1、 ICS 75.160.20 E 31 DB51 四川省地方标准 DB51/T 19182014 化妆品中甲醛含量的测定 柱前衍生高效液相色谱法 2014-12-22 发布 2015-01-01 实施四川省质量技术监督局 发 布 DB51/T 19182014 I 目 次 前 言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂和材料.1 5 仪器和设备.1 6 实验步骤.2 7 结果与计算.3 8 精密度.3 9 回收率.3 10 检出限.3 附录 A（资料性附录）标准品色谱图及吸收光谱图.4 DB51/T 19182014 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-200
2、9给出的规则起草。本标准由四川省质量技术监督局批准并归口，由成都产品质量检验研究院有限责任公司解释。本标准起草单位：成都产品质量检验研究院有限责任公司。本标准主要起草人：郭桦、李铭、刘高、李瑜、王晶、胡伟。DB51/T 19182014 1 化妆品中甲醛含量的测定 柱前衍生高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中甲醛的柱前衍生高效液相色谱测定方法。本标准适用于化妆品中甲醛含量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室
3、用水规格和试验方法 化妆品卫生规范 3 原理 用水萃取样品中的甲醛，萃取液中的甲醛与2，4-二硝基苯肼（2,4-Dinitrophenylhydrazine，DNPH）在弱酸性缓冲溶液中进行衍生化处理后，生成2，4-二硝基苯腙，在352 nm处，高效液相色谱法测定，外标法定量。4 试剂和材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682 所规定的三级水。4.1 乙腈：色谱纯；4.2 甲醛：37%-40%（质量分数）；4.3 乙酸钠；4.4 冰乙酸；4.5 缓冲溶液（pH3.6）：称取乙酸钠 5.1 g，加冰乙酸 20 mL，再加水稀释至 250 mL；4.6 2,4-二
4、硝基苯肼(DNPH)：纯度99%；4.7 DNPH 溶液（0.3%）：准确称取 DNPH 0.3 g，加乙腈溶解稀释定容至 100 mL，于阴凉处避光保存；4.8 甲醛标准贮备溶液：称取甲醛（4.2）约 5 g（称准至 0.001 g）定量转移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容并混匀（甲醛含量约为 2000 g/mL），按化妆品卫生规范规定的方法标定，此溶液在冰箱中可保存两月；4.9 甲醛标准工作溶液：准确移取适当体积的甲醛标准贮备液于容量瓶中，以水稀释至所需浓度，用时现配；4.10 微孔滤膜：0.45 m，有机相。5 仪器和设备 DB51/T 19182014 2 5.1 天平，称量精度
5、为 0.001 g；5.2 恒温水浴振荡器；5.3 离心机；5.4 漩涡混合器；5.5 高效液相色谱仪，配有紫外检测器(UVD)或二极管阵列检测器(DAD)；6 实验步骤 6.1 提取 6.1.1 脂溶性试样 准确称取试样 0.2 g（准确至 0.001 g）置于 10 mL 具塞塑料离心管中，加入纯水 4 mL，于漩涡混合器上混合使样品充分分散（分散时间1 min），加水定容至 5 ml，于 10 000 r/min 转速下离心 10 min，小心吸取下层清液待用（必要时过滤）。6.1.2 水溶性试样 准确称取试样 0.2 g（准确至 0.001 g），加水稀释定容至 5 mL，充分摇匀后过
6、滤，滤液待用。6.2 柱前衍生 取 10 mL 容量瓶，加入乙腈（4.1）3.0 mL、缓冲溶液（4.5）1.0 mL，混匀后加入上述滤液（6.1 滤液）V1 mL，DNPH 溶液（4.7）0.5 mL，用水稀释定容至刻度，于室温下在恒温水浴振荡器（5.2）中衍生 60 min 后，用 0.45 m 滤膜（4.10）过滤，滤液上液相色谱测定。如果浓度超出标准曲线范围，则适当减少滤液(6.1 滤液)取量。6.3 测定 6.3.1 液相色谱条件 a）色谱柱：C18柱，250 mm4.6 mm（内径），5 m，或者相当；b）流动相：乙腈十水(50+50)；c）流速：1.0 mL/min；d）柱温：3
7、5；e）检测波长：352 nm；f）进样量：10 L。6.3.2 标准工作曲线 根据试样中甲醛含量情况配制 6 个（含零点）适当浓度(范围 0.2 g/mL10.0 g/mL)的甲醛标准工作溶液(4.9)，按 6.2 同法进行衍生及过滤(均取 1mL 标液)，滤液上液相色谱测定。以峰面积或峰高对浓度(g/mL)作标准曲线，标准工作溶液及样液中甲醛衍生物的响应值均应在仪器线性范围内。在上述色谱条件下，甲醛标准品衍生物的液相色谱图和吸收光谱图见附录 A 中图 A.1 和 A.2。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定，保留时间定性，外标法定量。6.3.3 空白试验 除不加试样外，同法做空白试验。DB
8、51/T 19182014 3 7 结果与计算 样品中甲醛含量按（1）式计算：0()CCVXfm=.(1)式中：X样品中甲醛的含量，单位为毫克每千克；C标准曲线上查得的样液甲醛浓度，单位为微克每毫升；C0标准曲线上查得的空白试验的甲醛浓度，单位为微克每毫升；V提取液体积，单位为毫升；f衍生系数，是衍生所取标准工作溶液体积（1 毫升）与衍生所取提取液体积（V1）的比值（1/V1）；m试样的质量，单位为克。计算结果表示到小数点后两位。8 精密度 重复条件下获得的两次独立测定结果，相对偏差应5%。9 回收率 添加 10.0 mg/kg 浓度水平时，甲醛的回收率为 97.8%-102.4%；添加 50.0 mg/kg 浓度水平时，甲醛的回收率为 86.0%-101.8%。10 检出限 本方法甲醛的检出质量为0.02 ng。DB51/T 19182014
