该属含苋亚属、白苋亚属和异株苋亚属,约7 4种,除南北两极外,均有分布。我国有2 0余种。8.1.2 白苋亚属 一年生或短时多年生草本,雌雄同株,平卧或匍匐,少直立。茎光滑或近光滑,有时被短柔毛。叶互生,具柄,形状多变,线形至椭圆形,基部渐狭或楔形,先
13、端具小短尖。花序多为腋生团簇状或短穗状,少见顶生短穗状。雄花花被片(1-)3-5,雄蕊(1-)3-5。雌花花被片(1-)3-5,柱头2-3。胞果不裂、不规则开裂或周裂。约5 2种,分布广泛。我国约1 2种。8.1.3 膨果苋8.1.4.1 植株和茎 植株远端被毛或成熟期变光滑。茎倾斜上升或匍匐,基部多分枝,从根茎部向外呈辐射状,通常1 0 c m5 0 c m 高。8.1.4.2 叶 叶柄约为叶片长度的1/2;叶片菱状卵形、或卵形至披针形,长1 c m 2 c m,宽0.5 c m 1 c m,基部渐狭或楔形,边全缘、平滑或略皱缩,先端近急尖、钝状或微凹至浅凹缺,具小短尖。3S N/T5 3
14、8 12 0 2 1以正式出版文本为准8.1.4.3 花序 顶生圆锥花序三角锥状,直立,密生厚实,远端无叶,腋生花序团簇状。8.1.4.4 苞片 苞片线形,长0.5 mm1 mm,约为花被片长度的1/2。8.1.4.5 花被片 雌花花被片2-3,狭椭圆形或矩圆状披针形,不具爪,等长或近等长,长1.2 mm2 mm,先端急尖;花柱分支直立,柱头3。雄花簇生于花序先端,花被片2-3;雄蕊2-3。8.1.4.6 胞果 表面具2-3条纵肋,略微膨大,椭圆体型,长2 mm3 mm,明显长于花被片,表面光滑,不开裂。8.1.4.7 种子 双凸透镜状,椭圆形,长1 mm1.2 mm,具明显环边,深褐色至黑色
15、,种脐歪斜,下凹。8.2 分子生物学鉴定8.2.1 D N A提取及浓度测定 使用常见商品化试剂盒提取膨果苋基因组D NA。用以提取核酸的植物组织用量参照所采用商品化试剂盒使用说明。用紫外分光光度计或核酸浓度测定仪检测所提取核酸浓度,浓度以达到8.2.2步骤中使用的商品化P C R试剂盒中要求的D NA模板用量为准。8.2.2 P C R及测序 膨果苋的P C R步骤及测序,参见附录C,防污染措施应符合S N/T 1 1 9 3的规定。9 结果判定9.1 植株鉴定 植物体各部分组织完整,符合 8.1 及附录D、附录 E、附录 F 和附录G 所述苋属植株、花序、花、胞果等形态特征,可判定为膨果苋
16、。9.2 种子及部分组织鉴定 符合8.1及附录D、附录E、附录F和附录G所述膨果苋种子或叶片等部分组织形态特征,并与附录H 所列膨果苋I T S参考序列一致性在9 9%以上时,可判定为膨果苋。1 0 标本和样本的保存和处理 杂草标本的保存方法按照S N/T 4 7 1 5的规定。4S N/T5 3 8 12 0 2 1以正式出版文本为准附 录 A(资料性)膨果苋相关信息A.1 地理分布 原产南美洲阿根廷、玻利维亚、巴西和秘鲁等地,现入侵于欧洲西班牙、德国、法国等2 4个国家及地区。北美洲美国东西部沿海地区,中美洲墨西哥,非洲摩洛哥和南非,亚洲日本、印度、以色列和土耳其,以及大洋洲均有分布。中国无分布。A.2 经济危害 为害农田、牧草(苜蓿)、果园(柑橘、甘蔗)等经济作物。适生性强,与作物竞争生长。株产籽量高,一旦定殖难以防除。易富集亚硝酸盐,毒害牲畜。被国际应用生物科学中心(C A B I n t e r n a t i o n a l)入侵种数据库收录。A.3 生物学特性及传播途径 一年生或短时多年生苋属杂草。喜光照、耐寒,喜水分充足的砂质土。常见于各种人工干扰生境,如农田、果园、垃
