1、中华人民共和国国家计量技术规范J J F2 0 2 32 0 2 3黄曲霉毒素快速检测仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rR a p i dA f l a t o x i nA n a l y z e r s 2 0 2 3-0 3-1 5发布2 0 2 3-0 9-1 5实施国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布黄曲霉毒素快速检测仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rR a p i dA f l a t o x i nA n a l y
2、 z e r sJ J F2 0 2 32 0 2 3 归 口 单 位:全国物理化学计量技术委员会 主要起草单位:中国计量科学研究院 参加起草单位:北京市计量检测科学研究院国家粮食和物资储备局科学研究院 本规范委托全国物理化学计量技术委员会负责解释J J F2 0 2 32 0 2 本规范主要起草人:马 康(中国计量科学研究院)赵海波(北京市计量检测科学研究院)参加起草人:张宜文(北京市计量检测科学研究院)王松雪(国家粮食和物资储备局科学研究院)J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载目 录引言()1 范围(1)2 引用文件(1)3 术
3、语(1)4 概述(1)5 计量特性(2)5.1 浓度示值误差(2)5.2 测量重复性(2)5.3 检出限(2)6 校准条件(2)6.1 环境条件(2)6.2 测量标准及其他设备(2)7 校准项目和校准方法(2)7.1 校准前准备工作(2)7.2 浓度示值误差(3)7.3 测量重复性(3)7.4 检出限(3)8 校准结果表达(3)9 复校时间间隔(4)附录A 系列标准溶液的制备及使用方法(5)附录B 校准原始记录参考格式(6)附录C 校准证书内页参考格式(8)附录D 仪器示值误差测量不确定度评定示例(9)J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标
4、准下载引 言本规范依据J J F1 0 7 12 0 1 0 国家计量校准规范编写规则、J J F1 0 0 12 0 1 1 通用计量术语及定义、J J F1 0 5 9.12 0 1 2 测量不确定度评定与表示的相关规定编写。本规范主要参考了G B2 7 6 12 0 1 7 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量中黄曲霉毒素的限量要求;L S/T6 4 0 22 0 1 7 粮油检验 设备和方法标准适用性验证及结果评价一般原则。本规范为首次发布。J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载黄曲霉毒素快速检测仪校准规范1 范围本规范适用于
5、基于酶联免疫或免疫层析(胶体金/荧光)原理定量检测黄曲霉毒素快速检测仪的校准。2 引用文件本规范引用了下列文件:G B2 7 6 12 0 1 7 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量L S/T6 4 0 22 0 1 7 粮油检验 设备和方法标准适用性验证及结果评价一般原则凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3 术语下列术语和定义适用于本文件。3.1 酶联免疫分析法 e n z y m e-l i n k e d i mm u n o s o r b e n t a s s a y,E L I S A采用间接竞
6、争酶标原理,将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。3.2 胶体金免疫层析法 c o l l o i d a l g o l d i mm u n o c h r o m a t o g r a p h ya s s a y采用竞争抑制免疫层析的原理,样本在层析过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,进行免疫层析的定性和定量检测方法。4 概述黄曲霉毒素快速检测仪(以下简称检测仪)主要用于测定粮食、饲料、中药、乳制品等中的黄曲霉毒素含量。其检测原理分为两种:一是E L I S A法,样本中的黄曲霉毒素与酶标板上的黄曲霉抗原竞争黄曲
7、霉毒素的抗体,用底物显色后,样本所对应微孔的吸光度减小,吸光度值与样本中的黄曲霉毒素含量呈负相关;二是免疫层析(胶体金/荧光)法,样品中的黄曲霉毒素在层析的过程中与胶体金/荧光标记的特异性抗体结合,从而抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线上的黄曲霉毒素偶联物的结合,使得检测线显色或荧光强度降低,显色或荧光强度与样本中的黄曲霉毒素含量相关。检测仪由光路系统、图像传感器或光电传感器、试剂包(酶联免疫试剂盒或免疫层析试纸条/卡)、信号处理系统和数据显示系统组成,其结构如图1所示。1J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载图1 黄曲霉毒素快速检测仪的结
8、构示意图5 计量特性5.1 浓度示值误差不超过2 0%。5.2 测量重复性不大于1 0%。5.3 检出限不大于2g/L。注:本技术指标仅作为参考,不作为合格性判定。6 校准条件6.1 环境条件6.1.1 环境温度:(1 53 0)。6.1.2 相对湿度:1 0%8 0%。6.1.3 供电电源:(2 2 02 2)V,(5 01)H z。6.1.4 应无粉尘、振动及电磁场干扰。6.2 测量标准及其他设备6.2.1 标准物质采用国家有证黄曲霉毒素B1溶液标准物质,其相对扩展不确定度应不大于5%(k=2)。6.2.2 容量瓶和移液器容量瓶符合A级要求,移液器检定合格。6.2.3 甲醇色谱级。7 校准
9、项目和校准方法校准项目可根据被校仪器的预期用途选择使用。7.1 校准前准备工作根据使用说明书,检查检测仪功能及试剂包是否正常。使用试剂包进行检测时,按说明书要求升至室温或在恒温孵育器中恒温。按照附录A要求配制系列校准用标准2J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载溶液。7.2 浓度示值误差依据使用说明书,将配制浓度为5.0g/L、1 0.0g/L和2 0.0g/L的黄曲霉毒素B1标准溶液用试剂包进行处理。将处理后的样本放入被校检测仪中,读取仪器的浓度示值,每个浓度重复试验7次,按公式(1)计算检测仪各浓度校准点的示值误差。c=ci-cs
10、cs1 0 0%(1)式中:c 浓度示值误差;ci 7次测量结果的平均值,g/L;cs 标准溶液的浓度值,g/L。7.3 测量重复性测量重复性:采用7.2中浓度为5.0g/L黄曲霉毒素B1标准溶液的7次测量数据,按照公式(2)计算相对标准偏差sr,即为检测仪的测量重复性。sr=1cni=1(ci-c)2n-11 0 0%(2)式中:sr 相对标准偏差;ci 检测仪各次的测量值,g/L;c 标准溶液7次测量结果的平均值,g/L;n 测量次数,n=7。7.4 检出限用被校检测仪连续测量空白样品(如甲醇)1 0次,计算测量结果的标准偏差,按公式(3)计算检测仪的检出限。LOD=c0+3s(3)式中:
11、L O D 检出限,g/L;c0 空白样品1 0次测量结果的平均值,g/L;s 1 0次测量结果的标准偏差,g/L。8 校准结果表达校准结果应在证书中反映。校准证书内页格式见附录C,校准证书应至少应包含以下信息:a)标题:“校准证书”;b)实验室名称和地址;c)进行校准的地点(如果与实验室地址不同);d)证书的唯一性标识(如编号),每页及总页数的标识;3J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载e)客户的名称和地址;f)被校对象的描述和明确标识;g)进行校准的日期,如果与校准结果的有效性和应用有关时,应说明被校对象的接收日期;h)校准所依
12、据的技术规范的标识,包括名称及代号;i)本次校准所用测量标准的溯源性及有效性说明;j)校准环境的描述;k)校准结果及其测量不确定度的说明;l)对校准规范的偏离的说明;m)校准证书或校准报告签发人的签名、职务或等效标识;n)校准结果仅对被校对象有效的声明;o)未经实验室书面批准,不得部分复制证书的说明。9 复校时间间隔由于复校时间时隔的长短是由仪器的使用情况、使用者、仪器本身质量等因素所决定的,因此检测仪的复校时间间隔由送校单位根据使用情况确定,建议不超过1年。当检测仪更换了配件及修理后,或对其检测数据有怀疑时,应及时校准。4J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f
13、x w.c o m 标准下载附录A系列标准溶液的制备及使用方法使用国家有证黄曲霉毒素B1溶液标准物质稀释配制的系列标准溶液,建议现用现配。A.1 配制用移液器准确移取表A.1所示不同体积的国家有证黄曲霉毒素B1溶液标准物质 如G BW(E)1 0 0 3 0 2,1.9 6g/m L,至1 0m L容量瓶中,用甲醇稀释至刻度并摇匀,即可得到不同浓度黄曲霉毒素B1系列标准溶液,如表A.1所示。表A.1 黄曲霉毒素B1系列标准溶液的配制浓度标准溶液序号取1.9 6g/m L有证溶液标准物质体积/L最终定容体积m L配制标准溶液浓度值g/L12 51 05.025 11 01 0.031 0 21
14、02 0.0A.2 标准物质移液体积的计算配制一定体积的黄曲霉毒素B1系列标准溶液,所移取的国家有证黄曲霉毒素B1溶液标准物质的体积Vi按式(A.1)计算:Vi=cs,iVc10 0 0(A.1)式中:Vi 移取的国家有证黄曲霉毒素B1溶液标准物质的体积,L;cs,i 配制的标准溶液浓度值,g/L;V 配制的标准溶液定容体积,m L;c 国家有证黄曲霉毒素B1溶液标准物质浓度,g/m L。5J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载附录B校准原始记录参考格式记录编号:证书编号:委托单位单位地址校准地点仪器型号生产厂家仪器编号仪器量程试剂包
15、测量范围试剂包批次校准日期校准依据环境温度相对湿度校准员核验员校准用测量标准及其他设备1.校准前准备工作 是否就绪(是:否:)2.浓度示值误差标准溶液浓度g/L仪器示值/(g/L)平均值/(g/L)示值误差/%相对不确定度(k=2)5.01 0.06J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载表(续)标准溶液浓度g/L仪器示值/(g/L)平均值/(g/L)示值误差/%相对不确定度(k=2)2 0.0测量重复性平均值g/L标准偏差/(g/L)相对标准偏差%3.检出限次数12345空白样品测量值/(g/L)次数67891 0空白样品测量值/(g
16、/L)平均值/(g/L)标准偏差/(g/L)检出限/(g/L)浓度示值误差的测量不确定度:7J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载附录C校准证书内页参考格式1.浓度示值误差标准溶液浓度g/L测量平均值g/L示值误差/%扩展不确定度(k=2)5.01 0.02 0.02.测量重复性/%3.检出限/(g/L)8J J F2 0 2 32 0 2 3学兔兔 w w w.b z f x w.c o m 标准下载附录D仪器示值误差测量不确定度评定示例D.1 校准条件D.1.1 环境条件:2 2,相对湿度4 0%。D.1.2 校准用标准物质:黄曲霉毒素B1溶液标准物质 G BW(E)1 0 0 3 0 2,标称值为1.9 6g/m L,U=0.0 9g/m L(k=2)。D.1.3 被校准设备:黄曲霉毒素快速检测仪。D.2 测量方法及测量模型按照附录A配制浓度为5.0g/L、1 0.0g/L、2 0.0g/L系列标准溶液,使用检测仪分别测量相应浓度点的示值误差。测量时应参照仪器说明书,采用配套试剂并孵育或恒温至相应温度。每个标准溶液测定7
