1、ICS65.020.01CCS B17团体标准T/SDNY 0372022蔬菜中甲拌磷和辛硫磷快速检测光热读卡仪法Rapid detection of phorate and phoxim in vegetablesPhotothermal card reader method2022-09-28 发布2022-11-01 实施全国团体标准信息平台T/SDNY 0372022I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂或材料.15.1试剂.15.2标准品.15.3溶液配制.15.4标准溶液配制.25.5材料.26仪器和设备.27分析步骤.27.1试样制备.27
2、.2试样提取.27.3测定步骤.27.4质控试验.28结果的表述计算.38.1结果计算.38.2结果判定.38.3质控试验结果.39性能指标.39.1检出限.39.2灵敏度.39.3特异性.49.4假阴性率.49.5假阳性率.410其它.4附录 A（资料性）2 种农药中英文名称、CAS 号及分子式信息.5附录 B（资料性）快速检测方法性能指标计算方法.6附录 C（资料性）T 值结果.7全国团体标准信息平台T/SDNY 0372022II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识
3、别专利的责任。本文件由山东省农药检定所提出。本文件由山东省农药行业协会归口。本文件起草单位：山东省农药检定所、山东师范大学、山东省现代农业化学产业技术研究院、莱西市检验检测中心。本文件主要起草人：张鸿雁、韩帅兵、周力、张耀中、吴新、杜淑媛、于淼、邢冰寒、薛雯、王海燕、宿培萌、吕焕焕、张萍、马和庆、赵富豪、刘兴举、张保建。本标准首次发布日期：2022年9月28日全国团体标准信息平台T/SDNY 03720221蔬菜中甲拌磷和辛硫磷快速检测光热读卡仪法1范围本文件规定了蔬菜中甲拌磷、辛硫磷光热读卡仪法。本文件适用于韭菜、芹菜、豇豆、姜等蔬菜中甲拌磷、辛硫磷的快速测定。2规范性引用文件下列文件中的内
4、容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理本方法采用胶体金光热效应原理。样品中的甲拌磷、辛硫磷与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，胶体金在532nm的激光照射下，表面等离子体共振效应，将吸收的光能转化成热能，从而使温度升高。通过检测线（T线）与控制线（C线）的温度变化比较，对样品
5、中的待测组分进行定性判定。5试剂或材料5.1试剂5.1.1甲醇（CH3OH，65-56-1）。5.1.2氯化钠（NaCl，7647-14-5）。5.1.3氯化钾（KCl，7447-40-7）。5.1.4磷酸二氢钾（KH2PO4，7778-77-0）。5.1.5十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO412H2O，10039-32-4）。5.1.6水(H2O，7732-18-5,GB/T 6682，三级水)。5.2标准品甲拌磷、辛硫磷标准品：纯度95%，化合物中英文名称及CAS号等信息参照附录A。5.3溶液配制全国团体标准信息平台T/SDNY 037202225.3.1磷酸盐缓冲液（20mmol/L，p
6、H=7.4）：分别称取 16.0g 氯化钠、0.4g 氯化钾、0.4g 磷酸二氢钾、5.8g 十二水合磷酸氢二钠，于 1000mL 烧杯中，加水充分搅拌溶解后，转移定容至 1000mL。5.3.2甲醇磷酸盐（1+9）溶液：准确量取 10mL 甲醇，加入 90mL 磷酸盐缓冲液（5.3.1）中，混匀。5.4标准溶液配制5.4.1标准储备液（1000mg/L）：准确称取甲拌磷、辛硫磷标准品（5.2）各约 10mg（精确至 0.1mg），用甲醇溶解，定容至 10mL，避光-18C 及以下条件保存，有效期 12 个月。5.4.2标准中间液（10mg/L）：准确吸取一定量标准储备溶液（5.4.1），用甲
7、醇稀释，定容至 10mL，避光-18C 及以下条件保存，有效期 1 个月。5.4.3标准工作液（1mg/L）：准确吸取一定量标准中间液（5.4.2），用甲醇稀释，定容至 10mL，05C冷藏避光保存，有效期 23 周。5.5材料5.5.1甲拌磷胶体金免疫层析试剂盒/检测卡（条）。5.5.2辛硫磷胶体金免疫层析试剂盒/检测卡（条）。6仪器和设备6.1电子天平：感量为 0.01g 和 0.01mg。6.2组织粉碎机。6.3涡旋混合器。6.4移液器：量程分别为 100L、200L、1mL 和 5mL。6.5离心机：转速4000r/min。6.6光热读卡仪：波长 532nm。7分析步骤7.1试样制备蔬
8、菜样品取样部位按GB 2763的规定执行，将适量（约200g）待测样品切碎混匀均一化制成匀浆，-18及以下条件保存。7.2试样提取准确称取制备后试样2g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入3mL甲醇磷酸盐（1+9）溶液（5.3.2），涡旋振荡1min，4000r/min室温离心2min，取上清液即为待测液。7.3测定步骤吸取120L上述待测液于金标微孔中，上下抽吸58次至微孔的颗粒完全溶解，室温孵育3min5min，将试纸条插入金标微孔中反应8min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端样品垫，将试纸条置入光热读卡仪，将检测线（T线）与控制线（C线）置于532nm激光下照射50s，测定检
9、测线（T线）与控制线（C线）的温度变化值。7.4质控试验7.4.1试验要求全国团体标准信息平台T/SDNY 03720223每批试样应同时进行空白试验和加标质控试验。7.4.2空白试验称取空白试样，按照7.2和7.3步骤与样品同法操作。7.4.3加标质控试验7.4.3.1甲拌磷加标质控试验准确称取空白试样2g（精确至0.01g）置于15mL离心管中，加入20L甲拌磷标准工作液（5.4.3），使甲拌磷浓度为0.01mg/kg，充分混合静置30min，按照8.2和8.3步骤与样品同法操作。7.4.3.2辛硫磷加标质控试验准确称取空白试样2g（精确至0.01g）置于15mL离心管中，加入100L辛硫
10、磷标准工作液（5.4.3），使辛硫磷浓度为0.05mg/kg，充分混合静置30min，按照7.2和7.3步骤与样品同法操作。8结果的表述计算8.1结果计算见式（1）。=(1)式中：TT线在激光照射前后温度的变化值；CC线在激光照射前后温度的变化值。8.2结果判定当T值小于附表A.3对应T线值时，表示试样中含有甲拌磷、辛硫磷且其含量高于方法检出限，判定为阳性，阳性结果的试样需要重复检验2次以上；当T值大于附表A.3对应T线值时，表示试样中不含甲拌磷、辛硫磷或其含量低于方法检出限，判定为阴性。对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定农药含量。8.3质控试验结果空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验
11、测定结果应为阳性。否则表示不满足质控实验要求，该批样品结果无效。9性能指标9.1检出限甲拌磷在四种蔬菜中检出限为0.01mg/kg；辛硫磷在四种蔬菜中检出限为0.05mg/kg。9.2灵敏度应不小于95%。全国团体标准信息平台T/SDNY 037202249.3特异性应不小于95%。9.4假阴性率应不大于5%。9.5假阳性率应不大于5%。10其它当检测结果为阳性时，应使用GB 2763规定方法对结果进行确认。本方法为使用者提供快速检测依据，使用者在使用生产厂家提供的配套试剂、材料和分析步骤时，应对其进行验证，满足本方法规定的各项性能指标。全国团体标准信息平台T/SDNY 03720225AA附
12、录A（资料性）2 种农药中英文名称、CAS 号及分子式信息2种农药中英文名称、CAS号及分子式信息见表A.1。表 A.1 2 种农药中英文名称、CAS 号及分子式信息序号农药中文名农药英文名CAS号分子式1甲拌磷Phorate298-02-2C7H17O2PS32辛硫磷Phoxim14816-18-3C12H15N2O3PS全国团体标准信息平台T/SDNY 03720226BB附录B（资料性）快速检测方法性能指标计算方法快速检测方法性能指标计算方法见表B.1。表 B.1 快速检测方法性能指标计算方法样品情况a检测结果b总数阳性阴性阳性N11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N
13、21+N22总数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或 N.1+N.2显著性差异（2）2=（N12-N21-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%c（N11+N22）/(N1.+N2.)a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11 表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2 表示所有的第二列；N12 表示第一行，第二列。c为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。全国团体标准信息平台T/SDNY 03720227CC附录C（资料性）T 值结果T值结果见C.1。表 C.1 T 值结果序号基质农药中文名称T 线值1芹菜甲拌磷0.22辛硫磷0.43姜甲拌磷0.154辛硫磷0.85豇豆甲拌磷0.46辛硫磷0.47韭菜甲拌磷-0.38辛硫磷0.2全国团体标准信息平台
